The invention provides a single cell glycosyl metabolism labeling method based on a glass nanoelectrode, which comprises the following steps: (1) injecting a sugar containing azido or alkynyl group into a glass nanotube; (2) after the working electrode selects a cell, using an inverted microscope to adjust the nanotube to the nanotube tip and insert the cell, observing the process through an imaging system, and applying 2 At a DC voltage of 00 \u2011 800mv, the sugar containing azido or alkynyl group is injected into the cytoplasm after being electrified for 2 \u2011 8min; (3) the orthogonal fluorescent group mark is generated through the azido / alkynyl bond reaction. The invention provides an imaging detection of glycan mark on the surface of single cell with high accuracy, which greatly shortens the time, improves the specificity and sensitivity of detection, and adopts the nano electrode marking technology to reduce the experimental amount of unnatural sugar, and can carry out the re experiment when the operation is successful.
【技术实现步骤摘要】
基于玻璃纳米电极的单细胞糖基新陈代谢标记方法
本专利技术涉及细胞活体成像分析技术,具体地说,涉及基于玻璃纳米电极的单细胞糖基新陈代谢标记方法。
技术介绍
近年来,研究表明细胞表面聚糖的表达可以为阐明其如结构组成、细胞识别、疾病发生等方面的生物功能作用及其对人类疾病的影响提供有价值的信息。随着使用代谢标记检测细胞表面聚糖这一方法的蓬勃发展,其解决了利用从植物或动物中提取的凝集素对于糖类的识别时选择性差的缺点,大大提高了特异性和成像效果。所有细胞的表面都装饰着密集的糖链。单糖作为各种糖缀合物的前体,被细胞摄取以构建各种糖基结构。单细胞表面膜聚糖的监测和调控能力在糖生物学、细胞生物学和病理学中发挥着重要作用。因此我们使用了人工糖进行代谢标记,然而,由于代谢标记需要使用非天然糖,这些人工糖通常不加区分地进入细胞,导致大量细胞中聚糖的全局标记。这一限制否定了在单细胞水平上研究聚糖表达谱的能力。研究表面上相同细胞的聚糖表达多样性,对于提高我们在单细胞水平上对遗传异质性的理解至关重要。目前,单细胞技术,特别是单细胞成像技术的发展取得了重大进展。纳米线、纳米管、纳米电极等纳米尺度器件由于具有较高的时空分辨率,在单细胞研究中显示出巨大的应用前景。值得注意的是,插入基于玻璃纳米管的无损装置可以分析单个活细胞中的特定分子。纳米管制备方便,使用方便。纳米管具有超小的尖端面积(直径小于100纳米),为精确定位和运输单个活细胞提供了良好的工具,且损伤小。目前,多种检测细胞表面聚糖的方法已被提出。其中传统检测方法是通过体外内吞作用 ...
【技术保护点】
1.基于玻璃纳米电极的单细胞糖基新陈代谢标记方法,其特征在于,包括如下步骤:/n(1)将含叠氮基或炔基的糖注入玻璃纳米管;/n(2)纳米管中有一个电极作为工作电极插入充满细胞的溶液中,另一个电极作为参比电极浸入培养基中,工作电极选定细胞后使用倒置显微镜通过微操对纳米管进行调整至纳米管尖端插入细胞,通过成像系统对于这一过程进行观察,并施加200-800mV的直流电压,通电2-8min将所述含叠氮基或炔基的糖注入细胞质内;/n(3)将步骤(2)选定的细胞放回培养箱中继续孵育使所述含叠氮基或炔基的糖在细胞表面表达后,加入带有炔基或叠氮基的荧光染料继续孵育,使带有炔基的荧光染料与细胞表面含叠氮基的糖结合,或者带有叠氮基的荧光染料与细胞表面含炔基的糖结合,随后用细胞培养液冲洗,使用荧光成像技术对于单细胞进行原位标记成像。/n
【技术特征摘要】
1.基于玻璃纳米电极的单细胞糖基新陈代谢标记方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)将含叠氮基或炔基的糖注入玻璃纳米管;
(2)纳米管中有一个电极作为工作电极插入充满细胞的溶液中,另一个电极作为参比电极浸入培养基中,工作电极选定细胞后使用倒置显微镜通过微操对纳米管进行调整至纳米管尖端插入细胞,通过成像系统对于这一过程进行观察,并施加200-800mV的直流电压,通电2-8min将所述含叠氮基或炔基的糖注入细胞质内;
(3)将步骤(2)选定的细胞放回培养箱中继续孵育使所述含叠氮基或炔基的糖在细胞表面表达后,加入带有炔基或叠氮基的荧光染料继续孵育,使带有炔基的荧光染料与细胞表面含叠氮基的糖结合,或者带有叠氮基的荧光染料与细胞表面含炔基的糖结合,随后用细胞培养液冲洗,使用荧光成像技术对于单细胞进行原位标记成像。
2.根据权利要求1所述的基于玻璃纳米电极的单细胞糖基新陈代谢标记方法,其特征在于,所述纳米管的孔径为50-100nm。
3.根...
【专利技术属性】
技术研发人员:钱若灿,周泽蕊,汪肖原,
申请(专利权)人:华东理工大学,
类型:发明
国别省市:上海;31
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