多肽、其衍生物及其在制备防治肿瘤的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种特异性结合β‑catenin的多肽，其为氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有TRIB3活性的TRIB3突变体。还公开了所述多肽的衍生物，其为所述多肽与穿膜肽连接形成的嵌合肽。本发明专利技术公开了含所述多肽或多肽衍生物为活性成分的抗肿瘤的药物组合物。还公开了所述多肽、多肽衍生物和药物组合物在制备预防和/或治疗与TRIB3及β‑catenin相关的疾病特别是肿瘤的药物中的应用。所述药物组合物具有与β‑catenin特异性结合，并能阻断TRIB3和β‑catenin蛋白结合的能力，同时可以降低TRIB3的蛋白水平。制备的药物具有疗效显著、毒副作用少、使用安全的优点。

Polypeptides, their derivatives and their application in the preparation of anticancer drugs

The invention discloses a peptide specifically binding to \u03b2 - Catenin, which is a TRIB3 mutant with the activity of TRIB3 after the amino acid sequence is replaced, missing or added with one or several amino acids. A derivative of the polypeptide is also disclosed, which is a chimeric peptide formed by connecting the polypeptide and the membrane penetrating peptide. The invention discloses an anti-tumor pharmaceutical composition containing the polypeptide or polypeptide derivative as an active component. The application of the polypeptide, polypeptide derivative and pharmaceutical composition in the preparation of drugs for preventing and / or treating diseases related to TRIB3 and \u03b2 - Catenin, especially tumors is also disclosed. The pharmaceutical composition has a specific binding with \u03b2 - Catenin, and can block the binding ability of TRIB3 and \u03b2 - Catenin protein, and can reduce the protein level of TRIB3 at the same time. The prepared medicine has the advantages of obvious curative effect, less side effects and safe use.

