一种总蛋白检测试剂及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种总蛋白检测试剂及其制备方法，所述检测试剂中创造性地添加了没食子酰葡萄糖，其与硫酸铜和总蛋白存在强烈的结合力，可以大幅提升铜离子对总蛋白的络合作用，进而提高检测精度，同时还能有效降低铜离子的使用量；另外，本发明专利技术所述检测试剂的储存稳定性也明显提升。本发明专利技术提供的制备方法优先将没食子酰葡萄糖与非离子表面活性剂混合，使两者分子链充分缠绕后，再与硫酸铜、酒石酸钾钠和部分水混合，没食子酰葡萄糖与铜离子产生络合，这样得到的络合产物既可溶于水，避免了产生氢氧化铜沉淀，又能极大增加络合物在水中的相容性，通过所述制备方法得到的检测试剂中各组分在体系中均能稳定存在，提高了其长时间使用的可靠性。

A reagent for total protein detection and its preparation

【技术实现步骤摘要】
一种总蛋白检测试剂及其制备方法
本专利技术涉及医学检验
，具体涉及一种总蛋白检测试剂及其制备方法。
技术介绍
总蛋白(TP)是检测肝功能代谢能力的一项重要指标，反映肝脏的储备能力。TP偏高会给人带来一定的危害，一般正常人的TP在60-80g/L之间，超出这个范围说明肝脏有一定的受损。临床上常用的总蛋白检测方法有比浊法、染料结合法和双缩脲比色法。比浊法是通过加入磺基水杨酸(SSA)、三氯乙酸(TCA)、钨酸于尿液中，使蛋白质沉淀形成一定的浊度，然后通过比浊的方法检测蛋白质含量。该方法准确度较差，抗干扰能力差。染料结合法分为直接法和沉淀法两类。直接法是通过染料与蛋白质结合时，其最大吸收峰的漂移来检测的，该方法所用的染料有考马斯亮蓝G-250、邻苯三酚红和苯甲紫等。CN105572117A公开了一种适合全自动生化分析仪的尿总蛋白检测试剂盒，该试剂盒中含有邻苯三酚红、甲醇、钼酸钠、琥珀酸、草酸钠、苯甲酸钠、十二烷基硫酸钠和牛血清白蛋白，该检测试剂是领苯邻苯三酚红的基础上，优化反应体系得到的，但仍存在精测精度低的问题。双缩脲比色法是利用蛋白质在碱性溶液中可与Cu2+形成紫色化合物，在一定浓度范围内，蛋白质浓度与紫色化合物颜色的深浅成正比。此方法简便、准备、重复性好，在较高浓度范围内呈现良好的线性关系，但当浓度偏低时，对总蛋白检测的精确度偏低，不能精确反应出更低浓度的总蛋白的情况。鉴于此，开发一种总蛋白检测试剂，使其具有更高精确度是目前亟待解决的困难。
技术实现思路
r>本专利技术的目的在于提供一种总蛋白检测试剂及其制备方法，所述检测试剂中创造性地添加了没食子酰葡萄糖，其与硫酸铜和总蛋白存在强烈的结合能力，可以大幅提升铜离子对总蛋白的络合能力，进而提高检测精度，同时还能有效降低铜离子的使用量。另外，本专利技术所述检测试剂的储存稳定性也得到明显提升。为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：第一方面，本专利技术提供了一种总蛋白检测试剂，所述总蛋白检测试剂包括如下组分；本专利技术首次将上述组分按特定的比例复配得到所述总蛋白检测试剂，由于所述检测试剂中创造性地添加了没食子酰葡萄糖，其与硫酸铜和总蛋白之间存在强烈的结合力，可以大幅提升铜离子对总蛋白的络合作用，进而提高检测精度，同时，由于还能有效降低铜离子的使用量。另外，本专利技术所述检测试剂的储存稳定性也得到明显提升。本专利技术所述总蛋白检测试剂选用了非离子表面活性剂，主要是考虑非离子表面活性剂可以帮助没食子酰葡萄糖在碱液中稳定存在，避免没食子酰葡萄糖在碱性条件下水解，同时又不阻碍其对蛋白质的络合。所述0.5-1.5g/L，例如可以是0.5g/L、0.6g/L、0.7g/L、0.8g/L、0.9g/L、1g/L、1.1g/L、1.2g/L、1.3g/L、1.4g/L或1.5g/L等。所述10-15g/L，例如可以是10g/L、10.5g/L、11g/L、11.5g/L、12g/L、12.5g/L、13g/L、13.5g/L、14g/L、14.5g/L或15g/L等。所述5-10g/L，例如可以是5g/L、5.5g/L、6g/L、6.5g/L、7g/L、7.5g/L、8g/L、8.5g/L、9g/L、9.5g/L或10g/L等。所述10-20g/L，例如可以是10g/L、11g/L、12g/L、13g/L、14g/L、15g/L、16g/L、17g/L、18g/L、19g/L或20g/L等。所述5-15g/L，例如可以是5g/L、5.4g/L、6g/L、6.6g/L、7g/L、7.5g/L、8g/L、8.5g/L、9g/L、9.5g/L、10g/L、10.5g/L、11g/L、11.5g/L、12g/L、12.5g/L、13g/L、13.5g/L、14g/L、14.5g/L或15g/L等。优选地，所述非离子表面活性剂选自烷基酚聚氧乙烯醚类表面活性剂，包括辛基酚聚氧乙烯醚和/或壬基酚聚氧乙烯醚，进一步优选辛基酚聚氧乙烯醚。本专利技术优选烷基酚聚氧乙烯醚类表面活性剂，是由于烷基酚聚氧乙烯醚类表面活性剂分子链上有苯环和烷氧基，与没食子酰葡萄糖中的苯环以及酚羟基能够相互作用，二者相容性好，且两者的分子链相互缠绕，能够避免没食子酰葡萄糖在碱性环境下水解，保证其在试剂体系中可以稳定存在。优选地，所述非离子型表面活性剂为辛基酚聚氧乙烯醚，所述没食子酰葡萄糖和所述辛基酚聚氧乙烯醚的质量比为1:(1-1.3)，例如可以是1:1、1:1.02、1:1.05、1:1.08、1:1.1、1:1.15、1:1.2、1:1.25或1:1.3等，优选1:1.1。本专利技术优选非离子表面活性剂含量微高于没食子酰葡萄糖，既是为了保证非离子表面活性剂的分子链能与没食子酰葡萄糖的分子链充分缠绕，使没食子酰葡萄糖在碱性环境中可以稳定存在，又可以保证没食子酰葡萄糖不被非离子表面活性剂完全包裹，避免降低其对总蛋白的络合能力。优选地，所述没食子酰葡萄糖和硫酸铜的质量比为(8-12):1，例如可以是8:1、8.5:1、9:1、9.5:1、10:1、10.5:1、11:1、11.5:1或12:1等。本专利技术优选没食子酰葡萄糖和硫酸铜的质量比范围，是由于当两者比例低于8:1时，没食子酰葡萄糖含量过少，可能会对总蛋白和铜离子络合作用减弱，检测精度下降，当两者比例高于12:1时，铜离子含量过少，与蛋白质络合产生的紫色化合物含量少，显色不明显，检测精度也会下降。优选地，在所述总蛋白检测试剂中，还包括乙二胺四乙酸二钠。本申请所述总蛋白检测试剂还可以包括乙二胺四乙酸二钠，是由于添加乙二胺四乙酸二钠可以避免测试样品中钙离子和镁离子的干扰。优选地，在所述总蛋白检测试剂中，所述乙二胺四乙酸二钠的浓度为1-3g/L，例如可以是1g/L、1.2g/L、1.5g/L、1.8g/L、2g/L、2.3g/L、2.5g/L、2.8g/L或3g/L等。优选地，所述碱性物质为氢氧化钾和/或氢氧化钠，优选氢氧化钾。优选地，在所述总蛋白检测试剂中，还包括碘化钾。优选地，在所述总蛋白检测试剂中，所述碘化钾的浓度为15-20g/L，例如可以是15g/L、16g/L、17g/L、18g/L、19g/L或20g/L等。第二方面，本专利技术还提供了一种如第一方面所述的总蛋白检测试剂的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：(1)将没食子酰葡萄糖与非离子型表面活性剂混合，然后与硫酸铜、酒石酸钾钠和部分水混合，得到混合液A；(2)将碱性物质和剩余部分水混合，得到混合液B；(3)混合液A和混合液B混合，得到所述总蛋白检测试剂。本专利技术所述制备方法优先将没食子酰葡萄糖与非离子型表面活性剂混合，使两者分子链产生充分缠绕后，再与硫酸铜、酒石酸钾钠和部分水混合，没食子酰葡萄糖与铜离子可以产生络合，这样得到的络合产物既可溶于水，避免了产生氢氧化铜沉淀，又能极大增加了络合物在水中的相容性。优选地，所述制备本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种总蛋白检测试剂，其特征在于，所述总蛋白检测试剂包括如下组分；/n

