用于制造脱细胞化的组织的方法、脱细胞化的组织、和用于制造脱细胞化的组织的设备技术

一种用于制造脱细胞化的组织的方法，其包括如下步骤：使用包含液化气体的液体将生物组织的细胞裂解，和使用溶核酶将所述生物组织的裂解的细胞中包含的核酸组分降解。

Methods for making acellular tissue, acellular tissue, and equipment for making acellular tissue

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于制造脱细胞化的组织的方法、脱细胞化的组织、和用于制造脱细胞化的组织的设备
本专利技术涉及用于制造脱细胞化的组织的方法、脱细胞化的组织、和用于制造脱细胞化的组织的设备。
技术介绍
在再生医疗领域中，通过从人或某种别的哺乳动物的生物组织除去细胞组分例如胞浆组分、胞质组分、细胞骨架和细胞膜组分而产生的脱细胞化的组织被用作例如用于再生患者的衰竭(病变，损坏，failed)器官的支架组织植入。脱细胞化的组织主要由胞外基质组分例如弹性蛋白、胶原蛋白(I型、IV型)和层粘连蛋白构成。用于制造脱细胞化的组织的常规方法包括使用包含界面活化剂的处理液体将生物组织脱细胞化(参见例如专利文献1-3)。具体地，将生物组织在包含界面活化剂的处理液体中浸渍几天，同时进行搅动。然而，因为界面活化剂致使构成胞外基质组分的蛋白质降解，所以脱细胞化的组织可受损。而且，使用以上方法的脱细胞化费时并且残余的界面活化剂可残留在脱细胞化的组织中。在该方面，使用超临界二氧化碳将生物组织脱细胞化的方法被知晓(参见例如专利文献4)。然而，在该方法中，大量DNA残留在脱细胞化的组织中。要注意，脱细胞化的组织的DNA以干重计的量期望地小于50ng/mg(参见例如非专利文献1)。引文列表专利文献[PTL1]PCT国际申请公布No.JP-T-2005-514971的日文译文[PTL2]PCT国际申请公布No.JP-T-2006-507851的日文译文[PTL3]PCT国际申请公布No.JP-T-2005-531355的日文译文[PTL4]日本未审的专利申请公布No.2007-105081非专利文献[NPL1]Biomaterials.2011年4月，32(12):3233-3243
技术实现思路
技术问题本专利技术的一个目的在于，提供用于制造如下的脱细胞化的组织的方法：其基本上免受损伤并且具有小于50ng/mg的以干重计的量的DNA。问题的解决方案根据本专利技术的一个方面，用于制造脱细胞化的组织的方法包括如下步骤：使用包含液化气体的液体将生物组织的细胞裂解(胞解)，和使用溶核酶将所述生物组织的裂解的细胞中包含的核酸组分降解。专利技术的有益效果根据本专利技术的一个方面，能够提供用于制造如下的脱细胞化的组织的方法：其基本上免受损伤并且具有小于50ng/mg的以干重计的量的DNA。附图说明[图1]图1为说明根据本专利技术一种实施方式的用于制造脱细胞化的组织的实例性方法的流程图表。[图2]图2为呈现二甲醚的饱和蒸气压曲线的图。[图3]图3为说明根据本专利技术一种实施方式的一种实例性脱细胞化预处理设备的示意图。[图4]图4为说明根据本专利技术一种实施方式的另一种实例性脱细胞化预处理设备的示意图。[图5]图5为实施例1的用苏木精和曙红染色的脱细胞化的组织的光学显微照片。[图6]图6为实施例2的用苏木精和曙红染色的脱细胞化的组织的光学显微照片。[图7]图7为实施例3的用苏木精和曙红染色的脱细胞化的组织的光学显微照片。[图8]图8为用苏木精和曙红染色的未处理的生物组织的光学显微照片。具体实施方式在下文中，将参照附图描述本专利技术的实施方式。(用于制造脱细胞化的组织的方法)图1说明根据本专利技术一种实施方式的用于制造脱细胞化的组织的一种实例性方法。用于制造脱细胞化的组织的方法包括使用包含液化气体的液体将生物组织的细胞裂解(破坏)的步骤(步骤S1)、和使用溶核酶(核酸酶)将裂解的细胞中包含的核酸组分降解的步骤(步骤S2)。在步骤S1中，例如，可使生物组织与包含液化气体的液体接触以将生物组织的细胞裂解(破坏)并使核酸组分暴露到所述细胞的外部。通过这种方式，脱细胞化的组织可基本上免于损伤，并且液化气体不太可能残留在脱细胞化的组织中。