纠正ob/ob小鼠瘦素基因点突变的基因编辑系统及其应用技术方案

本发明专利技术涉及一种CRISPR‑Cas9系统，包括sgRNA1表达框、sgRNA2表达框和Cas9表达框，以及用于修复点突变的donor序列，sgRNA1和sgRNA2分别靶向待编辑位点上有和下游DNA序列。本发明专利技术包含双sgRNA的CRISPR‑Cas9系统大大提高了切割双链DNA的效率；还提供了该CRISPR‑Cas9系统在基因编辑中的非治疗性应用；还提供了该CRISPR‑Cas9系统在制备用于治疗单基因突变引起的遗传病的药物中的应用。切割效率可高达75％，并且两个sgRNA均未检测到脱靶效应。根据sgRNA位置，donor序列依据密码子简并性进行了密码子优化，避免donor被crispr‑cas9系统被切割。

Gene editing system for correcting point mutation of leptin gene in ob / ob mice and its application

The invention relates to a CRISPR \u2011 cas9 system, which comprises a sgrna1 expression frame, a sgrna2 expression frame and a cas9 expression frame, as well as a donor sequence for repairing point mutations. Sgrna1 and sgrna2 target DNA sequences on and downstream of the site to be edited, respectively. The CRISPR \u2011 cas9 system including double sgRNA greatly improves the efficiency of cutting double strand DNA; also provides the non therapeutic application of the CRISPR \u2011 cas9 system in gene editing; also provides the application of the CRISPR \u2011 cas9 system in the preparation of drugs for treating genetic diseases caused by single gene mutation. The cutting efficiency was as high as 75%, and no miss effect was detected in both sgRNAs. According to the location of sgRNA, the donor sequence is optimized according to the codon degeneracy to avoid the donor being cut by CRISPR \u2011 cas9 system.

【技术实现步骤摘要】
纠正ob/ob小鼠瘦素基因点突变的基因编辑系统及其应用
本专利技术涉及生物医药领域。更特别地，涉及一种可用于纠正ob/ob小鼠前脂肪细胞瘦素基因点突变的CRISPR-Cas9系统及其应用。
技术介绍
肥胖是一种由遗传和环境等多种因素引起的慢性代谢性疾病，与饮食习惯和生活方式密切相关。近年来，肥胖发病率以惊人的速度增加，成为全球性的公共卫生问题。数据显示全球三分之一的人口面临超重和肥胖的危机，全球成年肥胖发病率最高的是埃及大约为35％，青少年肥胖率最高的是美国大约为13％，超重肥胖人口数量最多的是中国，已经超过3亿人。现已发现与肥胖有关的基因达600多种。研究较多的有FTO基因、瘦素(Leptin)、增食欲素基因(OrexinA、B)、肽酪氨酸酪氨酸(PYY)、SECL6B、黑皮素4受体(Mc4R)、神经肽Y基因(NPY2R)、伽马氨丁酸2(GAD2)等。瘦素基因的纯合突变导致先天性瘦素缺乏，人或其他哺乳动物出现饱腹感缺失、食欲过盛和极度早发性肥胖，伴随多种代谢、激素和免疫异常等症状。其最理想的治疗方法是通过基因编辑的方式使该突变本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种CRISPR-Cas9系统，其特征在于，包括sgRNA1表达框、sgRNA2表达框和Cas9表达框，所述sgRNA1和sgRNA2分别具有不同向导序列靶向待编辑位点附近的DNA序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种CRISPR-Cas9系统，其特征在于，包括sgRNA1表达框、sgRNA2表达框和Cas9表达框，所述sgRNA1和sgRNA2分别具有不同向导序列靶向待编辑位点附近的DNA序列。


2.根据权利要求1所述的CRISPR-Cas9系统，其特征在于，所述sgRNA1表达框、sgRNA2表达框和Cas9表达框分别处于不同的操纵子中。


3.根据权利要求1所述的CRISPR-Cas9系统，其特征在于，所述sgRNA1的向导序列靶向待编辑位点的一侧，并且所述sgRNA2的向导序列靶向待编辑位点的另一侧。


4.根据权利要求1所述的CRISPR-Cas9系统，其特征在于，还包括与突变位点及其附近序列同源的donor片段的表达框。


5.根据权利要求4所述的CRISPR-Cas9系统，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：金肆，朱琳，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属梨园医院，
类型：发明
国别省市：湖北;42