The invention discloses a system, method and application for saving pig intestinal type a coronavirus. The system includes: a recombinant transcription vector containing the whole genome DNA of porcine intestinal type a coronavirus; an auxiliary plasmid containing the seacov \u2011 N gene. The invention successfully constructs sads \u2011 cov / seacov reverse genetic operation system, the generated virus can be passed on continuously, and the rescue virus has the same biological characteristics as the parent virus. The establishment of reverse genetics system is hindered by the instability and toxicity of virus genome sequence. This rescue method has potential application value in the research of reverse genetics of porcine coronavirus and vaccine creation, and has wide application prospect in the research of virus gene function.
【技术实现步骤摘要】
一种用于拯救猪肠道甲型冠状病毒的系统、方法及应用
本专利技术涉及生物
,特别是涉及一种用于拯救猪肠道甲型冠状病毒的系统、方法及应用。
技术介绍
中国是世界第一养猪大国,规模化养殖发展迅速。但随着规模化养猪的快速发展,冠状病毒感染对养猪业的危害越来越大。因此,加强猪冠状病毒的感染与致病机理的认识,将为这些疫病防控提供新的理论与技术支持。2017年在华南首次发现的猪肠道甲型冠状病毒(swineentericalphacoronavirus,SeACoV)又称猪急性腹泻综合征病毒(SwineacuteDiarrhoeaSyndromeCoronavirus,SADS-CoV)引发仔猪严重腹泻,是进化起源为蝙蝠HKU2-CoV的新型冠状病毒。与HKU2相比,SADS-CoV/SeACoV的S蛋白存在高度变异,并主要集中在N端区域(NTD,domain0)的1-238位氨基酸:该区域有75个氨基酸点突变及2个氨基酸的插入。我们推测NTD上的高度变异可能导致了从蝙蝠冠状病毒HKU2变异为猪SeACoV,从而跨种属从蝙蝠传播 ...
【技术保护点】
1.一种用于拯救猪肠道甲型冠状病毒的系统,其特征在于,包括:/n包含猪肠道甲型冠状病毒全基因组DNA的重组转录载体;/n包含SeACoV-N基因的辅助质粒,/n其中,所述猪肠道甲型冠状病毒为单股正链RNA病毒,所述猪肠道甲型冠状病毒全基因组DNA是指猪肠道甲型冠状病毒正链RNA序列对应的DNA序列,所述SeACoV-N基因的序列为猪肠道甲型冠状病毒编码该基因的RNA序列对应的DNA序列。/n
【技术特征摘要】
1.一种用于拯救猪肠道甲型冠状病毒的系统,其特征在于,包括:
包含猪肠道甲型冠状病毒全基因组DNA的重组转录载体;
包含SeACoV-N基因的辅助质粒,
其中,所述猪肠道甲型冠状病毒为单股正链RNA病毒,所述猪肠道甲型冠状病毒全基因组DNA是指猪肠道甲型冠状病毒正链RNA序列对应的DNA序列,所述SeACoV-N基因的序列为猪肠道甲型冠状病毒编码该基因的RNA序列对应的DNA序列。
2.如权利要求1所述的系统,其特征在于,所述重组转录载体使用质粒为pSB,所述辅助质粒使用的质粒为pRK5。
3.如权利要求1所述的系统,其特征在于,所述拯救猪肠道甲型冠状病毒全基因组cDNA的第24222-24224位碱基由AGT突变为TCT。
4.一...
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