在本实施方式中，包含液化气体的液体使细胞膜组分溶解并因此裂解(破坏)细胞。在本说明书中，液化气体是指在标准温度和标准压力(0℃，1atm(0.101325MPa))下构成气体的物质的液体形态。尽管在本实施方式中使用的液化气体只要它能够将生物组织的细胞裂解而没有特别限制，但是可使用例如二甲醚、甲乙醚、甲醛、乙烯酮、乙醛、丙烷、丁烷、液化石油气、或者以上物质的两种或更多种的组合。在以上物质中，甲乙醚和二甲醚考虑到可将它们在相对低的温度和低压下液化的事实，可被适宜地使用。特别地，可优选地使用二甲醚。二甲醚可在约1℃至40℃和约0.2MPa至5MPa下液化(参见图2)，并且因此，可使用成本相对低的设备用于制造脱细胞化的组织的生产设备。而且，因为液化二甲醚在标准温度和标准压力下容易蒸发，所以其不太可能残留在脱细胞化的组织中。为了例如维持液化气体的液体状态，步骤S1的过程可在气密性提取槽中在饱和蒸气压以上的环境下进行。尽管用于使生物组织与包含液化气体的液体接触的方法没有特别限制，但是例如，可基于生物组织的本性和性质选择适宜的方法，例如将包含液化气体的液体和生物组织混合并搅拌的方法、将生物组织浸渍在包含液化气体的液体中的方法、或使包含液化气体的液体循环并将其与生物组织接触的方法。包含液化气体的液体可进一步包含溶剂(夹带剂)。尽管所使用的溶剂没有特别限制，但是可使用例如乙醇、水、生理盐水溶液、PBS(磷酸盐缓冲的生理盐水溶液)、或者以上物质的两种或更多种的组合。优选地将溶剂的加入量调至小于或等于其在液化气体中的溶解度。通过这种方式，可实现包含液化气体的液体的均一性。液化气体的温度优选地在1℃至40℃的范围内、和更优选地在10℃至30℃的范围内。当液化气体的温度在1℃至40℃的范围内时，可缩减如下所述的脱细胞化预处理设备的成本。液化气体的压力优选地在0.2MPa至5MPa的范围内、和更优选地在0.3MPa至0.7MPa的范围内。当液化气体的压力在0.2MPa至5MPa的范围内时，可缩减如下所述的脱细胞化预处理设备的成本。尽管生物组织没有特别限制，但是例如，生物组织可为：获自人或某种别的哺乳动物的软组织，例如皮肤、血管、心脏瓣膜、角膜、羊膜、硬脑膜或它们的一部分；获自人或某种别的哺乳动物的器官，例如心脏、肾脏、肝脏、胰腺、大脑或它们的一部分；或获自人或某种别的哺乳动物的结缔组织，例如骨、软骨、肌腱或它们的一部分。在使生物组织与包含液化气体的液体接触并然后将温度和压力调回到标准温度和标准压力之后，使液化气体气化并除去。要注意，当通过将步骤S1的过程(工序)实施仅一次而使细胞裂解进行得不足时，可将步骤S1的过程重复多次。在步骤S2中，例如，可使已经经历步骤S1的细胞裂解过程的生物组织与包含溶核酶的溶液接触以致使暴露到所述细胞的外部的核酸组分降解。结果，脱细胞化的组织的DNA以干重计的量可小于50ng/mg。尽管在本实施方式中使用的溶核酶只要它能够降解本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于制造脱细胞化的组织的方法，所述方法包括：/n使用包含液化气体的液体将生物组织的细胞裂解；和/n使用溶核酶将所述生物组织的裂解的细胞中包含的核酸组分降解。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170511 JP 2017-0950041.用于制造脱细胞化的组织的方法，所述方法包括：
使用包含液化气体的液体将生物组织的细胞裂解；和
使用溶核酶将所述生物组织的裂解的细胞中包含的核酸组分降解。


2.根据权利要求1所述的用于制造脱细胞化的组织的方法，其中所述液体进一步包含溶剂。


3.根据权利要求2所述的用于制造脱细胞化的组织的方法，其中所述溶剂为水和乙醇的至少一种。


4.根据权利要求1所述的用于制造脱细胞化的组织的方法，其中
所述液化气体在范围为1℃至40℃的温度下。


5.根据权利要求1所述的用于制造脱细胞化的组织的方法，其中
所述液化气体在范围为0.2MPa至5MPa的压力下。


6.根据权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：筱原悟史，铃木章悟，鸟井昭吾，
申请(专利权)人：株式会社理光，
类型：发明
国别省市：日本;JP