抗人CD147的单克隆抗体、表达载体、细胞株及其应用制造技术

本发明专利技术公开了抗人CD147的单克隆抗体、细胞株、表达载体及其应用。本发明专利技术抗体可用于制备抗体偶联药物，也可用于制备诊断和治疗CD147表达阳性疾病药物及其生物技术产品。

Monoclonal antibody, expression vector, cell line and application of anti-CD147

【技术实现步骤摘要】
抗人CD147的单克隆抗体、表达载体、细胞株及其应用
本专利技术涉及生物
，具体地说，本专利技术提供了三株抗CD147分子的人源化抗体抗人、相关细胞株、表达载体及其应用。
技术介绍
CD147曾有多种不同的命名，包括TCSF/EMMPRIN，M6，Basigin,Neurothelin,与小鼠Basing/gp42,大鼠OX-47/CE-9和鸡HT7/5A11等不同种属来源抗原有较高同源性，该基因最终被人类基因命名委员会HUGO确定为Basigin；而人类白细胞分化抗原协作组则将来自各实验室不同的命名统一为CD147，分属内皮细胞组。该分子是一种高度糖基化的、分子量为50～60kD的跨膜糖蛋白，属免疫球蛋白超家族(IgSF)成员。在人类，CD147共有269个氨基酸组成，可分为胞外区、跨膜区及胞内区。N端起始翻译后前21个残基为信号肽，22～205构成胞外区，206～229为跨膜区，具有典型的亮氨酸拉链结构，C端230～269为胞内区。已证实CD147在许多类型的人实体瘤，如肺癌、肝癌、宫颈癌、结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、食管癌、或胃癌中过度表达。既往研究表明，CD147分子是肿瘤发展过程重要的功能性膜蛋白，参与多种与癌症有关的现象，并且，多项回顾性研究还表明CD147分子在肿瘤组织中的表达强度与肿瘤病人的预后之间，存在着紧密的相关性。在非小细胞肺癌病人中，CD147表达增高的水平与病人的预后情况密切相关。因此，CD147分子已成为肿瘤治疗的新靶点，其中抗体药物“碘[131I]美妥昔单抗注射液—利卡汀”的研制成功，证明了该靶点成药的安全性和有效性。单克隆抗体(McAb)以其高特异性、高亲和力、毒副作用小、免疫原性低、体内作用时间长、可用体内自身免疫系统发挥疗效等优点，在许多疾病的诊疗中得到广泛应用，成为新型药物研制的一条有效途径。然而，鼠源McAb重复注入人体内会引起患者诱发人抗鼠抗体(humanantimouseantibody，HAMA)反应，出现全身过敏毒性反应并阻断抗体功效的发挥。
技术实现思路
基于现有技术的需求、不足和缺陷，本专利技术提供了抗人CD147的单克隆抗体、表达载体、细胞株及其应用。本专利技术提供的抗人CD147的单克隆抗体，该抗体的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列为：WBP247.hAb12抗体：重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:111所示序列或与SEQIDNO:111所示序列同源性为90％以上的序列，轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:113所示或与SEQIDNO:113所示序列同源性为90％以上的序列；WBP247.hAb4抗体：重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:103所示序列或与SEQIDNO:103所示序列同源性为90％以上的序列，轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:105所示序列或与SEQIDNO:105所示序列同源性为90％以上的序列；或者为，WBP247.hAb6抗体：重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:107所示序列或与SEQIDNO:107所示序列同源性为90％以上的序列，轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:109所示序列或与SEQIDNO:109所示序列同源性为90％以上的序列。进一步，本专利技术的WBP247.hAb12抗体的重链可变区的氨基酸序列所包含特定的抗原互补决定区CDR1、CDR2和CDR3的序列分别为SEQIDNO：16、SEQIDNO：17和SEQIDNO：18，轻链可变区的氨基酸序列所包含的特定的抗原互补决定区的CDR1、CDR2和CDR3序列分别为SEQIDNO：13、SEQIDNO：14和SEQIDNO：15。本专利技术抗体的重链可变区和轻链可变区的核苷酸序列为：WBP247.hAb12抗体：重链可变区的核苷酸序列为SEQIDNO:110所示序列或与SEQIDNO:110所示序列同源性为90％以上的序列；轻链可变区的核苷酸序列为SEQIDNO:112所示序列或与SEQIDNO:112所示序列同源性为90％以上的序列；WBP247.hAb4抗体：重链可变区的核苷酸序列为SEQIDNO:102所示序列或与SEQIDNO:102所示序列同源性为90％以上的序列；轻链可变区的核苷酸序列为SEQIDNO:104所示序列或与SEQIDNO:104所示序列同源性为90％以上的序列；或者为，WBP247.hAb6抗体：重链可变区的核苷酸序列为SEQIDNO:106所示序列或与SEQIDNO:106所示序列同源性为90％以上的序列；轻链可变区的核苷酸序列为SEQIDNO:108所示序列或与SEQIDNO:108所示序列同源性为90％以上的序列。另一方面，本专利技术提供的表达上述单克隆抗体的细胞株，该细胞株的命名和保藏编号为：表达WBP247.hAb12抗体的细胞株：该细胞株于2019年7月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学，邮编：430072，命名为：重组中国仓鼠卵巢细胞247C-B4Z2-01-C-005，保藏编号为：CCTCCNO.C2019147；表达WBP247.hAb4抗体的细胞株：该细胞株于2019年7月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学，邮编：430072，命名为：重组中国仓鼠卵巢细胞247A-B9Z4-02-C-T9，保藏编号为：CCTCCNO.C2019148；或者为，表达WBP247.hAb6抗体的细胞株：该细胞株于2019年7月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学，邮编：430072，命名为：重组中国仓鼠卵巢细胞247B-B9Z4-01-C-T9，保藏编号为：CCTCCNO.C2019149。本专利技术还提供了上述单克隆抗体的表达载体。进一步，本专利技术提供的上述单克隆抗体的制备方法。所提供的方法包括：a)获取权利要求1、2或3所述抗体的DNA分子序列；b)构建表达载体，该表达载体含有步骤a)中所述的DNA分子及表达该DNA分子的调控序列；c)用步骤b)中所述的表达载体转染宿主细胞，特别是哺乳动物细胞，优选的是CHO细胞；在适合所述宿主细胞的培养条件下培养；d)经过分离纯化步骤获得上述单克隆抗体。本专利技术抗体可降低鼠源McAb重复注入人体内引起的人抗鼠抗体(humanantimouseantibody，HAMA)反应，避免全身过敏毒性反应。通过ELISA分析法对所获得的抗体进行亲和力的分析，本专利技术人源化抗体的EC50值约为嵌合抗体WBP247.cAb1的一半，亲和力约高于嵌合抗体一倍。优选的，本专利技术的人源化抗体WBP247.hAb12具有的重链可变区氨基酸序列为SEQIDNO:111所示的序列，轻链可变区氨基酸序列为SEQIDNO:113所示的序列，表达制备的该抗体的EC50为0.002614ug/ml，较亲本的嵌合抗体WBP247.cAb1的EC50(0.0382nM)提高了约一本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.抗人CD147的单克隆抗体，该抗体的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列为：/nWBP247.hAb12抗体：重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:111所示序列或与SEQ IDNO:111所示序列同源性为90％以上的序列，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:113所示或与SEQ ID NO:113所示序列同源性为90％以上的序列；/nWBP247.hAb4抗体：重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:103所示序列或与SEQ IDNO:103所示序列同源性为90％以上的序列，轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:105所示序列或与SEQ ID NO:105所示序列同源性为90％以上的序列；/n或者为，/nWBP247.hAb6抗体：重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:107所示序列或与SEQ IDNO:107所示序列同源性为90％以上的序列，轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:109所示序列或与SEQ ID NO:109所示序列同源性为90％以上的序列。/n

