用于测定高密度脂蛋白胆固醇的方法技术

用于测定高密度脂蛋白胆固醇的方法，包括以下操作：获得10微升体液样本，将体液样本加入上述试纸的加样区，等待反应，用荧光免疫分析仪测量试纸上的量子点线条的荧光强度，比对荧光强度‑胆固醇浓度曲线获得高密度脂蛋白胆固醇含量。本发明专利技术利用双氧水淬灭量子点的方式来检测高密度脂蛋白的含量，精度高，所需样本量少的优点。

Method for the determination of high density lipoprotein cholesterol

The method for the determination of high-density lipoprotein cholesterol includes the following operations: obtaining 10 \u03bc l body fluid sample, adding the body fluid sample to the sample adding area of the test paper, waiting for the reaction, measuring the fluorescence intensity of the quantum dot line on the test paper with the fluorescence immunoanalyzer, and comparing the fluorescence intensity \u2011 cholesterol concentration curve to obtain the content of high-density lipoprotein cholesterol. The invention uses the method of quenching quantum dots with hydrogen peroxide to detect the content of high-density lipoprotein, which has the advantages of high precision and small sample size.

【技术实现步骤摘要】
用于测定高密度脂蛋白胆固醇的方法
本专利技术涉及高密度脂蛋白胆固醇测定方法，具体涉及一种用于高密度脂蛋白胆固醇测定的试纸条及其制备方法。
技术介绍
POCT，即时检验(point-of-caretesting)，指在病人旁边进行的临床检测及床边检测(bedsidetesting)，通常不一定是临床检验师来进行。是在采样现场即刻进行分析，省去标本在实验室检验时的复杂处理程序，快速得到检验结果的一类新方法。随着人们生活水平的提高，人们的健康意识正在加强，POCT诊断设产品也越来越受到人们的青睐。由于POCT诊断产品具有体积小，操作简单，不需要操作人员有较强的专业性便可得到准确的结果，这使得人们在家庭完成检验成为可能。，胆固醇可与血清中的脱辅蛋白质配合形成脂蛋白，脂蛋白分为乳糜微粒、极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白。从流行病学上看，HDL胆固醇的水平与动脉硬化性疾病发生频率成反相关，其检测广泛用于预防或诊断缺血性心脏病。传统的用于检测HDL胆固醇的方法多首先使用离心或电泳将HDL分离，然后再进行后续操作，这些方法往往过程繁琐，需要具有专业技能的人才能完成相关操作，因此这些方法不适用于家庭使用。目前已经有相关专利报道了可对高密度脂蛋白胆固醇快速检测的产品，例如专利(CN1258601C)公开了一种高密度脂蛋白(HDL)胆固醇测定用试件，方法使用两种表面活性剂实现高密度脂蛋白(HDL)与非高密度脂蛋白的分离，所述试件结构简单，检测方便快捷。专利(US7374719B2)通过将经不同的试剂处理的功能层固定于设计好的试纸卡壳中实现了同时对总胆固醇，高密度脂蛋白胆固醇及甘油三酯的检测，并通过计算，间接给出非高密度脂蛋白胆固醇的量，方法快捷方便，需要35μL的样本量。尽管上述所报道的产品均适合用于家庭快速诊断，但由于以上产品均是基于显色原理，例如专利(US7374719B2)通过光反射检测生成产物的颜色变化，进而得知样本中被测物的量。由于显色本身需要反应层生成较多的产物以使颜色达到一定的深度变化才能被检测，这使得这些产品进行检测时需要较高的样本量，同时，显色本身涉及到酶反应，这增加了产品涉及的酶的种类及用量。再者，酶反应受样本基质影响很大，因而上述产品面临更大的“基质效应”，从而给检测结果带来更大的不确定性。
技术实现思路
