【技术实现步骤摘要】
一种适用于PCR扩增的粪便微生物基因组DNA的提取方法
本专利技术涉及肠道微生物的科学研究、临床诊断、药物开发等相关领域，具体涉及一种适用于PCR扩增的粪便微生物基因组DNA的提取方法。
技术介绍
人体肠道内覆盖了数量庞大、种类繁多的肠道菌群，它们和人体之间形成了互利共生的生存关系，对人体的健康状况具有举足轻重的影响力。近年随着对肠道菌群对人体健康影响研究的持续深入，人们已经发现了30多种疾病与肠内生态系统的关系。因此每个人的生理健康除了会受到自身基因调控的作用以外，还会受到其自身体内肠道菌群的调控。消化系统内的肠道菌群甚至已经被称为是“人类第二基因组”，其不仅与肠功能障碍和代谢相关，亦与肿瘤甚至精神神经系统疾病相关。目前已知人体肠道内的细菌种类大约有1000-1150种，其中优势菌种约为160种，在健康人体的正常生理状态下，其肠道内微生物种类分布处于相对平衡状态，但当人体在多种疾病的患病期间却会伴随有明显的菌群比例失调现象。近年随着高通量测序技术的日益完善，利用对微生物16SrRNA基因进行PCR扩增后建库测序的方...
【技术保护点】
1.一种适用于PCR扩增的粪便微生物基因组DNA的提取方法，其特征在于，该提取方法包括以下步骤：/n步骤S1：采集粪便样品；/n步骤S2：采用PBS缓冲液和乙醇对步骤S1所述的粪便样品多次进行离心重悬得到沉淀，利用Tris-HCl重悬溶解该沉淀，得到含粪便样品中微生物的菌液；/n步骤S3：在步骤S2所述的菌液中依次加入胶体金溶液和蛋白酶K，经过混匀加热离心后得到上清液，利用Tris-HCl对该上清液进行稀释，即提取得到可作为PCR扩增模板的微生物基因组DNA。/n
【技术特征摘要】
1.一种适用于PCR扩增的粪便微生物基因组DNA的提取方法，其特征在于，该提取方法包括以下步骤：
步骤S1：采集粪便样品；
步骤S2：采用PBS缓冲液和乙醇对步骤S1所述的粪便样品多次进行离心重悬得到沉淀，利用Tris-HCl重悬溶解该沉淀，得到含粪便样品中微生物的菌液；
步骤S3：在步骤S2所述的菌液中依次加入胶体金溶液和蛋白酶K，经过混匀加热离心后得到上清液，利用Tris-HCl对该上清液进行稀释，即提取得到可作为PCR扩增模板的微生物基因组DNA。
2.根据权利要求1所述的一种适用于PCR扩增的粪便微生物基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述步骤S1具体包括以下步骤：
步骤S1(a)：对取样刮勺及采样离心管进行高压灭菌处理；
步骤S1(b)：持灭菌后的取样刮勺将粪便装入灭菌后的离心管中，将离心管装填1/5-1/2的体积后立刻盖严，投入干冰中冻存，之后于-80℃超低温冰箱的环境中保存，得到粪便样品。
3.根据权利要求1所述的一种适用于PCR扩增的粪便微生物基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述步骤S2具体包括以下步骤：
步骤S2(a)：取一定量的粪便样品，向该样品中加入3.5-4.5℃预冷的PBS缓冲液，待样品融化后充分振荡混匀，在3.5-4.5℃下以80-120g的离心力离心12-18min，吸取上清液，将该上清液在3.5-4.5℃下以12000-14000g的离心力继续离心8-12min，弃上清液后得到管底沉淀；
步骤S2(b)：往步骤S2(a)所述的管底沉淀中加入3.5-4.5℃预冷的PBS缓冲液，在3.5-4.5℃下以12000-14000g的离心力重悬离心8-12min，弃上清液得到管底沉淀，在该管底沉淀中加入3.5-4.5℃预冷的乙醇，在3.5-4.5℃下以12000-14000g的离心力重悬离心8-12min，弃上清液得到管底沉淀，对该管底沉淀重复乙醇的重悬离心操作，得到最终的菌液沉淀；
步骤S2(c)：采用10mMTris-HCl对步骤S2(b)所得的菌液沉淀进行重悬溶解，得到菌液；
步骤S2(a)中所述粪便样品：步骤S2(a)中所述PBS缓冲液：步骤S2(b)中所述PBS缓冲液：步骤S2(b)中所述乙醇：步骤S2(c)中所述Tris-HCl的添加比例为1：(1/5-1/3)mL/mg：(1/40-5/40)mL/mg：(1/40-5/40)mL/mg：(4-6)μL/mg。
4.根据权利要求3所述的一种适用于PCR扩增的粪便微生物基因组DNA的提取方法，其特征在于，...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨文超，李鑫辉，潘加奎，
申请(专利权)人：上海健康医学院，解码上海生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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