【技术实现步骤摘要】
多肽、其衍生物及其在制备防治肿瘤的药物中的应用
本专利技术属于生物
，具体涉及多肽、其衍生物及其在制备防治肿瘤的药物中的应用。
技术介绍
Wnt/β-catenin信号通路于多种肿瘤(结肠癌、肝癌、肺癌、胰腺癌、胶质瘤及乳腺癌)中都存在异常活化，在肿瘤发生、肿瘤增殖、肿瘤转移、肿瘤休眠、肿瘤免疫、肿瘤耐药及维持肿瘤干性等方面都发挥促进作用。β-catenin作为该信号通路的效应分子，通常会被其降解复合物成员Axin-2、APC及GSK-3β等磷酸化，进而进入泛素化途径降解。而当Wnt信号异常激活时，其降解复合物成员解体，细胞浆内堆积的β-catenin会转位进入细胞核内与LEF/TCF家族形成转录复合物，共同促进多种致癌因子的转录，从而促进肿瘤的发展进程。目前，针对该通路的靶向抑制剂主要包括小分子药物、抗体类药物、RNA干扰药物及天然产物。在为期三十多年的研究中，除少数药物进入临床试验外，多数药物仍处于临床前研究当中，尚未见靶向药物上市。在研药物作用类型主要分为四种：抑制配基Wnt-3a与细胞膜表面受体LRP5/6及Frizzled的结合；降低β-catenin的蛋白表达水平；抑制β-catenin的细胞核转位；抑制细胞核内β-catenin/TCF转录复合物的活性。由于Wnt-3a与受体结合这一过程并不是导致β-catenin升高的唯一因素，如在多种结肠癌中β-catenin本身或者其降解复合物组分APC的突变是诱导该通路异常激活的关键步骤，所以第一类药物普适性不强。第二类药物主要为GSK-3β、Axin-2、PKA等β-catenin降解复合物成员的激动剂，同样由于β-catenin等上游信号蛋白的突变，使这种类型药物的应用也存在局限性；此外，由于β-catenin在生理状态下维持细胞膜及细胞骨架的正常结构，故下调β-catenin的蛋白水平可能存在较大风险。所以对β-catenin的调控重心应该放在抑制β-catenin入核或抑制其在细胞核内转录复合物的活性这两个方面。目前由于入核抑制剂的靶向专一性不强，使这类药物的开发难度大大增加。而一些打断β-catenin及转录辅因子TCF4相互作用的化合物或多肽药物直接作用于该信号通路的下游分子，靶向性强、副作用小，具有良好的抑制肿瘤发生和发展的成药前景。TRIB3(TribblesHomologue3)是人体中假性激酶Tribbles同源蛋白家族成员之一，具有接头蛋白样的功能，参与多种蛋白复合体的组装。其最早在果蝇中被鉴定到，并发现该蛋白能抑制有丝分裂，调节发育过程中细胞的增殖、迁移及形态形成。TRIB3通过与多种蛋白相互作用，在糖脂代谢、脂肪细胞分化、凋亡、应激和胶原表达等生理、病理过程中发挥重要的调控作用。TRIB3在多种肿瘤细胞系和人肿瘤组织中呈现高表达。在我们前期的研究中发现TRIB3能与Smad3相互作用，增强TGF-β/Smad3信号通路活性，促进肿瘤侵袭。此外，我们还发现，肿瘤微环境中的高胰岛素(insulin)及胰岛素样生长因子1(IGF-1)可以上调TRB3的表达。TRIB3与自噬受体P62相互作用，抑制P62与LC3及泛素化底物结合，从而造成P62和泛素化蛋白堆积，并继发性抑制蛋白酶体功能。TRIB3对自噬及泛素蛋白酶体系统的抑制连接了糖尿病和肿瘤的恶性进程。我们的研究发现肿瘤当中，TRIB3与β-catenin在细胞核内存在直接相互作用，并共同促进肿瘤的发生、发展。但由于β-catenin与TCF4蛋白相互作用面积过大，小分子药物的介入不能起到较好的打断作用。此外，TRIB3作为肿瘤发展进程中的重要蛋白，靶向该蛋白的药物目前尚未见报道。因此，如何能够提供一种药物，通过打断β-catenin/TRIB3相互作用，减弱β-catenin/TCF4的转录活性，进而对Wnt/β-catenin信号通路相关的肿瘤进行有效的治疗，是本领域急需解决的难题。
技术实现思路
为解决现有技术中Wnt/β-catenin信号通路调控机制复杂，药物研发进程缓慢，缺乏一种有效抑制β-catenin转录激活活性的药物的缺陷，本专利技术提供一种多肽、其衍生物及其在制备防治肿瘤的药物中的应用。本专利技术提供的技术方案之一为：一种特异性结合β-catenin的多肽，其为氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有TRIB3活性的TRIB3突变体。较佳地，其为氨基酸序列如SEQIDNO：1所示的多肽。实验发现，氨基酸序列如SEQIDNO：1所示的多肽T3A6能与β-catenin特异性结合，不仅可以抑制Wnt/β-catenin信号通路，还可以降低TRIB3的蛋白水平表达。本专利技术提供的技术方案之一为：一种上述特异性结合β-catenin的多肽的衍生物，所述的多肽的衍生物为所述的多肽与穿膜肽连接所形成的嵌合肽。优选地，所述穿膜肽连接在所述多肽的N端或者C端。更优选地，所述穿膜肽为Pep2，其氨基酸序列如SEQIDNO：2所示。最优选地，所述嵌合肽的氨基酸序列如SEQIDNO：3所示。本专利技术提供的技术方案之一为：一种抗肿瘤的药物组合物，其活性成分含有所述的多肽，或所述的多肽的衍生物。优选地，所述的活性成分为单一活性成分。更优选地，所述的药物组合物还包括其它具有抗肿瘤活性的化合物。所述的活性成分是指具有预防或治疗肿瘤功能的化合物。在所述药物组合物中，所述靶向抑制β-catenin转录活性及TRIB3蛋白水平的多肽可以单独作为活性成分或和其他具有抗肿瘤活性的化合物一起作为活性成分。优选地，还包括药用载体和/或赋形剂。所述的载体或赋形剂为本领域常规药用载体或赋形剂，所述的载体或赋形剂可以为任意合适的生理学或药学上可接受的药物辅料。所述的药物辅料为本领域常规的药物辅料，较佳地包括药学上可接受的赋形剂、填充剂或稀释剂等。更佳地，所述的药物组合物包括0.01～99.99％的上述多肽和0.01～99.99％的药用载体或赋形剂，所述百分比为占所述药物组合物的质量百分比。更优选地，其给药途径为注射给药或口服给药。所述注射给药较佳地包括静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、皮内注射或皮下注射等途径。所述的药物组合物为本领域常规的各种剂型，较佳地为固体、半固体或液体的形式，可以为水溶液、非水溶液或混悬液，更佳地为片剂、胶囊、颗粒剂、注射剂或输注剂等。较佳地，所述的药物组合物的施用量为有效量，所述有效量为能够缓解或延迟疾病、退化性或损伤性病症进展的量。所述有效量可以以个体基础来测定，并将部分基于待治疗症状和所寻求结果的考虑。本专利技术提供的技术方案之一为：上述的多肽、多肽的衍生物或药物组合物以及TRIB3在制备预防和/或治疗与β-catenin相关的疾病特别是肿瘤的药物中的应用。本专利技术提供的技术方案之一为：TRIB3抑制剂或拮抗剂在制备防治与β-catenin相关的疾病，特别是肿瘤的药物中的应用。较佳地，上述两个技术方案中的肿瘤选自肠癌、肝癌、肺癌、胰腺癌或乳腺癌。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种特异性结合β-catenin的多肽，其特征在于，其为氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有TRIB3活性的TRIB3突变体；较佳地，其为氨基酸序列如SEQID NO：1所示的多肽。/n

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合β-catenin的多肽，其特征在于，其为氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有TRIB3活性的TRIB3突变体；较佳地，其为氨基酸序列如SEQIDNO：1所示的多肽。


2.一种如权利要求1所述的特异性结合β-catenin的多肽的衍生物，其特征在于，所述多肽的衍生物为所述多肽与穿膜肽连接形成的嵌合肽；优选地，所述穿膜肽连接在所述多肽的N端或者C端。


3.如权利要求2所述的特异性结合β-catenin的多肽的衍生物，其特征在于，所述穿膜肽为Pep2，其氨基酸序列如SEQIDNO：2所示。


4.如权利要求3所述的特异性结合β-catenin的多肽的衍生物，其特征在于，所述嵌合肽的氨基酸序列如SEQIDNO：3所示。


5.一种抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，其活性成分含有如权利要求1所述的多肽，或如权利要求2～4任一项所述的多肽的衍生物；优选地，所述活性成分为单一活性成分；更优选地，所述的活性成分还包括其它具有抗肿瘤活性的化合物。


6.如权利要求5所述的抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，所述抗肿瘤的药物组合物还包括药用载体、填...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡卓伟，花芳，尚爽，
申请(专利权)人：胡卓伟，
类型：发明
国别省市：北京;11