【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物化学纳米材料，具体涉及一种用于防治害虫的杀灭剂及其制备方法。
技术介绍
1、近年来由于气候和栽培制度等问题，导致农业害虫所造成的损失逐年加重。对于害虫的控制一治，长期和过量的使用化学药剂造成害虫抗性大幅增加，同时也引起了作物中农直依赖于化学药剂防药残留超标和环境污染问题，并进一步影响人们的健康。
2、rna干扰(rnai)已经成为害虫防治领域研究的热点和前沿，并在害虫防治方面取得了显著的研究进展。但是当外源双链rna进入昆虫体内后易被核酸酶降解以及存在吸收和内涵体逃逸等问题，致使rnai的效率大大降低。因此找到合适有效的方法来保护和递送双链rna进入昆虫体内是提高昆虫rnai效率的直接方法。
3、核酸自组装纳米载体具有较好的柔性结构，且可以有效降低双链rna降解，因此在昆虫rnai研究中，核酸自组装纳米载体有望成为昆虫双链rna新的有效递送方式。
4、钙离子作为第二信使可将细胞外信号转到细胞内参与多种途径的调控，以黄曲条跳甲钙离子结合蛋白基因(rcn基因)为靶标进行rna干扰，有望成为一种新的防治黄曲条跳甲的方法。此外，害虫防控的另一难题主要是害虫抗药性问题，其中，害虫体内p450等解毒代谢酶基因的过量表达是引起代谢抗性的主要原因。针对害虫p450基因为靶标进行rna干扰，有望降低害虫代谢抗性水平，同时有利于提高化学农药的毒力效果。
5、针对以上现有问题，目前亟需研究一种新兴的仅由rna分子自组装的用于防治黄曲条跳甲的杀灭剂及其制备方法。
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1、本专利技术提供了一种用于防治昆虫的杀灭剂及其制备方法，所述用于防治昆虫或用于制备防治昆虫的农用组合物。
2、在本专利技术的第一方面，提供了一种防治昆虫的杀灭剂，所述杀灭剂为长链核酸，所述长链核酸中含有n个式i的结构单元，其中n为≥5的正整数：
3、seq正向-x-seq反向(i)
4、式中，
5、seq正向为靶向昆虫基因的核苷酸序列；
6、seq反向为与seq正向互补或基本上互补的核苷酸序列；
7、x为位于seq正向和seq反向之间的茎环序列，并且所述茎环序列与seq正向和seq反向不互补；
8、所述式i的结构单元是抑制所述昆虫基因的shrna构建物，
9、所述长链核酸经体外滚环转录形成，并且所述的长链核酸经折叠缠绕自发形成微球。
10、在另一优选例中，所述微球是长链核酸经折叠缠绕自发形成。
11、在另一优选例中，seq正向、seq反向的长度各自独立地为20-24nt。
12、在另一优选例中，所述昆虫基因选自下组：钙离子结合蛋白基因(rcn)、细胞色素p450 mrna(p450)、18s核糖体rna(pr)、线粒体(pm)、微管蛋白γ链(pt)或其组合。
13、在另一优选例中，所述微球的流体动力学半径为200-900nm，较佳地400-700nm，更佳地500-600nm。
14、在另一优选例中，所述昆虫选自：鞘翅目。
15、在另一优选例中，所述昆虫选自：叶甲科。
16、在另一优选例中，所述昆虫选自：黄曲条跳甲。
17、在另一优选例中，所述昆虫基因选自下组：钙离子结合蛋白基因(rcn)、p450mrna(p450)或其组合。
18、在另一优选例中，所述昆虫的基因选自下组：黄曲条跳甲钙离子结合蛋白基因(rcn)、黄曲条跳甲细胞色素p450 mrna(p450)、黄曲条跳甲18s核糖体rna(pr)、黄曲条跳甲线粒体(pm)、黄曲条跳甲微管蛋白γ链(pt)或其组合。
19、在另一优选例中，所述昆虫基因的序列如genbank:jq743206.1所示。
20、在另一优选例中，所述昆虫基因的序列如genbank:ms795398.1所示。
21、在另一优选例中，所述昆虫基因序列如genbank:fj973971.1所示。
22、在另一优选例中，所述昆虫基因序列如ncbi reference sequence:nc_045901.1所示。
23、在另一优选例中，所述昆虫基因的基因序列如genbank:mt863568.1所示。
24、在另一优选例中，所述seq正向的核苷酸序列选自下组：seq id no:1-7中所示的任一序列。
