一种淡水鱼类细菌病药敏检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种淡水鱼类细菌病药敏检测试剂盒及其应用，属于水产疾病防治技术领域。一种淡水鱼类细菌病快速检测药敏试剂盒，包括TSA培养基、增菌液和渔类抗菌药纸片。基于所述试剂盒检测淡水鱼类细菌病药敏的方法包括：病样组织液的提取、细菌扩增、细菌接种培养和结果判断。本发明专利技术提供的试剂盒能快速筛选出对病原菌敏感的渔用药物，及时指导养殖户高效用药，提高用药治疗效果；检测方法简单方便；对实验技能要求不高，临床应用性强，同时还可实现耐药菌株的分离。

A kit for detecting bacterial susceptibility of freshwater fish and its application

【技术实现步骤摘要】
一种淡水鱼类细菌病药敏检测试剂盒及其应用
本专利技术属于水产疾病防治
，具体涉及一种淡水鱼类细菌病药敏检测试剂盒及其应用。
技术介绍
我国是世界水产养殖大国，也是水产品贸易大国，水产品产量占世界的70％，出口额连续6年居世界首位。但近年来，由于水产养殖业的快速发展，细菌性疾病时有发生，处理不当，可造成较大的经济损失。目前，细菌病治疗最有效的是抗生素，但是近年来药物治疗效果不显著并出现反复发作的现象，原因可能与引起细菌病不同种类细菌有关，另外可能由于抗生素的频繁和不规范使用，引起抗生素耐药性、抗药性和药物残留等问题，特别是药物残留问题会直接影响我国水产品出口贸易。因此，很有必要在使用药物治疗前，进行药敏试验，快速筛选出高效的治疗药物。然而，目前市场上只有针对人源细菌或哺乳动物源细菌相关的药敏试剂盒，而没有专门针对水产动物源细菌使用的产品；也有一些学者针对水产动物源细菌药敏试剂盒开展研究，但仍存在使用繁杂，环境条件要求高，用时长，抗生素品种与渔药产品脱节等问题，且只停留在研究阶段，尚未达到推广和应用；另外渔药市场上的抗生素产品种类繁多、含量与成分不明，还可能存在鱼目混珠的情况。因此急需一种科学、快速和贴合实际的用药指导，指导养殖户及时、准确和高效地使用抗生素类药物治疗，减少抗生素的使用，减少养殖户经济损失。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种淡水鱼类细菌病药敏检测试剂盒及其应用，所述试剂盒能快速、准确、实用方便的检测鱼病样的的渔药敏感性，及时指导养殖户科学用药。本专利技术提供了一种淡水鱼类细菌病药敏检测试剂盒，包括以下组成：TSA培养基、渔类抗菌药的药敏纸片和增菌液。优选的，所述渔类抗菌药的药敏纸片包括氟苯尼考的药敏纸片、磺胺异恶唑的药敏纸片、阿莫西林的药敏纸片、恩诺沙星的药敏纸片、盐酸新霉素的药敏纸片、链霉素的药敏纸片、诺氟沙星的药敏纸片和强力霉素的药敏纸片中的一种或几种。优选的，所述增菌液以TSB培养基为基础培养基，还包括体积浓度9％～11％的鱼血清和0.02％～0.04％的阿尔玛蓝溶液指示剂。优选的，还包括滴管、封口胶和用于盛装TSA培养基的培养皿。优选的，所述培养皿的直径为90mm。本专利技术提供了所述检测试剂盒在筛选治疗淡水鱼类细菌病的抗生素或筛选耐抗生素的菌株中的应用。本专利技术提供了一种基于所述检测试剂盒快速检测淡水鱼类细菌病药敏的方法，包括以下步骤：1)取患细菌病淡水鱼的肝脏，剪碎，得到的肝脏糜与增菌液混合，静置，待混合液变淡红色后，取2～3滴混合液滴入TSA培养基上，涂布，得到涂布有混合液的TSA培养基；2)取渔类抗菌药的药敏纸片置于所述涂布有混合液的TSA培养基上，压平所述药敏纸片后密封；3)将密封后的TSA培养基置于37℃条件下恒温培养12～24h，观察细菌生长情况，测定药敏纸片周围的无菌圈直径，根据美国CLSI判断标准进行药敏程度判读。优选的，步骤1)中所述静置的时间为4～6h。优选的，步骤1)中涂布后，还包括将涂布有混合液的TSA培养基静置5～6min晾干水分。优选的，步骤3)中所述美国CLSI判断标准如下：本专利技术提供的淡水鱼类细菌病药敏检测试剂盒，与现在技术相比，本专利技术的有益效果是：(1)快速：拿到鱼病样，可立即进行药敏试验，接种后经过12-48h培养，可以得到实验结果；(2)准确：直接测量抑菌圈；(3)操作简单：操作步骤简单，方便；(4)技术要求低：可在实验室或野外操作，对实验结果影响不大；(5)同时分离获得耐药菌株；(6)试剂盒成本低廉，方便实用，准确高效，适合大规模生产。附图说明图1为本专利技术药敏试剂盒的示意图；其中：1一次性培养皿，直径90mm；2TSA培养基；3EP管；4装在EP管里的药敏纸片；5EP管；6装在EP管里的增菌液；7涂布棒；8滴管；9封口胶。具体实施方式本专利技术提供了一种淡水鱼类细菌病药敏检测试剂盒，包括以下组成：TSA培养基、渔类抗菌药的药敏纸片和增菌液。本专利技术提供的检测试剂盒包括TSA培养基。所述TSA培养基的来源没有特殊限制，采用本领域所熟知TSA培养基即可，例如商品购买或自制。所述TSA培养基的配方如下：胰蛋白胨17g/L、大豆胨3g/L、葡萄糖2.5g/L、NaCl5g/L、K2HPO42.5g/L、琼脂20g/L，pH值7.0～7.2。所述TSA培养基的配制方法将各组分混合、溶解于蒸馏水中，在121℃灭菌15min，备用。所述TSA培养基的作用是提供药敏抑菌直径的载体。本专利技术提供的检测试剂盒包括渔类抗菌药的药敏纸片。所述渔类抗菌药的药敏纸片优选包括氟苯尼考的药敏纸片、磺胺异恶唑的药敏纸片、阿莫西林的药敏纸片、恩诺沙星的药敏纸片、盐酸新霉素的药敏纸片、链霉素的药敏纸片、诺氟沙星的药敏纸片和强力霉素的药敏纸片中的一种或几种。所述药敏纸片的直径优选为6mm，各药敏纸片中抗生素的负载量如下：氟苯尼考(30μg/片)、磺胺异恶唑(300μg/片)、阿莫西林(20/10μg/片)、恩诺沙星(5μg/片)、盐酸新霉素(30μg/片)、链霉素(10μg/片)、诺氟沙星(10μg/片)、强力霉素(30μg/片)。本专利技术对所述渔类抗菌药的药敏纸片的来源没有特殊限制，采用本领域所熟知的渔类抗菌药的药敏纸片的来源即可。在本专利技术实施例中，所述渔类抗菌药的药敏纸片购于杭州天和生物科技有限公司。所述渔类抗菌药的药敏纸片的作用提供抑菌作用的抗生素形成抑菌圈。本专利技术提供的检测试剂盒包括增菌液。本专利技术对所述增菌液的来源没有特殊限制，采用本领域所熟知的增菌液的来源即可，例如商品购买途径获得的增菌液或自制的增菌液。所述增菌液优选以TSB培养基为基础培养基，还优选包括体积浓度9～11％的鱼血清和0.02％～0.04％的阿尔玛蓝溶液指示剂，更优选为包括体积浓度10％的鱼血清和0.034％的阿尔玛蓝溶液指示剂。TSB培养基的配方如下：胰蛋白胨17g/L、大豆胨3g/L、葡萄糖2.5g/L、NaCl5g/L和K2HPO42.5g/L，pH值为7.0～7.2。本专利技术提供的检测试剂盒优选还包括滴管、封口胶和用于盛装TSA培养基的培养皿。所述培养皿的直径优选为90mm。所述培养皿优选为一次性培养皿。所述滴管用于吸取增菌培养后的混合液，所述滴管的规格没有特殊限制，采用本领域所熟知的滴管规格即可。所述封口胶用于密封装有TSA培养基的培养皿。本专利技术对滴管、封口胶和培养皿的来源均没有特殊限制，采用本领域所熟知的常规购买途径获得即可。本专利技术提供了所述检测试剂盒在筛选治疗淡水鱼类细菌病的抗生素或筛选耐抗生素的菌株中的应用。所述应用中，筛选治疗淡水鱼类细菌病的抗生素的方法是将染病淡水鱼中的致病细菌在TSA培养基上培养，致病细菌对药敏纸片形成的抑菌圈的大小判断致病细菌对负载在药敏纸片上的抗生素的敏感程度，从而掌握致病细菌对常见抗生素的耐药性及敏感性，根据该本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种淡水鱼类细菌病药敏检测试剂盒，其特征在于，包括以下组成：/nTSA培养基、渔类抗菌药的药敏纸片和增菌液。/n

