The invention relates to an optimized genetic tool for modifying Clostridium bacteria. In particular, the invention relates to a genetic tool comprising at least two different nucleic acids optimized to facilitate the transformation of Clostridium bacteria, usually solvent producing bacteria, and modification by homologous recombination.
【技术实现步骤摘要】
用于修饰梭状芽孢杆菌属细菌的优化的遗传工具
本专利技术涉及一种包含至少两种不同核酸的遗传工具，其被优化以促进梭状芽孢杆菌属(Clostridium)的细菌，通常为梭状芽孢杆菌属(Clostridium)的产溶剂细菌的转化和通过同源重组进行的修饰。
技术介绍
属于厚壁菌门梭状芽孢杆菌属(Clostridium)的细菌是革兰氏阳性、专性厌氧、形成内生孢子的杆菌。这个属含有许多由于它们的致病性或它们的工业和医学兴趣而被研究的物种。例如，破伤风梭状芽孢杆菌(Clostridiumtetani)、肉毒梭状芽孢杆菌(Clostridiumbotulinum)、产气荚膜梭状芽孢杆菌(Clostridiumperfringens)和难辨梭状芽孢杆菌(Clostridiumdifficile)分别是造成破伤风、肉毒中毒、气性坏疽和假膜性结肠炎的致病因子。诺维氏梭状芽孢杆菌(Clostridiumnovyi)和产芽孢梭状芽孢杆菌(Clostridiumsporogenes)已被用于开发癌症疗法的研究中。同时，对人类不致病的其他物种例如丙酮丁醇梭...
【技术保护点】
1.一种遗传工具，其允许对梭状芽孢杆菌属(Clostridium)的细菌进行转化和通过同源重组进行遗传修饰，其特征在于/ni)它包含：/n-至少编码Cas9的第一核酸，其中编码Cas9的序列被置于启动子的控制之下，和/n-至少一种含有修复模板的第二核酸，其允许通过同源重组机制将被Cas9靶向的细菌DNA的一部分用感兴趣的序列代替，/nii)所述核酸中的至少一者还编码一个或多个指导RNA(gRNA)，或者所述遗传工具还包含一个或多个指导RNA，每个指导RNA包含结合Cas9酶的RNA结构和与所述细菌DNA的被靶向部分互补的序列，和/niii)所述核酸中的至少一者还包含置于诱导...
【技术特征摘要】 【专利技术属性】
20180604 FR 18548351.一种遗传工具，其允许对梭状芽孢杆菌属(Clostridium)的细菌进行转化和通过同源重组进行遗传修饰，其特征在于
i)它包含：
-至少编码Cas9的第一核酸，其中编码Cas9的序列被置于启动子的控制之下，和
-至少一种含有修复模板的第二核酸，其允许通过同源重组机制将被Cas9靶向的细菌DNA的一部分用感兴趣的序列代替，
ii)所述核酸中的至少一者还编码一个或多个指导RNA(gRNA)，或者所述遗传工具还包含一个或多个指导RNA，每个指导RNA包含结合Cas9酶的RNA结构和与所述细菌DNA的被靶向部分互补的序列，和
iii)所述核酸中的至少一者还包含置于诱导型启动子的控制之下的编码抗CRISPR蛋白的序列，或者所述遗传工具还包含置于诱导型启动子的控制之下的编码抗CRISPR蛋白的第三核酸。
2.权利要求1的工具，其特征在于所述梭状芽孢杆菌属(Clostridium)的细菌是选自以下的产溶剂细菌：丙酮丁醇梭状芽孢杆菌(C.acetobutylicum)、解纤维梭状芽孢杆菌(C.cellulolyticum)、植物发酵梭状芽孢杆菌(C.phytofermentans)、拜氏梭状芽孢杆菌(C.beijerinckii)、糖丁酸梭状芽孢杆菌(C.saccharobutylicum)、C.saccharoperbutylacetonicum、产芽孢梭状芽孢杆菌(C.sporogenes)、丁酸梭状芽孢杆菌(C.butyricum)、金黄丁酸梭状芽孢杆菌(C.aurantibutyricum)、酪丁酸梭状芽孢杆菌(C.tyrobutyricum)。
3.权利要求2的工具，其特征在于当所述细菌是丙酮丁醇梭状芽孢杆菌(C.acetobutylicum)时，所述丙酮丁醇梭状芽孢杆菌(C.acetobutylicum)细菌是菌株DSM792(也被称为ATCC824或LMG5710)，并且当所述产溶剂细菌是拜氏梭状芽孢杆菌(C.beijerinckii)时，所述拜氏梭状芽孢杆菌(C.beijerinckii)细菌是菌株NCIMB8052或菌株DSM6423(也被称为NRRLB–593、LMG7814或LMG7815)。
4.权利要求1至3任一项的工具，其特征在于所述编码抗CRISPR蛋白的序列是由所述第一核酸携带的。
5.权利要求1至4任一项的工具，其特征在于所述抗CRISPR蛋白是AcrIIA2蛋白或AcrIIA4蛋白。
技术研发人员：尼古拉斯·洛普斯费雷拉，弗朗索瓦·瓦塞尔斯，格拉迪斯·沙尔捷，
申请(专利权)人：IFP新能源公司，
类型：发明
国别省市：法国;FR
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