一种生产含活性代谢物的大鲵蛋白酶解液的方法技术

本发明专利技术公开了一种生产含活性代谢物的大鲵蛋白酶解液的方法。它的步骤如下：养殖大鲵禁食，切为肉块后加水在高温下蒸；过滤，滤渣打碎后和滤液混合为混悬液；采用复合酶制剂对混悬液进行可控酶解；酶解液调pH后离心，上清加水稀释，并依次经微滤、超滤后得到超滤液；超滤液经加热后最终得到大鲵蛋白酶解液。本发明专利技术获得的大鲵蛋白酶解液含有以下三种公认有益于人体健康的代谢物：α‑酮戊二酸、肉碱和褪黑素，可用于功能性食品开发。本发明专利技术生产过程工艺简单、条件温和、重复性好、对环境友好、营养素损失少，具有良好的工业化前景。

A method for producing protease hydrolysate of Andrias davidianus with active metabolites

【技术实现步骤摘要】
一种生产含活性代谢物的大鲵蛋白酶解液的方法
本专利技术涉及一种生产含活性代谢物的大鲵蛋白酶解液的方法，属于功能性食品领域。
技术介绍
中国大鲵（Andriasdavidianus），俗称“娃娃鱼”,是一种食用价值极高的经济动物，也是一种传统的名贵药用动物，其肌肉、内脏、骨骼、表皮及其分泌物均可入药（李莉等，2012）。中国大鲵是我国农业产业化和特色农业的重点开发品种之一，大鲵人工养殖业近年逐渐成为我国大鲵主产区调整农业产业结构、促进农民增收的最具活力的新兴产业，随着繁殖和养殖技术的日渐熟稔，全国各地养殖大鲵呈“井喷”之状。以陕西省汉中市为例，养殖存量2011年就已达160万余尾（张红星等，2012），其市场价格也随之从最高峰3000元一斤降到50-150元一斤，大鲵产业如仅以单一的肉类食品市场作为支撑的话，将会一直停留在低级产业阶段，而如果进一步深加工，拓宽大鲵在药用、保健、食品、美容等更多领域的开发，将有利于这一产业走向成熟。目前关于大鲵在应用方面的相关专利数量虽然较多，但大多都是直接制成产品的方式，其中起作用的具体功能分子性质并不明确（李伟等，2010）。随着动物原料的极大丰富，寻找大鲵含有的有效活性分子并应用于产品更深层次的开发显得日益重要。目前市面上功能性大鲵产品大多聚焦于其中的大鲵蛋白酶解多肽（含糖肽），其所得产物究竟具体含有哪些大鲵多肽并不清楚，其中的活性代谢物更是缺乏研究，因而达成其产品功能的分子基础几乎为空白。
技术实现思路
本专利技术提供一种以养殖中国大鲵为原料经可控酶解获得含活性代谢物的蛋白酶解液的方法。本专利技术通过以下技术方案完成：一种生产含活性代谢物的大鲵蛋白酶解液的方法，包括如下步骤：（1）养殖大鲵禁食使其排空肠胃，宰杀去掉胆囊，切为肉块；（2）按肉块：纯净水=1.5-1.7：1比例（重量比）加入纯净水，在115-120摄氏度下保持2-2.5小时；（3）过滤，滤渣打碎后和滤液混合为混悬液；（4）采用复合酶制剂对混悬液进行可控酶解，得到大鲵粗酶解液；（5）上述大鲵粗酶解液用柠檬酸调pH到4.0-4.5后，10000×g离心30分钟，按上清液：纯净水=1：4-5比例（体积比）加入纯净水，并经0.45微米微孔滤膜微滤得到微滤液；（6）上述微滤液经10千道尔顿超滤膜超滤得到超滤液；（7）上述超滤液经90-95摄氏度加热55-65分钟，最终得到大鲵蛋白酶解液。在本专利技术中，所述大鲵蛋白酶解液的生产方法的步骤(4)中的复合酶制剂为木瓜蛋白酶（每克大鲵肉块加入1400-1800酶活力单位的酶）和中性蛋白酶（每克大鲵肉块加入500-700酶活力单位的酶）进一步的，在步骤(4)中，酶解温度为50-55摄氏度，酶解时间为5.5-6.5小时,酶解在pH6.5下进行。取大鲵蛋白酶解液提取其中的代谢物，经代谢组学分析，结果表明上述大鲵蛋白酶解液含有以下三种有益于人体健康的代谢物：α-酮戊二酸（alpha-Ketoglutaricacid）、肉碱（Carnitine）和褪黑素（Melatonin）。本专利技术的有益效果在于：本专利技术采用了复合酶制剂可控酶解的技术得到大鲵蛋白酶解液的同时还获得了三种公认对人体健康有益的代谢物，可用于功能性食品开发。本专利技术生产过程工艺简单、条件温和、重复性好、对环境友好、营养素损失少，具有良好的工业化前景。附图说明图1大鲵蛋白酶解液正离子模式下代谢物洗脱时间和分子量，横坐标为洗脱时间（单位：分钟），纵坐标为分子量（单位：道尔顿），“—”为实施例1的代谢物，“︱”为实施例2的代谢物；图2大鲵蛋白酶解液负离子模式下代谢物洗脱时间和分子量，横坐标为洗脱时间（单位：分钟），纵坐标为分子量（单位：道尔顿），“—”为实施例1的代谢物，“︱”为实施例2的代谢物。具体实施方式下面结合实例及附图对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更，因此，依据本专利技术做出的非本质的修改和调整均属于本专利技术的保护范围。