【技术特征摘要】
1.一种总蛋白检测试剂，其特征在于，所述总蛋白检测试剂包括如下组分；





2.根据权利要求1所述的总蛋白检测试剂，其特征在于，所述非离子表面活性剂选自烷基酚聚氧乙烯醚类表面活性剂，包括辛基酚聚氧乙烯醚和/或壬基酚聚氧乙烯醚，进一步优选辛基酚聚氧乙烯醚。


3.根据权利要求1或2所述的总蛋白检测试剂，其特征在于，所述非离子型表面活性剂为辛基酚聚氧乙烯醚，所述没食子酰葡萄糖和所述辛基酚聚氧乙烯醚的质量比为1:(1-1.3)，优选1:1.1；
优选地，所述没食子酰葡萄糖和硫酸铜的质量比为(8-12):1。


4.根据权利要求1-3中的任一项所述的总蛋白检测试剂，其特征在于，在所述总蛋白检测试剂中，还包括乙二胺四乙酸二钠。


5.根据权利要求4所述的总蛋白检测试剂，其特征在于，在所述总蛋白检测试剂中，所述乙二胺四乙酸二钠的浓度为1-3g/L。


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【专利技术属性】
技术研发人员：周明先，贾桐煜，孙亚伟，
申请(专利权)人：昆山迪安医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32