尿液中胶质母细胞瘤的代谢标志物及其在早期诊断中的用途制造技术

本发明专利技术涉及尿液中胶质母细胞瘤的代谢标志物及其在早期诊断中的用途。具体地，本发明专利技术涉及测定受试者尿液中的代谢物水平的试剂在制备用于诊断胶质母细胞瘤的试剂盒或芯片中的用途，其中所述的尿液中的代谢物选自以下一种或多种：脱氧胆酸甘氨酸偶联物、酪胺‑氧‑硫酸盐、葡糖苷酸睾酮、鹅去氧胆酸硫酸盐、2‑羟基‑皮脂酸乙酯和甘氨鹅脱氧胆‑3‑葡糖苷酸。

Metabolic markers of glioblastoma in urine and their application in early diagnosis

【技术实现步骤摘要】
尿液中胶质母细胞瘤的代谢标志物及其在早期诊断中的用途
本专利技术涉及生物
，更具体地涉及尿液中胶质母细胞瘤的代谢标志物及其在早期诊断中的用途。
技术介绍
卫生部2013年最新年鉴表明，我国每年有超过30万患者死于脑部肿瘤。胶质母细胞瘤作为脑部最常见的原发性恶性肿瘤，占所有原发性脑恶性肿瘤的47.6％(2018年美国脑肿瘤登记中心报告，CBTRUS)参见，Q.T.Ostrom,H.Gittleman,G.Truitt,A.Boscia,C.Kruchko,J.S.Barnholtz-Sloan,CBTRUSStatisticalReport:PrimaryBrainandOtherCentralNervousSystemTumorsDiagnosedintheUnitedStatesin2011-2015.NeuroOncol20(2018)iv1-iv86，恶性程度最高(WHO分级为恶性程度最高的IV级)，治疗效果差。经过标准的手术、放疗及化疗之后，病人中位生存期仅为14.6个月，参见R.Stupp,W.P.Mason,M.J.vandenBent,M.Weller,B.Fisher,M.J.Taphoorn,K.Belanger,A.A.Brandes,C.Marosi,U.Bogdahn,J.Curschmann,R.C.Janzer,S.K.Ludwin,T.Gorlia,A.Allgeier,D.Lacombe,J.G.Cairncross,E.Eisenhauer,R.O.Mirimanoff,Radiotherapyplusconcomitantandadjuvanttemozolomideforglioblastoma.NEnglJMed352(2005)987-996。这不仅给患者身体造成巨大痛苦，而且给患者及其家属带来心理上的沉重负担。此外，胶质母细胞瘤本身对脑功能造成的损害以及手术治疗所导致的致残率也很高。因此该疾病给国家医疗资源以及社会保障体系带来很大的负担。早期发现并及时手术治疗能延长恶性胶质瘤病人生存预后，甚至能治愈部分病人，故胶质瘤早期诊断具有至关重要的作用。然而，胶质瘤起病隐匿，缺乏特异性早期症状，这导致发现时往往已是肿瘤病程后期，此时肿瘤较大，侵袭性强，手术治疗效果往往不佳。利用各种组学方法在体液中筛选并鉴定胶质瘤早期诊断标志物是目前胶质瘤早诊研究常规策略，参见M.Touat,A.Duran-Pena,A.Alentorn,L.Lacroix,C.Massard,A.Idbaih,Emergingcirculatingbiomarkersinglioblastoma:promisesandchallenges.ExpertRevMolDiagn15(2015)1311-1323。代谢组学方法是通过核磁共振波谱法和质谱法在一个生物样品内发现全套小分子代谢物的研究方法。本项目基于质谱技术的代谢组学方法在尿液中筛选出一组能较好区分正常人和胶质瘤病人的代谢标志物。
技术实现思路
鉴于本领域的上述需求，根据本公开的一些实施方案，提供了测定受试者尿液中的代谢物水平的试剂在制备用于诊断胶质母细胞瘤的试剂盒或芯片中的用途，其中所述的尿液中的代谢物选自以下一种或多种：脱氧胆酸甘氨酸偶联物，酪胺-氧-硫酸盐，葡糖苷酸睾酮，鹅去氧胆酸硫酸盐，2-羟基-皮脂酸乙酯，和甘氨鹅脱氧胆-3-葡糖苷酸。在具体的实施方案中，所述诊断是胶质母细胞瘤的早期诊断；所述受试者是人。在具体的实施方案中，相较于健康对照，受试者尿液中具有以下一种或多种代谢物变化，指示所述受试者患有胶质母细胞瘤：酪胺-氧-硫酸盐水平升高、鹅去氧胆酸硫酸盐水平升高、甘氨鹅脱氧胆-3-葡糖苷酸水平升高、脱氧胆酸甘氨酸偶联物水平降低、葡糖苷酸睾酮水平降低、和2-羟基-皮脂酸乙酯水平降低。健康对照是指未患有胶质母细胞瘤及其他疾病的健康个体。在具体的实施方案中，所述试剂盒用于质谱鉴定的方法中。所述质谱鉴定是在质谱全扫描模式联合靶向分析下使用的。质谱全扫描模式是同时采集质量范围100m/z到1000m/z内的所有小分子一级信息，通过多元统计分析筛选差异代谢物，进一步对差异代谢物进行靶向二级碎裂，结合数据库二级谱图，最终确定差异分子。在具体的实施方案中，所述代谢物水平是指代谢物相对于健康对照的相对含量。在具体的实施方案中，代谢物水平是在受试者的尿液样本中测定的。在具体的实施方案中，所述受试者是人。本专利技术在另一方面提供了一种用于早期诊断胶质母细胞瘤的试剂盒或芯片，其包含以下代谢物的检测试剂：脱氧胆酸甘氨酸偶联物，酪胺-氧-硫酸盐，葡糖苷酸睾酮，鹅去氧胆酸硫酸盐，2-羟基-皮脂酸乙酯，和甘氨鹅脱氧胆-3-葡糖苷酸。在进一步的实施方案中，所述试剂盒或芯片进一步包含从健康对照尿液样品中确立的基准曲线。在具体的实施方案中，所述试剂盒或芯片用于质谱鉴定的方法中。在具体的实施方案中，所述诊断选自：胶质母细胞瘤的早期诊断。在具体的实施方案中，所述质谱鉴定是在全扫描模式联合靶向鉴定模式下使用的。本专利技术在另一方面提供了一种用于诊断受试者中胶质母细胞瘤的方法，所述方法包括步骤：1)获得受试者的尿液样本，2)任选地，从尿液样本中提取代谢物，3)确定受试者尿液样本中一种或多种选自以下的代谢物水平：脱氧胆酸甘氨酸偶联物，酪胺-氧-硫酸盐，葡糖苷酸睾酮，鹅去氧胆酸硫酸盐，2-羟基-皮脂酸乙酯，和甘氨鹅脱氧胆-3-葡糖苷酸。优选地，所述方法进一步包括将步骤3)中获得的代谢物水平与从健康对照尿液样品中确立的基准值进行比较的步骤。在具体的实施方案中，使用质谱方法确定代谢物水平。当采用质谱方法确定代谢物水平时，在获得尿液样本的步骤之后，还可以包括代谢物提取，蛋白去除。在具体的实施方案中，用2倍体积乙腈提取尿液样本中的代谢物，同时去除蛋白。在具体的实施方案中，所述质谱方法是一级全扫描模式联合靶向二级分析。具体地，首先通过一级全扫描检测尿液代谢组，多元统计分析筛选出潜在标志物，对潜在标志物进行靶向二级碎裂，结合数据库二级谱图确定潜在标志物。采用标志物一级谱峰面积进行定量。具体地，检测：脱氧胆酸甘氨酸偶联物，酪胺-氧-硫酸盐，葡糖苷酸睾酮，鹅去氧胆酸硫酸盐，2-羟基-皮脂酸乙酯，甘氨鹅脱氧胆-3-葡糖苷酸及其组合。基于尿液上述六种代谢物的定量检测方法，可以结合标准品用其进行人群中这六种代谢物基线的建立，可以基于正常对照的含量范围，对胶质母细胞瘤患者进行早期诊断。附图说明图1：胶质母细胞瘤和健康对照组尿液代谢谱PCA分类图；图2：胶质母细胞瘤和健康对照组尿液代谢谱OPLS-DA分类图；图3：六种代谢物组合预测实验组样本的ROC本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.测定受试者尿液中的代谢物水平的试剂在制备用于诊断胶质母细胞瘤的试剂盒或芯片中的用途，其中所述的尿液中的代谢物选自以下一种或多种：/n脱氧胆酸甘氨酸偶联物，/n酪胺-氧-硫酸盐，/n葡糖苷酸睾酮，/n鹅去氧胆酸硫酸盐，/n2-羟基-皮脂酸乙酯，和/n甘氨鹅脱氧胆-3-葡糖苷酸。/n