针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本专利技术的目的在于提供一种利用双氧水淬灭量子点的方式来检测高密度脂蛋白的检测装置。这种检测装置能够分离出体液样本中的高密度脂蛋白，使将分离出来的高密度脂蛋白进行氧化反应产生双氧水，扩散到量子点线条，发生碳量子点荧光淬灭反应，碳量子点荧光淬灭反应表征高密度脂蛋白含量，从而实现高密度脂蛋白含量测试的目的。本专利技术的第一方面，在于提供一种高密度脂蛋白胆固醇测定试纸，该试纸包括分离层，反应层和检测层；分离层接受样本并将高密度脂蛋白从样本中分离，分离获得的高密度脂蛋白渗透到反应层，反应层的产物包括双氧水；双氧水渗透到检测层，检测层包括扩散部和量子点线条，双氧水先渗透到扩散部，再从扩散部扩散到量子点线条。优选的，分离层在反应层之上，反应层在检测层之上。样本在重力的作用下逐层向下渗透。优选的，在仰视方向，反应层完全覆盖分离层；在俯视方向上，反应层部分覆盖检测层的扩散部，量子点线条位于未被反应层覆盖的部分。反应层生成的双氧水先渗透到扩散部，再从扩散部扩散到量子点线条。使量子点线条在反应层和分离层之外，便于量子点线条直接被观测和检验。当然，量子点线条被覆盖在反应层和分离层下方也可以，只要荧光免疫分析仪能够检测到量子点线条即可。在一些优选的方式中，试纸包括过滤层，样本从过滤层加入，过滤后的样本渗透到分离层。过滤层的目的在于过滤血细胞，使试纸能够适用于全血样本。试纸不设置过滤层也可以，适用于除全血以外的体液样本，比如血浆等。在一些优选的方式中，检测层采用硝酸纤维素膜(Millipore135)，在硝酸纤维素膜上划上量子点线条。优选的，量子点线条至少1条。优选的，量子点线条为3条。优选的，过滤层处理试剂配方：蔗糖：50.0g/L，表面活性剂S9：2.0g/L，吐温-20：1.0g/L，聚乙烯吡咯烷酮K30：5.0g/L，乙二胺四乙酸二钾0.10g/L，使用0.01mol/LPBS(pH7.4)配制。在一些优选的方式中，血液过滤层处理试剂配方包括：蔗糖：50.0g/L，表面活性剂S9：2.0g/L；吐温-20：1.0g/L；聚乙烯吡咯烷酮K30：5.0g/L；乙二胺四乙酸二钾：0.1g/L；使用0.01mol/LPBS(pH7.4)配制在一些优选的方式中，高密度脂蛋白分离层处理试剂配方：硫酸镁：5.0g/L；磷钨酸：50.0g/L；山梨醇：10.0g/L；蔗糖：50.0g/L，使用0.01mol/LPBS(pH6.5)配制在一些优选的方式中，高密度脂蛋白反应层处理试剂配方：曲拉通X-100：3.0g/L；牛血清白蛋白：1.0g/L；GantrezAN139：10.0g/L；蔗糖：50.0g/L；胆固醇氧化酶：70.00KU/L；胆固醇酯酶：180.00KU/L；聚乙烯吡咯烷酮-K30：5.0g/L；乙二胺四乙酸二钠：10.0g/L；Proclin3001.0g/L；使用0.01mol/LPBS(pH5.5)配制。在一些优选的方式中，检测层之下设有不透水的基板，检测层固定于基板上。优选的，反应层、分离层和过滤层逐层置于检测层之上，各层被面盖压紧固定。压紧固定是指各层在压力的作用下相互贴紧，且在使用和保存或运输等过程中，各层之间不发生相互位移。面盖和基板的连接可以采用现有的试纸产品的面盖和基板的连接方式，只需要在面盖上设置压紧反应层、分离层和过滤层的部位即可，比如用柱子压紧各层的四角，或者用凸条压紧各层的边缘。优选的，面盖上设有加样孔和显示窗，量子点线条位于显示窗，过滤层接受样品的部位外露于加样孔。也就是说，试纸可以是完全外露于加样孔，也可以是只有部分外露于加样孔。当量子点线条被反应层覆盖时，在基板之下设置使量子点线条外露的孔，或者是试纸检测完成后，将面盖拆开，取出检测层(或检测层与基板一起)，露出量子点线条，进行荧光检测。本专利技术结合了层析和量子点淬灭原理，具有血液过滤层，高密度脂蛋白分离层，高密度脂蛋白反应层，划有量子点线条的检测层。试纸条以PVC胶板为基板作支撑体，其中划有量子点线条的检测层粘贴于PVC胶板支撑体上，其他各层按设定顺序自然堆积于划有量子点线条的检测层上，并于检测层上的检测区间隔开设定距离。各层之间靠面盖提供的压力紧密接触，其中卡壳可直接使用荧光免疫层析卡壳。由于采用了荧光淬灭原理，所述试纸条仅需少量样本，可用于全血，血清及可能含有高密度脂蛋白的体液样本。本专利技术的第二方面，目的在于提供一种制作上述试纸的方法。该方法包括以下步骤本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于测定高密度脂蛋白胆固醇的方法，包括以下操作：获得10微升或少于10微升的体液样本，将体液样本加入上述试纸的加样区，等待反应，用荧光免疫分析仪测量试纸上的量子点线条的荧光强度，比对荧光强度-胆固醇浓度曲线获得高密度脂蛋白胆固醇含量。/n

【技术特征摘要】
1.用于测定高密度脂蛋白胆固醇的方法，包括以下操作：获得10微升或少于10微升的体液样本，将体液样本加入上述试纸的加样区，等待反应，用荧光免疫分析仪测量试纸上的量子点线条的荧光强度，比对荧光强度-胆固醇浓度曲线获得高密度脂蛋白胆固醇含量。


2.如权利要求1所述的用于测定高密度脂蛋白胆固醇的方法，其特征在于：同一批次的试纸是由同一次配置的试剂生产获得，随机抽取多个试纸，对已知浓度的高密度脂蛋白胆固醇标准品进行测试，用荧光免疫分析仪测量各试纸上的荧光强度，以胆固醇浓度和荧光强度分别作为坐标绘制图谱，将胆固醇浓度-荧光强度对应点对应在图谱上，将所有对应点拟合成标准曲线，并计...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶学松，梁波，自强，
申请(专利权)人：浙江大学山东工业技术研究院，
类型：发明
国别省市：山东;37