一种具有抗氧化作用的木枣多糖的分离纯化方法技术

本发明专利技术提供一种具有抗氧化作用的木枣多糖的分离纯化方法，包括制备木枣多糖和对木枣多糖进行分离纯化，对木枣多糖进行分离纯化步骤是：先将木枣多糖通过DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换柱，依次用PBS溶液和NaCl‑PBS溶液梯度洗脱进行分离，再通过Sephacryl S‑300凝胶柱进行纯化。通过本发明专利技术制备方法能够一次性分离纯化得到三种木枣抗氧化活性多糖PZMP1、PZMP2和PZMP3，通过本发明专利技术分离纯化得到的三种木枣抗氧化活性多糖不仅纯度较高，纯度能够高达90％以上，而且得率较高，以木枣粗多糖为基数，PZMP1得率为2.95％，PZMP2得率为14.15％，PZMP3得率为14.61％。除此之外，本发明专利技术分离纯化得到的三种木枣抗氧化活性多糖均有较强的抗氧化性，为抗氧化性功能食品提供原料，促进了木枣的可持续性发展。

Isolation and purification of jujube polysaccharide with antioxidant activity

【技术实现步骤摘要】
一种具有抗氧化作用的木枣多糖的分离纯化方法
本专利技术属于食品深加工领域，涉及多糖提取技术，更具体地，涉及一种具有抗氧化作用的木枣多糖的分离纯化方法。
技术介绍
大枣(ZiziphusJujubaMill.)又名华枣、贯枣、刺枣，为鼠李科枣属植物枣树的果实。红枣除含有水分、纤维素和多种维生素外，还含有黄酮类物质、三萜类物质、多糖、核苷类物质等。大枣具有良好的医疗保健作用，用于治疗食欲不振，疲劳，贫血等病症。我国是世界上唯一拥有大面积栽培的优良枣树品种的国家。据中华人民共和国国家统计局资料，目前全国红枣产量为734.53万吨(2014年)、634.00万吨(2013年)，占世界总产量的90％以上。枣树在我国分布极广，主要分布在新疆枣区及黄河沿岸流域枣区。佳县木枣：地处北纬37°41′47"～38°23′34″、东经110°0′45"～110°45′10″之间，来自佳县无污染源的黄河沿岸地区，栽培历史悠久，树体生命力强。据测定分析，佳县木枣中含水分(68％)、可滴定酸(0.32％)、可溶性固形物(27.4％)、总糖(21.9g/100g)、还原型Vc(376.2mg/100g)，总酚(541.8mgGAEeq./100gFW)、总黄酮(255.5mgRutineq./100gFW)、总原花青素(184.2mgGSPEeq./100gFW)，肉桂酸(35.2μg/100gFW)等营养成分。多糖是红枣中重要的生物活性物质，具有免疫调节、抗氧化、抗肿瘤、保肝、降血糖、调节肠道菌群等多种生物活性；但由于佳县木枣粗多糖成分复杂，质量难以有效控制，目前对于佳县木枣这一具有较大潜在药用价值的品种的研究较少。目前，已有多种大枣多糖分离纯化手段，但是，分离纯化后得到的多糖种类有限，纯度和提取率不高，并且目前没有将多糖成分复杂的佳县木枣分离纯化得到抗氧化作用较好的木枣抗氧化活性多糖。
技术实现思路
:本专利技术的目的是针对上述不足，提出一种具有抗氧化作用的木枣多糖的分离纯化方法。通过本专利技术制备方法能够一次性分离纯化得到三种木枣抗氧化活性多糖PZMP1、PZMP2和PZMP3，通过本专利技术分离纯化得到的三种木枣抗氧化活性多糖不仅纯度较高，纯度能够高达90％以上，而且得率较高，以木枣粗多糖为基数，PZMP1得率为2.95％，PZMP2得率为14.15％，PZMP3得率为14.61％。除此之外，本专利技术分离纯化得到的三种木枣抗氧化活性多糖均有较强的抗氧化性，为抗氧化性功能食品提供原料，促进了木枣的可持续性发展。本专利技术的技术方案是：本专利技术提供一种具有抗氧化作用的木枣多糖的分离纯化方法，包括制备木枣多糖和对木枣多糖进行分离纯化，对木枣多糖进行分离纯化步骤是：先将木枣多糖通过DEAESepharoseFastFlow阴离子交换柱，依次用PBS溶液和NaCl-PBS溶液梯度洗脱进行分离，再通过SephacrylS-300凝胶柱进行纯化。上述NaCl-PBS溶液浓度可以为0M～0.3M。优选上述具有抗氧化作用的木枣多糖的分离纯化方法，包括制备木枣多糖和对木枣多糖进行分离纯化，对木枣多糖进行分离纯化步骤是：先将木枣多糖通过DEAESepharoseFastFlow阴离子交换柱，依次用PBS溶液和0M的NaCl-PBS溶液梯度洗脱进行分离，再通过SephacrylS-300凝胶柱进行纯化。将上述梯度洗脱条件下分离纯化得到的木枣抗氧化活性多糖组分，命名为PZMP1。优选上述具有抗氧化作用的木枣多糖的分离纯化方法，包括制备木枣多糖和对木枣多糖进行分离纯化，对木枣多糖进行分离纯化步骤是：先将木枣多糖通过DEAESepharoseFastFlow阴离子交换柱，依次用PBS溶液、0M的NaCl-PBS溶液和0.2M的NaCl-PBS溶液梯度洗脱进行分离，再通过SephacrylS-300凝胶柱进行纯化。将上述梯度洗脱条件下分离纯化得到的木枣抗氧化活性多糖组分，命名为PZMP2。优选上述具有抗氧化作用的木枣多糖的分离纯化方法，包括制备木枣多糖和对木枣多糖进行分离纯化，对木枣多糖进行分离纯化步骤是：先将木枣多糖通过DEAESepharoseFastFlow阴离子交换柱，依次用PBS溶液、0M的NaCl-PBS溶液、0.2M的NaCl-PBS溶液和0.3M的NaCl-PBS溶液梯度洗脱进行分离，再通过SephacrylS-300凝胶柱进行纯化。将上述梯度洗脱条件下分离纯化得到的木枣抗氧化活性多糖组分，命名为PZMP3。上述分离采用的梯度洗脱的洗脱速率为1.0-2.0mL/min。优选的，洗脱速率为1.5mL/min。上述梯度洗脱时，PBS溶液洗脱一个柱体积，每个浓度的NaCl-PBS溶液各洗脱一个柱体积。所述PBS溶液的pH为6.0。所述通过SephacrylS-300凝胶柱纯化的条件为：以蒸馏水为洗脱剂洗脱一个柱体积，流速为0.6-1.0mL/min，优选的流速为0.8mL/min。将DEAESepharoseFastFlow阴离子交换柱分离得到的多糖组分进行透析除盐、浓缩后再通过SephacrylS-300凝胶柱纯化；所述透析除盐过程中，透析袋的截留分子量为3500Da，透析时间为65-80h，优选72小时。所述的木枣多糖由木枣依次通过超声波辅助热水浸提、醇沉和脱色脱蛋白处理得到。所述超声波辅助热水浸提的料液比23:1，超声功率为420W，提取温度为60-80℃，时间为20-40min。优选的，提取温度为70℃，时间为30min。所述脱蛋白处理采用木瓜蛋白酶--8％三氟乙酸法；所述脱色处理采用0.4倍木枣多糖水溶液体积的双氧水进行水浴处理；所述水浴温度为40-50℃水浴时间为20-40min；所述双氧水体积浓度为30％。优选的，所述水浴温度为45℃，水浴时间为30min。所述具有抗氧化作用的木枣多糖的分离纯化方法，分离纯化的具体步骤为：(1)分离：将木枣多糖水溶液通过DEAESepharoseFastFlow阴离子交换柱，在1.5mL/min洗脱速率下，先依次用PBS溶液(pH为6.0)和0M的NaCl-PBS溶液各梯度洗脱一个柱体积，收集第一种木枣抗氧化活性多糖的粗品，命名为ZMP1；然后再用0.2M的NaCl-PBS溶液继续梯度洗脱一个柱体积，收集第二种木枣抗氧化活性多糖的粗品，命名为ZMP2；最后再用0.3M的NaCl-PBS溶液继续梯度洗脱一个柱体积，收集第三种木枣抗氧化活性多糖的粗品，命名为ZMP3；将上述三种粗品ZMP1、ZMP2和ZMP3分别通过透析除盐，浓缩后备用；(2)纯化：先将上述三种浓缩后的木枣抗氧化活性多糖的粗品分别通过SephacrylS-300凝胶柱进行纯化，在流速0.8mL/min条件下，用蒸馏水洗脱一个柱体积，再通过减压浓缩、真空冷冻干燥，得到三种纯化的木枣抗氧化活性多糖。其中，ZMP1纯化后得到的木枣抗氧化活性多糖命名为PZMP1，ZMP2纯化后得到的木枣抗氧化活性多糖命名为PZMP2，ZMP3纯化后得到的木枣抗氧化活性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有抗氧化作用的木枣多糖的分离纯化方法，包括制备木枣多糖和对木枣多糖进行分离纯化，其特征在于，对木枣多糖进行分离纯化步骤是：先将木枣多糖通过DEAESepharose Fast Flow阴离子交换柱，依次用PBS溶液和NaCl-PBS溶液进行梯度洗脱分离，再通过Sephacryl S-300凝胶柱纯化。/n