【技术特征摘要】
1.测定受试者尿液中的代谢物水平的试剂在制备用于诊断胶质母细胞瘤的试剂盒或芯片中的用途，其中所述的尿液中的代谢物选自以下一种或多种：
脱氧胆酸甘氨酸偶联物，
酪胺-氧-硫酸盐，
葡糖苷酸睾酮，
鹅去氧胆酸硫酸盐，
2-羟基-皮脂酸乙酯，和
甘氨鹅脱氧胆-3-葡糖苷酸。


2.根据权利要求1所述的用途，其中所述诊断是胶质母细胞瘤的早期诊断。


3.根据权利要求1或2任一项所述的用途，其中所述受试者是人。


4.根据权利要求1或2所述的用途，其中相较于健康对照，受试者尿液中具有以下一种或多种代谢物变化，指示所述受试者患有胶质母细胞瘤：酪胺-氧-硫酸盐水平升高、鹅去氧胆酸硫酸盐水平升高、甘氨鹅脱氧胆-3-葡糖苷酸水平升高、脱氧胆酸甘氨酸偶联物水平降低、葡糖苷酸睾酮水平降低、和2-羟基-皮脂酸乙酯水平降低，健康对照是...

【专利技术属性】
技术研发人员：张扬，季楠，张力伟，王燚，李春朝，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京天坛医院，
类型：发明
国别省市：北京;11