佛甲草抗旱基因SlATHB-7及其应用制造技术

本发明专利技术公开了佛甲草抗旱基因SlATHB‑7及其应用，佛甲草抗旱基因SlATHB‑7的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，实验证明，采用SlATHB‑7基因转染的拟南芥和烟草杨增强了对旱的耐受力，说明本发明专利技术提供的抗旱基因SlATHB‑7在改良作物抗旱能力方面起着重要的作用。

Slathb-7 and its application

【技术实现步骤摘要】
佛甲草抗旱基因SlATHB-7及其应用
本专利技术涉及一种佛甲草(Sedumlineare)抗旱基因SlATHB-7及其应用，属于分子生物学和生物

技术介绍
干旱是指长期晴天高温少雨或无雨，使空气和土壤中水分严重缺乏，降水量一般较常年明显偏少而形成的。干旱会影响人类社会和经济活动的各个方面，尤其是对农业生产的危害更为严重。干旱对农业生产的影响主要表现在降低粮食质量和品质，影响粮食安全，破坏土地结构，增加农业病虫害，森林火灾频繁出现等。干旱灾害的出现也会影响生态环境安全，会使江河湖泊干涸、生态环境恶化、动植物栖息范围缩小、空气质量和水质量降低。因此，亟需能转入植物中，增强植物对干旱的耐受性，对修复生态环境和提高土地利用率具有重要战略意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足，提供一种佛甲草抗旱基因SlATHB-7。本专利技术的第二个目的是提供含佛甲草抗旱基因SlATHB-7的克隆载体pJET1.2_SlATHB-7。本专利技术的第三个目的是提供含佛甲草抗旱基因SlATHB-7的表达载体pBI121_SlATHB-7。本专利技术的第四个目的是提供含有表达载体pBI121_SlATHB-7的宿主细胞。本专利技术的第五个目的是提供佛甲草抗旱基因SlATHB-7增强植物对旱的耐受性的应用。本专利技术的技术方案概述如下：佛甲草抗旱基因SlATHB-7，所述基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。含佛甲草抗旱基因SlATHB-7的克隆载体pJET1.2_SlATHB-7。含佛甲草抗旱基因SlATHB-7的表达载体pBI121_SlATHB-7。含表达载体pBI121_SlATHB-7的宿主细胞。佛甲草抗旱基因SlATHB-7增强植物对旱的耐受性的应用。所述植物优选拟南芥或烟草。本专利技术的优点：实验证明，采用SlATHB-7基因转染的拟南芥和烟草表现出对旱的耐受力提高，说明本专利技术提供的抗旱基因SlATHB-7在改良作物抗旱能力方面起着重要的作用。附图说明图1为佛甲草抗旱基因SlATHB-7克隆电泳示意图。图2为佛甲草抗旱基因SlATHB-7插入表达载体后示意图。图3为pBI121_SlATHB-7转化拟南芥后，转化子基因组PCR筛选结果(1-9号分别代表的是pBI121_SlATHB-7的单菌落菌液)。图4为pBI121_SlATHB-7转化拟南芥后，T3纯合体半定量PCR测定表达水平结果(1，2代表中表达的拟南芥；3号代表高表达量的拟南芥；4，5号代表低表达量的拟南芥)。图5为佛甲草抗旱基因SlATHB-7转基因拟南芥T3纯合体抗旱的实验效果照片。图6为佛甲草抗旱基因SlATHB-7转基因烟草抗旱的实验效果照片。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件以及手册中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。载体pJET1.2pJET1.2:Thermo,CloneJETPCRCloningKit#K1231。载体pBIl21购于中国质粒载体菌株细胞株基因保藏中心，http://biovector.blog.163.com/实施例11.佛甲草(Sedumlineare,简称Sl)SlATHB-7基因的克隆从用100g/L聚乙二醇(HO[CH2CHO]nH相对分子质量：697.661)水溶液进行抗旱处理的佛甲草(取自天津市滨海新区)中，使用植物RNeasyPlantMiniKit(TransgeneCode#E101-0150rxns)提取总RNA，并且利用EasyScriptFrist-StrandcDNASynSgesisSuperMix(TransgeneCode#AE301-03100rxns)反转录出cDNA。对cDNA进行高通量测序获得78407转录本(诺禾致源公司进行高通量测序)，通过与GO数据库进行对比分析，获得SlATHB-7基因的3’端序列，使用RACE技术(Takara-RACEkit)获得SlATHB-7基因的全长cDNA序列，将扩增得到的SlATHB-7基因进行测序分析，得到完整的SlATHB-7基因全长为1104bp(SEQIDNo.1)。由佛甲草SlATHB-7基因编码的蛋白质，是SEQIDNo.2所示的氨基酸序列。构建超表达载体时，则分别在特异性引物的5’端添加pBI121重组位点，上游5'–ACGGGGGACTCTAGAGGATCC-3'(SEQIDNo.3)，下游5'-CGATCGGGGAAATTCGAGCTC-3'(SEQIDNo.4)，以利于后期表达载体的构建。其具体步骤如下：1).cDNA第一链的合成用购买于金唯智的反转录试剂盒EasyScriptFirst-StrandCDNASynthesisSuperMix(Lot#10227)，以总RNA为模板，Oligo(dT)为引物，在E-Mix逆转录酶的作用下合成cDNA，反转录体系如下：反应条件：42℃30min，85℃5min。2).佛甲草SlATHB-7基因反转录质量PCR扩增检测用佛甲草Actin基因特异引物SEQIDNo.5:5'-GAACTTACTAGCCGACTG-3',SEQIDNo.6：5'-CCTCAAGCCTTATACGCAA-3'，PCR扩增，以验证反转录反应及RNA质量。PCR反应体系如下：反应条件：94℃3min；94℃30s，40℃30s，72℃50s，35cycles；72℃5min。3).佛甲草SlATHB-7基因片段PCR扩增根据已知cDNA序列利用primer软件设计SlATHB-7基因上下游引物:SEQIDNo.7:5'-CTGCCTACAACCTTTTACAACCA-3'，SEQIDNo.8:5'-GAACCTCAAGTCAAACTCTCCGT-3'，其PCR反应程序如下：反应条件：94℃3min；94℃30s，40℃30s，72℃50s，35cycles；72℃5min。PCR反应结束后，取1μLPCR产物进行1.0％琼脂糖凝胶电泳，检测PCR产物的质量(见图1)，其余用作产物的纯化回收。4).构建含有佛甲草SlATHB-7基因的克隆载体构建含有佛甲草SlATHB-7基因的载体pJET1.2_SlATHB-7胶回收纯化后的佛甲草SlATHB-7基因目的片段利用CloneJETPCRCloningKit(pJET1.2:Thermo,CloneJETPCRCloningKit#K1231)重组到载体pJET1.2上，得到载体pJET1.2_SlATHB-7。其反应程序如下：反应条件24℃,10min冰上静止30min，42℃热激1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.佛甲草抗旱基因SlATHB-7，其特征是所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.佛甲草抗旱基因SlATHB-7，其特征是所述基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.含权利要求1的佛甲草抗旱基因SlATHB-7的克隆载体pJET1.2_SlATHB-7。


3.含权利要求1的佛甲草抗旱基因SlATHB-7的表达载体pBI12...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨少辉，白婧平，杨合宇，岳靖，王洁华，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：天津;12