【技术特征摘要】
1.一种具有抗氧化作用的木枣多糖的分离纯化方法，包括制备木枣多糖和对木枣多糖进行分离纯化，其特征在于，对木枣多糖进行分离纯化步骤是：先将木枣多糖通过DEAESepharoseFastFlow阴离子交换柱，依次用PBS溶液和NaCl-PBS溶液进行梯度洗脱分离，再通过SephacrylS-300凝胶柱纯化。


2.根据权利要求1所述的具有抗氧化作用的木枣多糖的分离纯化方法，其特征在于所述的NaCl-PBS溶液浓度为0M～0.3M。


3.根据权利要求1所述的具有抗氧化作用的木枣多糖的分离纯化方法，其特征在于所述的梯度洗脱为依次用PBS溶液和0M的NaCl-PBS溶液梯度洗脱。


4.根据权利要求1所述的具有抗氧化作用的木枣多糖的分离纯化方法，其特征在于所述的梯度洗脱为依次用PBS溶液、0M的NaCl-PBS溶液和0.2M的NaCl-PBS溶液梯度洗脱。


5.根据权利要求1所述的具有抗氧化作用的木枣多糖的分离纯化方法，其特征在于所述的梯度洗脱为依次用PBS溶液、0M的NaCl-PBS溶液、0.2M的NaCl-PB...

【专利技术属性】
技术研发人员：冀晓龙，侯春彦，周晓微，闫溢哲，杨留枝，史苗苗，
申请(专利权)人：郑州轻工业学院，
类型：发明
国别省市：河南;41