一种β2-微球蛋白单克隆抗体的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种β2‑微球蛋白单克隆抗体的制备方法。该方法首先筛选出免疫原性相对较强的两个多肽表位序列分别作为第一、第二抗原表位，再在第一、第二抗原表位的碳端氨基酸上分别连接1个半胱氨酸，通过SMCC偶联方法将半胱氨酸的巯基与蓝钥蛋白的伯胺基偶联，获得体外合成的β2‑MG双表位多肽抗原；然后利用双表位多肽抗原对小鼠进行常规免疫、分离出脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合；最后筛选出阳性单克隆细胞，经腹腔注射及腹水回收提取出单克隆抗体。本发明专利技术通过对传统单表位抗原免疫方法进行改进，优化了抗原的免疫原性，缩短了免疫周期，提高了免疫阶段的血清效价，从而提升了抗β2‑MG的阳性单克隆抗体获得效率。

Preparation of monoclonal antibody against \u03b2 2-microglobulin

【技术实现步骤摘要】
一种β2-微球蛋白单克隆抗体的制备方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种β2-微球蛋白单克隆抗体的制备方法。
技术介绍
β2微球蛋白简称β2-MG，是一种源自淋巴细胞、血小板及多形核白细胞分泌的小分子球蛋白，由99个氨基酸组成的单链线性多肽，分子量为11800。β2-MG是HLA-Ⅰ类分子的组成部分，正常人血清中β2-MG的浓度处于0.5-2.0mg/L范围，β2-MG被排泄到体外的唯一脏器为肾脏，当发生肾功能不全时，因β2-MG的排泄障碍导致患者体内血清β2-MG浓度为正常人的60倍，当β2-MG在组织中过度沉积容易诱发β2-MG相关淀粉样病变。研究发现血清中β2-MG的水平与肾小球滤过率(GFR)呈现显著负相关，通过血清中β2-MG变化可以更早的发现肾小球功能受损【1】。目前β2-MG的临床检测方法主要为放射免疫分析法(RIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)，这些方法均需要β2-MG的单克隆或多克隆抗体。但是，由于β2-MG参与形成组织相容性复合体(MHCⅠ和MHCⅡ)或类似二聚体，导致人与小鼠的β2-MG具有一定同源性，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种β2-微球蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：/n(1)基于NCBI平台以及IEDB平台筛选出免疫原性相对较强的两个多肽表位序列IQRTPKIQVYSRHPAEN和YLLYYTEFTPTEK分别作为第一抗原表位和第二抗原表位；/n(2)在第一抗原表位的末端天冬酰胺N及第二抗原表位的末端酪氨酸Y上分别连接1个半胱氨酸Cys，然后利用SMCC偶联方法将半胱氨酸的巯基与蓝钥蛋白KLH的伯胺基偶联使得两个多肽表位序列同时连接到KLH分子上，作为体外合成的β2-MG双表位多肽抗原；/n(3)采用β2-MG双表位多肽抗原对8w龄BALb/C小鼠进行3次连续免疫后，在最后一次免疫3天...

【技术特征摘要】
1.一种β2-微球蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)基于NCBI平台以及IEDB平台筛选出免疫原性相对较强的两个多肽表位序列IQRTPKIQVYSRHPAEN和YLLYYTEFTPTEK分别作为第一抗原表位和第二抗原表位；
(2)在第一抗原表位的末端天冬酰胺N及第二抗原表位的末端酪氨酸Y上分别连接1个半胱氨酸Cys，然后利用SMCC偶联方法将半胱氨酸的巯基与蓝钥蛋白KLH的伯胺基偶联使得两个多肽表位序列同时连接到KLH分子上，作为体外合成的β2-MG双表位多肽抗原；
(3)采用β...

【专利技术属性】
技术研发人员：高健，陈旭华，汪渊，谌敦华，
申请(专利权)人：上海钹乐诗生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31