测定生乳制品或低巴氏乳制品中酪蛋白和血清蛋白的方法技术

测定如生乳或低巴氏乳的液体食品中酪蛋白和血清蛋白含量的方法，由以下连续步骤组成：a)通过加入具有预定pH的缓冲液形成含血清蛋白和酪蛋白的该液体食品溶液，酪蛋白呈凝固形式悬浮在溶液中而血清蛋白溶于溶液；b)搅拌溶液以形成血清蛋白和酪蛋白的均匀混合物；c)获得混合物的多个正面荧光光谱，其通过至少一种确定波长的电磁辐射由均匀混合物的激发产生；d)加入预定量水稀释混合物以由过滤分离可溶性血清蛋白与悬浮于溶液的凝固酪蛋白；e)获得经稀释混合物的多个直角荧光光谱，其通过至少一种确定波长的电磁辐射由经稀释混合物的激发产生；f)通过多路径分析正面荧光光谱和直角荧光光谱，确定液体食品的酪蛋白和血清蛋白含量。

Method for determination of casein and serum protein in raw or low pasteurized dairy products

【技术实现步骤摘要】
测定生乳制品或低巴氏乳制品中酪蛋白和血清蛋白的方法
本专利技术涉及评估食品的蛋白含量的方法。本专利技术具体涉及同时定量液体蛋白食品(诸如生乳或低巴氏灭菌乳(raworlowpasteurizedmilk))中所含的酪蛋白和血清蛋白的方法。
技术介绍
本专利技术尤其但不仅仅能应用于乳制品工业和奶酪行业，特别是制造奶酪、酸奶、婴用奶粉(infantpowders)、液态乳或者液体或粉末形式的乳制品成分。在乳或奶酪的情况下，通常存在两种类型的蛋白：一方面为酪蛋白，其在凝乳酶作用下是不溶性可凝固胶团；而另一方面为血清蛋白，其是可溶的、含于乳清中。特别地，本专利技术应用于生的产品(rawproduct)或低热处理的产品。这些产品含有(例如在热的作用下)未变性且可以沉淀的血清蛋白，以及包含这些产品的可凝固蛋白。关于这种组合物，已知存在的蛋白和酪蛋白的含量对于确定包含它们的乳或奶酪的工艺质量，以及其产量、其质地，以及更普遍地，其制成品的质量是至关重要的。在这种情况下，奶酪制造商和乳制品行业的制造商必须控制乳的酪蛋白波动的含量，因为这些将直接影响奶酪产量。例如，为了保证最佳质量，奶酪制作者应优选在每种产品中保持恒定的蛋白比例和恒定的奶酪重量。因此，有必要预测待处理产品的体积以获得酪蛋白的量，从而获得等价的或甚至相同的凝乳的量。因此，为了保持恒定的凝乳体积并满足管控标准，制造商必须在回顾时纠正凝乳的重量。事先根据酪蛋白定量而实施的乳体积调整更加符合成本效益，这一认识确保了成品的一致性。此外，血清蛋白的定量使得可以确定食品中这些蛋白与酪蛋白之间的比例，该比例被定义为血清蛋白含量除以酪蛋白含量。然而，该比例对于控制诸如酸奶或婴儿配方食品的产品的制造是重要的，因为它分别影响其坚固性和质地，或其消化性。此外，血清蛋白和酪蛋白之间的比例是婴儿配方食品标签的规定标准，并且必须准确地报告。如果奶酪用乳(cheesemilk)经过热处理，由于变性蛋白与存在的酪蛋白一起沉淀，该比例也决定了奶酪产量。因此，知晓该比例使得可以靶向产品的巴氏灭菌温度，以控制将变性的血清蛋白的比例，并因此，以达到变性血清蛋白与酪蛋白的所需的比值。迄今为止，用于定量酪蛋白和血清蛋白的已知和标准化方法，凯氏定氮法包括使用需要实验室操作的装置和溶剂。因此，对于从食品中收集样品而言，分析的结果是延迟的，并且无法及时采取这种处理过程。另一种已知方法旨在通过红外和/或近红外光谱分析对总蛋白进行定量。实行经常改变的复杂校准，该方法能够定量乳中的酪蛋白。然而，该方法不能定量具有营养价值的变性的血清蛋白。通过红外和/或近红外光谱测量的蛋白的总含量减去酪蛋白的含量，获得血清蛋白和蛋白-蛋白胨部分的可溶性含量的总和，它们是非变性的，且与酪蛋白没有已知的相互作用。特别地，已知使用荧光光谱法可以通过使用适当的缓冲液沉淀酪蛋白来测量样品(例如生乳样品)的血清蛋白。