25、(注：所述seq id no:1-7为seq正向-1、seq正向-2、seq正向-3、seq正向-4、seq正向-5、seq正向-6、seq正向-7)。
26、在另一优选例中，所述seq正向的核苷酸序列选自下组：seq id no:1-4，更佳地选自下组：seq id no:1或2。
27、在另一优选例中，所述seq正向-1的核苷酸序列为：5’-ata gat ttt gat gga gaaaac-3’，rcn-1(seq id no:1)。
28、在另一优选例中，所述seq正向-2的核苷酸序列为：5’-gaa tac gat cat tta cctccg-3’，rcn-2(seq id no:2)。
29、在另一优选中，所述seq正向-3的核苷酸序列为：5’-gat aca atc agg aaa taaacc-3’，rcn-3(seq id no:3)。
30、在另一优选中，所述seq正向-4的核苷酸序列为：5’-cga agg ttt ttc gat tttcgg-3’，p450(seq id no:4)。
31、在另一优选例中，所述shrna构建物如式ii所示，
32、
33、式中，
34、seq’正向为靶向昆虫基因的核苷酸序列；
35、seq’反向为与seq’正向互补或基本上互补的序列；
36、x’为无；或为位于seq’正向和seq’反向之间的茎环序列，并且所述茎环序列与seq’正向和seq’反向不互补；
37、其中，所述的靶向昆虫基因选自下组：钙离子结合蛋白基因(rcn)、18s核糖体rna(pr)、线粒体(pm)、微管蛋白γ链(pt)、细胞色素p450 mrna(p450)或其组合；
38、||表示在seq正向和seq反向之间形成的氢键。
39、在另一优选例中，seq正向、seq反向的长度各自独立地为20-24nt。
40、在另一优选例中，所述的茎环序列x/x’的长度为4-10nt。
41、在本专利技术的第二方面，提供了一种农用组合物，所述组合物包括：第一方面所述的杀灭剂作为第一活性成分和农药上可接受的载体。
42、在另一优选例中，所述的农用组合物还含有除第一活性成分之外的第二活性成分。
43、在另一优选例中，所述的第二活性成分选自下组：除草剂、杀虫剂、除螨剂、或其组合。...
【技术保护点】
1.一种防治昆虫的杀灭剂，其特征在于，所述杀灭剂为长链核酸，所述长链核酸中含有n个式I的结构单元，其中n为≥5的正整数：
2.如权利要求1所述的杀灭剂，其特征在于，所述昆虫基因选自下组：钙离子结合蛋白基因(RCN)、P450 mRNA(P450)或其组合。
3.如权利要求1所述的杀灭剂，其特征在于，所述Seq正向的核苷酸序列选自下组：SEQ IDNO:1-7中所示的任一序列。
4.如权利要求1所述的杀灭剂，其特征在于，所述shRNA构建物如式II所示，
5.一种农用组合物，其特征在于，所述组合物包括：权利要求1所述的杀灭剂作为第一活性成分和农药上可接受的载体。
6.如权利要求5所述组合物，其特征在于，所述组合物为水凝胶状。
7.如权利要求5所述组合物，其特征在于，所述农药学上可接受的载体包括水、增效剂、表面活性剂或稳定剂。
8.一种如权利要求1所述的防治昆虫的杀灭剂的制备方法，其特征在于，所述方法包括步骤：
9.如权利要求1所述杀灭剂的用途，其特征在于，所述杀灭剂用于防治昆虫或用于制备
10.一种防治害虫的方法，其特征在于，所述方法包括：
...【技术特征摘要】
1.一种防治昆虫的杀灭剂，其特征在于，所述杀灭剂为长链核酸，所述长链核酸中含有n个式i的结构单元，其中n为≥5的正整数：
2.如权利要求1所述的杀灭剂，其特征在于，所述昆虫基因选自下组：钙离子结合蛋白基因(rcn)、p450 mrna(p450)或其组合。
3.如权利要求1所述的杀灭剂，其特征在于，所述seq正向的核苷酸序列选自下组：seq idno:1-7中所示的任一序列。
4.如权利要求1所述的杀灭剂，其特征在于，所述shrna构建物如式ii所示，
5.一种农用组合物，其特征在于，所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：须志平，徐嘉政，李忠，程家高，邵旭升，徐晓勇，朱语彤，
申请(专利权)人：华东理工大学，
类型：发明
国别省市：
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