一种液相色谱-质谱法测定普洱茶中黄曲霉毒素B1含量的样品前处理方法和检测方法技术

本发明专利技术提供了一种液相色谱‑质谱法测定普洱茶中黄曲霉毒素B1含量的样品前处理方法和检测方法，属于分析化学技术领域。本发明专利技术提供的样品前处理方法包括如下步骤：用提取溶剂对普洱茶样品中的黄曲霉毒素B1进行提取，得到提取液；所述提取溶剂为乙腈和水的混合液；将所述提取液与石墨化炭黑、多壁炭纳米管、N‑丙基乙二胺固相吸附剂混合，进行净化，得到待测样品。本发明专利技术所用提取溶剂能将普洱茶样品中的黄曲霉毒素B1充分提取出来，净化过程所用石墨化炭黑、多壁炭纳米管和N‑丙基乙二胺固相吸附剂相互配合，进行分散固相萃取，能够将杂质去除，且不吸附目标物黄曲霉毒素B1，所得待测样品中的目标物的量保留比较完整，可直接外标法定量。

A sample pretreatment and detection method for the determination of aflatoxin B1 in Pu'er tea by liquid chromatography-mass spectrometry

【技术实现步骤摘要】
一种液相色谱-质谱法测定普洱茶中黄曲霉毒素B1含量的样品前处理方法和检测方法
本专利技术涉及分析化学
，尤其涉及一种液相色谱-质谱法测定普洱茶中黄曲霉毒素B1含量的样品前处理方法和检测方法。
技术介绍
黄曲霉毒素(aflatoxins，AFT)是真菌的次级代谢产物，主要由黄曲霉(Aspergillusflavus)、寄生曲霉(A.parasiticus)和集蜂曲霉(A.nonius)等菌株产生，被世界卫生组织(WHO)癌症研究机构划定为一类致癌物，是世界公认的三大强致癌物质之一，是一种剧毒物质。AFT对人和多种动物表现出毒性，且有明显致癌性，其中黄曲霉毒素B1毒性最大，致癌力最强。所以，食品中若有黄曲霉毒素存在，就极大地威胁着消费者的健康。黄曲霉毒素的污染主要是由于储存条件不当造成的，如仓储温度高、湿度大、通风透气条件不良等。由于普洱茶的发酵和仓储存在高温、高湿的特殊性，人们对普洱茶是否会受到黄曲霉污染并产生致癌物质存有疑虑。而“普洱茶产黄曲霉致癌说”让消费者对普洱茶安全性引发争议，普洱茶质量安全问题已经成为当前普洱茶生产、消费和管理领域面临的重大挑战。最新的GB5009.22-2016《食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》，主要涉及三种方法：酶联免疫法、高效液相色谱法、同位素稀释液相色谱-串联质谱法。其中，酶联免疫法容易出现假阳性，只能作为筛查方法；高效液相色谱法需要柱前或柱后衍生，柱前衍生形成的副产物可能对色谱分离造成较大困难，在衍生化过程中，容易引入杂质或干扰峰，或使样品损失，柱后衍生对于一定的溶剂和有限的反应时间来说，所供选择的反应条件有限，容易造成反应不充分，或者反应副产物过多，而且柱后衍生需要额外的设备，反应器可造成峰展宽，降低分辨率，最终不但会影响定量结果，而且会对仪器带来污染；同位素稀释液相色谱串联质谱法是目前应用最为广泛的方法，同时也是公认的定性定量最为准确的方法，但是此方法前处理步骤比较复杂，需要使用到多功能进化柱、免疫亲和柱进行两次净化，并且要添加内标物进行定量，此外，国标中涉及的样品类型基质比较简单，通过两次净化，基本能去除杂质，但对于基质复杂的普洱茶而言，简单的两次净化，是很难去除多余杂质的，杂质过多，质谱分析时基质效应就会更为明显，最终定量也会不准确，所以此方法不适合普洱茶中黄曲霉毒素的日常检验。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种液相色谱-质谱法测定普洱茶中黄曲霉毒素B1含量的样品前处理方法和检测方法，本专利技术提供的前处理方法简单，且用于液相色谱-质谱法时，可实现快速高通量的普洱茶黄曲霉毒素B1的精确定量。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种液相色谱-质谱法测定普洱茶中黄曲霉毒素B1含量的样品前处理方法，包括如下步骤：用提取溶剂对普洱茶样品中的黄曲霉毒素B1进行提取，得到提取液；所述提取溶剂为乙腈和水的混合液；将所述提取液与石墨化炭黑、多壁炭纳米管、N-丙基乙二胺固相吸附剂混合，进行净化，得到待测样品。优选地，所述乙腈和水的体积比为5.0～5.5:1，所述提取溶剂与普洱茶样品的用量比为2～10mL:1g。优选地，所述提取包括如下步骤：将提取溶剂和普洱茶样品的混合物依次进行超声、振摇和离心，所述离心得到的上清液为提取液。优选地，所述提取过程中超声的功率为100～150W，时间为20～60min。优选地，所述提取过程中振摇的转速为300～500rpm，时间为30～60min。优选地，所述提取过程中离心的转速为3500～4500rpm，时间为5～20min。优选地，所述提取液与石墨化炭黑、多壁炭纳米管、N-丙基乙二胺固相吸附剂的用量比为1mL:1～5mg:10～20mg:1～5mg。优选地，所述净化包括如下步骤：将所述提取液与石墨化炭黑、多壁炭纳米管、N-丙基乙二胺固相吸附剂的混合液进行振摇后，将所得混合液进行离心，将离心所得上清液过滤，得到待测样品。优选地，所述净化过程中的振摇的转速为300～500rpm，时间为2～5min；所述净化过程中的离心的转速为3000～4500rpm，时间为5～10min。本专利技术还提供了一种液相色谱-质谱法测定普洱茶中黄曲霉毒素B1含量的检测方法，包括如下步骤：按照上述技术方案所述的样品前处理方法制备待测样品；将所述待测样品进行液相色谱-质谱检测，其中液相色谱的检测条件为：色谱柱：填料为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：包括流动相A和流动相B，流动相A：0.1％甲酸+5mmol/L的乙酸铵水溶液，流动相B：甲醇，其中流动相A和流动相B的体积比为40:60，等度洗脱，流速为0.35～0.45mL/min；柱温：27～29℃；质谱的检测条件为：扫描方式：电喷雾正离子模式扫描；检测方式：多反应监测；气帘气压力：19～21psi；雾化气压力：49～51psi；辅助加热气压力：59～61psi；电喷雾电压：4490～4510V；离子源温度：423～427℃；黄曲霉毒素B1离子选择参数：母离子312.2，子离子241.0和258.0，碰撞能为52和27；根据液相色谱-质谱检测所得结果和标准曲线，计算普洱茶中黄曲霉毒素B1含量。本专利技术提供了一种液相色谱-质谱法测定普洱茶中黄曲霉毒素B1含量的样品前处理方法，包括如下步骤：用提取溶剂对普洱茶样品中的黄曲霉毒素B1进行提取，得到提取液；所述提取溶剂为乙腈和水的混合液；将所述提取液与石墨化炭黑、多壁炭纳米管、N-丙基乙二胺固相吸附剂混合，进行净化，得到待测样品。本专利技术所用提取溶剂能够将普洱茶样品中的黄曲霉毒素B1充分提取出来，净化过程所用的石墨化炭黑、多壁炭纳米管和N-丙基乙二胺固相吸附剂相互配合，进行分散固相萃取，能够将杂质去除，且不会吸附目标物黄曲霉毒素B1，最终所得待测样品中的目标物的量保留比较完整，所以在前处理的时候不需要加入内标物来辅助定量，可直接外标法定量，节省了内标物质的购买，同时分散固相萃取还大大简化了前处理步骤，缩短了前处理时间，提高了检测效率，降低了检测成本。此外，相对于国家标准规定的黄曲霉毒素B1测定的前处理方法，本专利技术不需要专门的净化柱和免疫亲和柱，提取、净化操作简单，所需试剂容易购买，且处理过程不需要特殊装置，在实际操作中容易控制，适合普及推广。附图说明图1实施例1所得浓度-峰面积标准曲线。具体实施方式本专利技术提供了一种液相色谱-质谱法测定普洱茶中黄曲霉毒素B1含量的样品前处理方法，包括如下步骤：用提取溶剂对普洱茶样品中的黄曲霉毒素B1进行提取，得到提取液；所述提取溶剂为乙腈和水的混合液；将所述提取液与石墨化炭黑、多壁炭纳米管、N-丙基乙二胺固相吸附剂混合，进行净化，得到待测样品。本专利技术所提供的样品前处理方法的原理为：普洱茶样品经过提取溶剂提取后，大量的水溶性和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种液相色谱-质谱法测定普洱茶中黄曲霉毒素B1含量的样品前处理方法，其特征在于，包括如下步骤：/n用提取溶剂对普洱茶样品中的黄曲霉毒素B1进行提取，得到提取液；所述提取溶剂为乙腈和水的混合液；/n将所述提取液与石墨化炭黑、多壁炭纳米管、N-丙基乙二胺固相吸附剂混合，进行净化，得到待测样品。/n

