一种组织工程肝脏模型的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种组织工程肝脏模型的制备方法，包括如下步骤：步骤一：进行种子细胞的培养、扩增；步骤二：准备模型构建的液体和基质；步骤三：进行细胞收集；步骤四：进行模型构建。该组织工程肝脏模型由原代肝细胞，内皮细胞和肝星状细胞组成，形成类似天然肝脏组织的胆管样结构，并具有白蛋白分泌和胆汁酸转运功能，细胞色素P450活性强，线粒体功能高；与单独培养的肝细胞相比，本发明专利技术构建的肝脏组织模型白蛋白和尿素表达水平有显著提高，并且组织活力可以在体外维持到28天，能够实现长期药物暴露，为基于体外细胞的肝毒性和药效评价提供了更敏感和准确的测试模型。

【技术实现步骤摘要】
一种组织工程肝脏模型的制备方法
本专利技术属于再生医学和组织工程
，具体涉及一种组织工程肝脏模型的制备方法。
技术介绍
肝脏作为人体最大的内脏器官，担负着很多重要的生理功能，如生物转化糖，蛋白质、脂类、维生素、激素的代谢，合成分泌胆汁等，被誉为人体的“代谢工厂”；肝脏也是人体的“解毒工厂”，是人体内最重要的药物及其代谢产物毒性体现的器官，因此肝脏成为药物毒性和代谢研究的重要靶器官。肝毒性是新药研发失败的重要原因，大约三分之二的进入Ⅲ期临床的药物因其肝毒性而不得不终止开发，药物肝毒性也是上市药物被回收的主要原因。因此，一种有效、可靠、准确、廉价的肝毒性检测工具是非常必要的。目前，用于药物肝毒性评价的模型包括体内模型和体外模型，体内评价模型通常是用各种实验动物，但是动物实验不仅周期长、耗费财力，并且与人类存在种属差异；体外评价常用的模型包括原代肝细胞模型、离体肝脏模型、肝脏切片模型、肝细胞系模型等。原代肝细胞模型，虽然其源自人类，具有与在体肝细胞相近的功能，但缺乏器官特异性的细胞间相互作用，丧失了其异质性和三维结构；与原代肝细胞模型相本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种组织工程肝脏模型的制备方法,其特征在于，包括如下步骤：/n步骤一：进行种子细胞的培养、扩增；/n步骤二：准备模型构建的液体和基质；/n步骤三：进行细胞收集；/n步骤四：进行模型构建。/n

【技术特征摘要】
1.一种组织工程肝脏模型的制备方法,其特征在于，包括如下步骤：
步骤一：进行种子细胞的培养、扩增；
步骤二：准备模型构建的液体和基质；
步骤三：进行细胞收集；
步骤四：进行模型构建。


2.如权利要求1所述的一种组织工程肝脏模型的制备方法，其特征在于,所述步骤一：进行种子细胞培养、扩增，包括如下步骤：
步骤1、基质胶制备：将Matrigel基质在4~8℃冰上过夜冻融后，用预冷的移液枪头混匀Matrigel基质成匀浆状；采用预冷的纯DMEM（按1:3~30稀释Matrigel基质；将稀释的Matrigel基质包被于所需的培养器皿中，包被量至少覆盖整个培养器皿的生长表面，室温下孵育1~3小时后去除未结合的Matrigel；
步骤2、原代肝细胞提取和培养：使用Hank's缓冲液漂洗肝脏组织，除去血污，然后将肝脏组织机械法剪碎，先用体积百分含量为0.01~0.1%的胶原酶37℃搅拌消化30~60分钟，再用体积百分含量为0.1~0.25%的胰酶37℃消化30~60分钟，用筛网过滤后制成单细胞悬液，进行活细胞计数，然后接种到Matrigel基质包被的培养皿中，加入肝细胞培养基，37℃，5%CO2培养，随后每24小时换一次液体；所用肝细胞培养基为：每500mlHBM基础培养基中，添加5~15%胎牛血清(FBS)，0.1~1.0×106mol胰岛素，5~15nghEGF，0.05~1.0×106mol氢化可的松和10~50ng肝细胞生长因子培养；
步骤3、人脐静脉内皮细胞培养：人脐静脉内皮细胞接种到Matrigel基质包被的培养皿中，加入内皮细胞培养基，37℃，5%CO2培养，每48小时换一次液，培养过程中注意避免使细胞铺板率过高；所用内皮细胞培养基为：每500mlEBM基础培养基中，添加5~1...

【专利技术属性】
技术研发人员：李润芝，张勇杰，金岩，胡成虎，卢永波，
申请(专利权)人：广东博溪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44