【技术特征摘要】
1.抗人CD147的单克隆抗体，该抗体的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列为：
WBP247.hAb12抗体：重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:111所示序列或与SEQIDNO:111所示序列同源性为90％以上的序列，轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:113所示或与SEQIDNO:113所示序列同源性为90％以上的序列；
WBP247.hAb4抗体：重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:103所示序列或与SEQIDNO:103所示序列同源性为90％以上的序列，轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:105所示序列或与SEQIDNO:105所示序列同源性为90％以上的序列；
或者为，
WBP247.hAb6抗体：重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:107所示序列或与SEQIDNO:107所示序列同源性为90％以上的序列，轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:109所示序列或与SEQIDNO:109所示序列同源性为90％以上的序列。


2.如权利要求1所述的抗人CD147的单克隆抗体，其特征在于，WBP247.hAb12抗体的重链可变区的氨基酸序列所包含特定的抗原互补决定区CDR1、CDR2和CDR3的序列分别为SEQIDNO：16、SEQIDNO：17和SEQIDNO：18，轻链可变区的氨基酸序列所包含的特定的抗原互补决定区的CDR1、CDR2和CDR3序列分别为SEQIDNO：13、SEQIDNO：14和SEQIDNO：15。


3.抗人CD147的单克隆抗体，其特征在于，该抗体的重链可变区和轻链可变区的核苷酸序列为：
WBP247.hAb12抗体：重链可变区的核苷酸序列为SEQIDNO:110所示序列或与SEQIDNO:110所示序列同源性为90％以上的序列；轻链可变区的核苷酸序列为SEQIDNO:112所示序列或与SEQIDNO:112所示序列同源性为90％以上的序列；
WBP247.hAb4抗体：重链可变区的核苷酸序列为SEQIDNO:102所示序列或与SEQIDNO:102所示序列同源性为90％以上的序列；轻链可变区的核苷酸序列为SEQIDNO:104所示序列或与SEQIDNO:104所示序列同源性...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈志南，朱平，边惠洁，杨向民，张征，张阳，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61