实施例1制备大鲵蛋白酶解液（1）养殖大鲵1只（2公斤）禁食3天使其排空肠胃，宰杀去掉胆囊，用铡刀切为1-3立方厘米肉块；（2）按肉块：纯净水=1.7：1比例（重量比）加入纯净水，放入不锈钢锅，置入高压锅，于115摄氏度下保持2.5小时；（3）20目筛网过滤，滤渣用绞肉机打碎后和滤液混合为混悬液；（4）混悬液放入搅拌水浴锅，打开搅拌器，速度为350转每分钟，打开加热器，加热混悬液温度至50度，用饱和碳酸钠溶液调pH至6.5，加入木瓜蛋白酶（每克大鲵肉块加入1400酶活力单位的酶）和中性蛋白酶（每克大鲵肉块加入500酶活力单位的酶），开始酶解，酶解时间为6.5小时；（5）酶解完毕，用饱和柠檬酸溶液调pH到4.0，10000×g离心30分钟，按上清液：纯净水=1：4比例（体积比）加入纯净水，并经0.45微米微孔滤膜微滤得到微滤液；（6）上述微滤液经10千道尔顿超滤膜超滤得到超滤液；（7）上述超滤液经90摄氏度加热65分钟进行灭菌和蛋白酶灭活，最终得到大鲵蛋白酶解液。实施例2制备大鲵蛋白酶解液（1）养殖大鲵1只（6公斤）禁食4天使其排空肠胃，宰杀去掉胆囊，用铡刀切为1-3立方厘米肉块；（2）按肉块：纯净水=1.5：1比例（重量比）加入纯净水，放入不锈钢锅，置入高压锅，于120摄氏度下保持2小时；（3）20目筛网过滤，滤渣用绞肉机打碎后和滤液混合为混悬液；（4）混悬液放入搅拌水浴锅，打开搅拌器，速度为400转每分钟，打开加热器，加热混悬液温度至55度，用饱和碳酸钠溶液调pH至6.5，加入木瓜蛋白酶（每克大鲵肉块加入1800酶活力单位的酶）和中性蛋白酶（每克大鲵肉块加入700酶活力单位的酶），开始酶解，酶解时间为5.5小时；（5）酶解完毕，用饱和柠檬酸溶液调pH到4.5，10000×g离心30分钟，按上清液：纯净水=1：5比例（体积比）加入纯净水，并经0.45微米微孔滤膜微滤得到微滤液；（6）上述微滤液经10千道尔顿超滤膜超滤得到超滤液；（7）上述超滤液经95摄氏度加热55分钟进行灭菌和蛋白酶灭活，最终得到大鲵蛋白酶解液。实施例3大鲵蛋白酶解液中活性代谢物的鉴定和定量（1）取100微升上述实施例1和实施例2的大鲵蛋白酶解液，分别进行代谢物提取；（2）加入400微升甲醇，冰上沉淀5分钟；（3）12000×g离心20分钟，取上清；（4）加质谱级水稀释样本使甲醇浓度为60%；（5）将上述液体经0.22微米微孔滤膜微滤，滤液15000×g离心5分钟；（6）收集滤液后得到两个实验样本；（7）从上述两个实验样本中分别取20微升样本混匀作为质控样本；本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种生产含活性代谢物的大鲵蛋白酶解液的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：/n养殖大鲵禁食使其排空肠胃，宰杀去掉胆囊，切为肉块；/n按肉块：纯净水=1.5-1.7：1比例（重量比）加入纯净水，在115-120摄氏度下保持2-2.5小时；/n过滤，滤渣打碎后和滤液混合为混悬液；/n采用复合酶制剂对混悬液进行可控酶解，得到大鲵粗酶解液；/n上述大鲵粗酶解液用柠檬酸调pH到4.0-4.5后，10000×g离心30分钟，按上清液：纯净水=1：4-5比例（体积比）加入纯净水，并经0.45微米微孔滤膜微滤得到微滤液；/n上述微滤液经10千道尔顿超滤膜超滤得到超滤液；/n上述超滤液经90-95摄氏度加热55-65分钟，最终得到大鲵蛋白酶解液。/n

【技术特征摘要】
1.一种生产含活性代谢物的大鲵蛋白酶解液的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
养殖大鲵禁食使其排空肠胃，宰杀去掉胆囊，切为肉块；
按肉块：纯净水=1.5-1.7：1比例（重量比）加入纯净水，在115-120摄氏度下保持2-2.5小时；
过滤，滤渣打碎后和滤液混合为混悬液；
采用复合酶制剂对混悬液进行可控酶解，得到大鲵粗酶解液；
上述大鲵粗酶解液用柠檬酸调pH到4.0-4.5后，10000×g离心30分钟，按上清液：纯净水=1：4-5比例（体积比）加入纯净水，并经0.45微米微孔滤膜微滤得到微滤液；
上述微滤液经10千道尔顿超滤膜超滤得到超滤液；
上述超滤液经90-95摄氏度加热55-65分钟，最终得到大鲵蛋白酶解液。


2.根据权利要求1所述的生产含活性代谢物的大鲵蛋白酶解液的方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：李彻，
申请(专利权)人：什邡新汇水产养殖专业合作社，
类型：发明
国别省市：四川;51