借助于光谱仪，然后可以测量蛋白浓缩的标记氨基酸的荧光，并且特别是样品内变性血清蛋白的组分色氨酸的荧光。此外，已知旨在使蛋白透明后通过荧光测量样品中它们的总含量的方法。这些方法使得可以通过总蛋白比例减去可溶性蛋白比例来计算酪蛋白比例。专利申请FR2752941和FR3019299公开了依赖于在透明介质中使用直角荧光测量来确定样品的蛋白和/或酪蛋白含量的方法的实例。这些方法之一由通过酸缓冲液沉淀乳样品组成。大约5分钟后，通过直角荧光测量可以推断蛋白的总含量，误差度约为3％。此外，另一种方法是通过影响离子强度的缓冲液使乳样品透明，以使酪蛋白的胶团不稳定并具有合适的pH。约3分钟后，进行直角荧光测量，以推断蛋白的总含量，误差度约为5％。在相同的乳样品的基础上，由此测量的总蛋白减去可溶性蛋白的含量值使得可以推断出酪蛋白的含量。然而，凯氏定氮法是复杂的、污染的并且成本高，而后一种方法在工业环境中实施起来相对麻烦。特别地，根据现有技术的后一种方法具有三个主要缺点。首先，它很慢，因为需要大约8分钟来测量酪蛋白的比例。其次，通过累积添加误差，蛋白的总含量减去蛋白的可溶性含量具有大约8％的显著程度的不准确性。第三，由于需要两种样品制剂，这些方法相对不易使用。
技术实现思路
为了克服上述缺点中的至少一个，本专利技术的一个目的是提出一种同时定量酪蛋白和血清蛋白的方法，包括液体蛋白食品(诸如生乳或低巴氏灭菌乳)。为此目的，本专利技术的目的涉及一种用于测定液体食品(诸如生乳或低巴氏灭菌乳)中酪蛋白含量和血清蛋白含量的方法，其特征在于，所述方法包括由以下各项组成的连续步骤：a)通过加入具有预定pH的缓冲液形成所述液体食品的溶液，所述溶液包含所述血清蛋白和所述酪蛋白，所述酪蛋白以凝固形式悬浮在溶液中，并且血清蛋白溶解在溶液中；b)搅拌溶液，以形成血清蛋白和酪蛋白的均匀混合物；c)获得所述混合物的多个正面荧光光谱(frontalfluorescencespectra)，所述正面荧光光谱通过至少一种确定波长的电磁辐射由所述均匀混合物激发而产生；d)通过加入预定量的水稀释混合物，以通过过滤分离可溶性血清蛋白与悬浮在溶液中的凝固的酪蛋白；e)获得所述经稀释混合物的多个直角荧光光谱，所述直角荧光光谱通过至少一种具有确定波长的电磁辐射由所述经稀释混合物激发而产生；和f)通过对正面荧光光谱和直角荧光光谱进行多路径分析来测定液体食品的酪蛋白含量和血清蛋白含量。根据可以一起或单独使用的不同附加特征：-至少一个电磁辐射的波长为270纳米至340纳米，并且优选地等于280纳米；-所述缓冲液是乙酸钠缓冲液和/或pH值为4.50至4.65，优选等于4.55或4.6的缓冲液；-通过测量混合物和/或经稀释混合物中存在的色氨酸的荧光漫射，而在步骤c)期间获得至少一个正面荧光光谱和/或在步骤e)期间获得至少一个直角荧光光谱；-步骤a)期间加入的液体食品和缓冲液的体积使得液体食品体积与缓冲液体积之比在1至5之间，优选等于3；-搅拌步骤b)通过涡旋实现；和-所述多路径分析是应用选自多元线性回归方法或偏最小二乘回归方法的回归方法的PARAFAC分析。附图说明本专利技术的其他特征和优点将从下面给出的描述中显现，并参考附图，附图示出了实施方案的实例，没有限制性质。在图中：-图1是说明当实施根据本专利技术的方法的步骤时由多元线性回归模型(在纵坐标上)预测的几个乳样品的酪蛋白含量的百分比值的图，其根据酪蛋白值的参考内容(横坐标)表示；和-图2是示出当实施根据本专利技术的方法的步骤时由多元线性回归模型(在纵坐标上)预测的几种其他乳样品的酪蛋白含量的百分比值的图，其根据酪蛋白值的参考内容(横坐标)表示。当然，为了满足特定需要，本领域技术人员可以对以下描述进行修改。尽管涉及不同的实施方案，但是本专利技术不限于这些特定实施方案，并且对于本领域技术人员来说，可以认为对本专利技术的应用范围特定的所有修改都是显而易见的。...

