一种黄山木兰根系总RNA的提取方法技术

本发明专利技术提供了一种黄山木兰根系总RNA的提取方法，将黄山木兰根系组织在液氮中研磨成粉末，与抽提溶剂中混合并孵育得到孵育混合液；进行抽提处理得到抽提上清液；将抽提上清液与氯化锂溶液混合，静置过夜、离心处理得到总RNA沉淀；将总RNA沉淀溶解于SSTE缓冲液中，接着于氯仿/异戊醇混合液中进行抽提处理，得离心上清液；再与无水乙醇混合，‑70℃静置处理，离心处理得到沉淀物；将沉淀物通过乙醇溶液进行清洗得到清洁沉淀物；将清洁沉淀物敞口放置，加DEPC处理的超纯水得到黄山木兰根部总RNA。与现有技术相比，本发明专利技术能够成功提取黄山木兰根部总RNA，且纯度优异，提取率高。

A method of extracting total RNA from the root of Magnolia

【技术实现步骤摘要】
一种黄山木兰根系总RNA的提取方法
本专利技术涉及RNA的提取方法，具体涉及一种黄山木兰根系总RNA的提取方法。
技术介绍
黄山木兰(Magnoliacylindrica)是木兰科(Magnoliaceae)木兰属(Magnolia)落叶乔木，因模式标本采自黄山而得名。黄山木兰具有优良的材质，优美的树形，其花更具有药用价值，是重要的园林观赏植物和优良的芳香植物，为珍贵的国家三级保护濒危物种。因此从分子水平上探索黄山木兰种质资源具有十分重要的意义。黄山木兰是一种多年生木本植物，富含蛋白、多糖和多酚等次生代谢产物。而多糖易与RNA共沉淀，多酚易被氧化形成醌类物质与RNA不可逆的结合，这些次生代谢产物对RNA的提取造成了很大的干扰。而高质量的RNA提取是进行分子生物学实验的必要前提，如cDNA文库的构建、荧光定量PCR检测Northern杂交等。因此，探索黄山木兰高质量的RNA提取方法具有重要意义。现有的常用的RNA提取技术包括CTAB法、Trizol法、以及很多市场上销售的RNA提取试剂盒，但往往这些方法或多或少会存在一些时效性差等本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种黄山木兰根系总RNA的提取方法，其特征在于，所述提取方法包括以下步骤：/n1)、在液氮中将黄山木兰新鲜侧根研磨成粉末，再将获得的黄山木兰根系粉末与抽提溶剂混合，孵育，得到孵育混合液；/n2)、向步骤1)获得的孵育混合液中加入氯仿-异戊醇混合溶液，抽提离心，得到抽提上清液；/n3)、将步骤2)获得的抽提上清液与氯化锂溶液混合，静置过夜，离心处理，得到总RNA沉淀；/n4)、向步骤3)获得的总RNA沉淀中加入乙醇溶液，漂洗离心，得到沉淀物；/n5)、将步骤4)得到的沉淀物溶解于SSTE缓冲液中，然后与氯仿-异戊醇混合液混合，抽提离心，得离心上清液；/n6)、将步骤5)获得的离心上清液与无水...

【技术特征摘要】
1.一种黄山木兰根系总RNA的提取方法，其特征在于，所述提取方法包括以下步骤：
1)、在液氮中将黄山木兰新鲜侧根研磨成粉末，再将获得的黄山木兰根系粉末与抽提溶剂混合，孵育，得到孵育混合液；
2)、向步骤1)获得的孵育混合液中加入氯仿-异戊醇混合溶液，抽提离心，得到抽提上清液；
3)、将步骤2)获得的抽提上清液与氯化锂溶液混合，静置过夜，离心处理，得到总RNA沉淀；
4)、向步骤3)获得的总RNA沉淀中加入乙醇溶液，漂洗离心，得到沉淀物；
5)、将步骤4)得到的沉淀物溶解于SSTE缓冲液中，然后与氯仿-异戊醇混合液混合，抽提离心，得离心上清液；
6)、将步骤5)获得的离心上清液与无水乙醇混合，静置，离心，得到沉淀物；
7)、将步骤6)获得的沉淀物与乙醇溶液混合，漂洗离心，得到沉淀物，所得沉淀物再加入无水乙醇，漂洗离心，得到沉淀物；即为黄山木兰根系总RNA。


2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤1)中，所混合是指涡旋混合，涡旋混合时间不小于30s。


3.根据权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，步骤1)中，所述孵育条件为：孵育温度为65℃，孵育时间为3-5min；孵育期间涡旋3-5次，每次涡旋10s。


4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤2)具体为：向步骤1)获得的孵育混合液中加入氯仿-异戊...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨安娜，贺淑蕊，孙志艳，石亚冉，
申请(专利权)人：安徽师范大学，
类型：发明
国别省市：安徽;34