【技术特征摘要】
1.一种液相色谱-质谱法测定普洱茶中黄曲霉毒素B1含量的样品前处理方法，其特征在于，包括如下步骤：
用提取溶剂对普洱茶样品中的黄曲霉毒素B1进行提取，得到提取液；所述提取溶剂为乙腈和水的混合液；
将所述提取液与石墨化炭黑、多壁炭纳米管、N-丙基乙二胺固相吸附剂混合，进行净化，得到待测样品。


2.根据权利要求1所述的样品前处理方法，其特征在于，所述乙腈和水的体积比为5.0～5.5:1，所述提取溶剂与普洱茶样品的用量比为2～10mL:1g。


3.根据权利要求1所述的样品前处理方法，其特征在于，所述提取包括如下步骤：
将提取溶剂和普洱茶样品的混合物依次进行超声、振摇和离心，所述离心得到的上清液为提取液。


4.根据权利要求3所述的样品前处理方法，其特征在于，所述提取过程中超声的功率为100～150W，时间为20～60min。


5.根据权利要求3所述的样品前处理方法，其特征在于，所述提取过程中振摇的转速为300～500rpm，时间为30～60min。


6.根据权利要求3所述的样品前处理方法，其特征在于，所述提取过程中离心的转速为3500～4500rpm，时间为5～20min。


7.根据权利要求1所述的样品前处理方法，其特征在于，所述提取液与石墨化炭黑、多壁炭纳米管、N-丙基乙二胺固相吸附剂的用量比为1mL:1～5mg:10～20mg:1～5mg。


8.根据权利要求1或7所述的样品前处理方法，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：伍旭东，车涛，毛静春，刘新月，谭文涵，
申请(专利权)人：普洱市质量技术监督综合检测中心，
类型：发明
国别省市：云南;53