【技术保护点】
1.用于测定诸如生乳或低巴氏灭菌乳的液体食品中酪蛋白含量和血清蛋白含量的方法，其特征在于，所述方法包含由以下各项组成的连续步骤：/na)通过加入具有预定pH的缓冲液形成所述液体食品的溶液，所述溶液包含所述血清蛋白和所述酪蛋白，所述酪蛋白以凝固形式悬浮在所述溶液中，而所述血清蛋白溶解在所述溶液中；/nb)搅拌所述溶液，以形成所述血清蛋白和酪蛋白的均匀混合物；/nc)获得所述混合物的多个正面荧光光谱，所述正面荧光光谱通过至少一种确定波长的电磁辐射由所述均匀混合物激发而产生；/nd)通过加入预定量的水稀释所述混合物，以通过过滤分离所述可溶性血清蛋白与悬浮在溶液中的凝固的酪蛋白；/ne)获得所述经稀释混合物的多个直角荧光光谱，所述直角荧光光谱通过至少一种具有确定波长的电磁辐射由所述经稀释混合物激发而产生；和/nf)通过对所述正面荧光光谱和直角荧光光谱进行多路径分析来测定所述液体食品的酪蛋白含量和血清蛋白含量。/n

【技术特征摘要】
20180608 FR 18550471.用于测定诸如生乳或低巴氏灭菌乳的液体食品中酪蛋白含量和血清蛋白含量的方法，其特征在于，所述方法包含由以下各项组成的连续步骤：
a)通过加入具有预定pH的缓冲液形成所述液体食品的溶液，所述溶液包含所述血清蛋白和所述酪蛋白，所述酪蛋白以凝固形式悬浮在所述溶液中，而所述血清蛋白溶解在所述溶液中；
b)搅拌所述溶液，以形成所述血清蛋白和酪蛋白的均匀混合物；
c)获得所述混合物的多个正面荧光光谱，所述正面荧光光谱通过至少一种确定波长的电磁辐射由所述均匀混合物激发而产生；
d)通过加入预定量的水稀释所述混合物，以通过过滤分离所述可溶性血清蛋白与悬浮在溶液中的凝固的酪蛋白；
e)获得所述经稀释混合物的多个直角荧光光谱，所述直角荧光光谱通过至少一种具有确定波长的电磁辐射由所述经稀释混合物激发而产生；和
f)通过对所述正面荧光光谱和直角荧光光谱进行多路径分析来测定所述液体食品的酪蛋白含量和血清蛋白含量。


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【专利技术属性】
技术研发人员：伊内丝·伯鲁兹亚拉贡，
申请(专利权)人：光谱创新公司，
类型：发明
国别省市：法国;FR