【技术特征摘要】
1.一种淡水鱼类细菌病药敏检测试剂盒，其特征在于，包括以下组成：
TSA培养基、渔类抗菌药的药敏纸片和增菌液。


2.根据权利要求1所述淡水鱼类细菌病药敏检测试剂盒，其特征在于，所述渔类抗菌药的药敏纸片包括氟苯尼考的药敏纸片、磺胺异恶唑的药敏纸片、阿莫西林的药敏纸片、恩诺沙星的药敏纸片、盐酸新霉素的药敏纸片、链霉素的药敏纸片、诺氟沙星的药敏纸片和强力霉素的药敏纸片中的一种或几种。


3.根据权利要求1所述淡水鱼类细菌病药敏检测试剂盒，其特征在于，所述增菌液以TSB培养基为基础培养基，还包括体积浓度9％～11％的鱼血清和0.02％～0.04％的阿尔玛蓝溶液指示剂。


4.根据权利要求1～3任意一项所述淡水鱼类细菌病药敏检测试剂盒，其特征在于，还包括滴管、封口胶和用于盛装TSA培养基的培养皿。


5.根据权利要求4所述淡水鱼类细菌病药敏检测试剂盒，其特征在于，所述培养皿的直径为90mm。


6.权利要求1～5任意一项所述检测试剂盒在筛选治疗淡水...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈福艳，欧阳贤华，黎建斌，梁万文，陈福彩，李大列，黄彩林，雷爱莹，罗洪林，李旻，
申请(专利权)人：广西壮族自治区水产科学研究院，
类型：发明
国别省市：广西;45