作为病毒抑制的靶标的PUM1蛋白制造技术

公开了一种在对象中用于预防或治疗病毒感染或用于调节先天免疫的方法，包含向所述对象施用治疗有效量的PUM1抑制剂。还公开了包含所述PUM1抑制剂的药物组合物。

Pum1 protein as a target of virus inhibition

A method for preventing or treating viral infection or regulating innate immunity in an object is disclosed, comprising administering a therapeutically effective amount of pum1 inhibitor to the object. A pharmaceutical composition including the pum1 inhibitor is also disclosed.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】作为病毒抑制的靶标的PUM1蛋白
在一方面，本专利技术涉及预防或治疗对象中的病毒感染的方法，并且在另一方面，本专利技术涉及调节细胞先天免疫的方法。本专利技术还关注用于在上述方法中使用的药物组合物以及PUM1抑制剂在制备用于在对象中预防或治疗病毒感染或调节细胞先天免疫的药物组合物中的应用。背景人细胞表达两种pumillio蛋白，即PUM1和PUM2。迄今描述的PUM蛋白的主要功能是mRNA转录后调节子的功能。具体地，PUM1和PUM2都含有RNA序列特异性结合结构域。在详细说明相互作用的结果的研究中，结果表明PUM蛋白通过改变它们的构象来改变RNA的功能。其他研究报道PUM蛋白通过许多机制介导翻译沉默。这些机制包括mRNA去腺苷酸化、脱帽、通过阻断翻译起始或通过促进它们与microRNA的相互作用。据报道它们也是受新城疫病毒感染的细胞中应激颗粒的标志物。Pumilio是存在于不同物种中的RNA结合蛋白（RBP）的PUF家族的第一个成员。PUF家族成员容易通过称为PUM重复的不完全重复的36个氨基酸序列基序的8个串联拷贝的存在而被鉴定，并且通常含有进化上保守的序列，所述序列是蛋白质的重复区域的氨基和羧基末端。8个重复序列与末端保守序列一起形成序列特异性的RNA结合结构域，即Pumilio同源结构域（PUM-HD），其结合至mRNA靶标的3'UTR。GenBank和UniGene数据库的人EST区域的BLAST搜索导致人Pumilio1和Pumilio2的鉴定，Pumilio1映射到染色体1p35.2，而Pumilio2映射到染色体2p13-24。人Pumilio1，也称为PUF或RBF，在脑、心脏、肾脏、肌肉、肠和胃以及所有胎儿组织和成人中枢和外周神经系统、心血管、胃肠道、泌尿生殖道、造血和内分泌系统、以及癌细胞系中表达。DNA微阵列研究表明，与经UVB照射的人表皮角质细胞相比，Pumilio1在鳞状细胞癌细胞中下调，这将Pumilio表达的变化与上皮癌相关联。病毒等感染性病原体已经成为并将继续成为人类和动物（包括高密度的养殖动物，如猪和家禽）中重要的病原体。需要鉴定能够减少这些病毒的感染和传播和/或改善由所述病毒引起的病症的药剂。疱疹病毒感染是全世界常见的感染，其包括单纯疱疹病毒1型（HSV-1）和2型（HSV-2）感染。HSV-2是大多数生殖器疱疹的原因，并且通常是性传播的。相反，HSV-1通常通过非性接触传播。先前存在的HSV-1抗体能够减轻随后获得的HSV-2的临床表现。此外，HSV-1已经成为一些发达国家中生殖器疱疹的重要原因。水痘带状疱疹病毒典型地产生不同成熟度的囊泡瘙痒性播散性病变。它最常见于儿童，伴有前驱不适、咽炎和鼻炎，通常伴有发烧和瘙痒（水痘）。水痘带状疱疹病毒可能在成人中引起更严重的疾病，其中病变是局部的和疼痛的，并且通常涉及躯干（带状疱疹）。HSV病毒感染的其他表现可以包括脑炎和角膜炎。尽管已经提出了治疗上述疾病的建议，但是对于预防或治疗宿主的病毒感染的方法仍然存在未满足的需求。概述在本专利技术中，人Pumilio1（PUM1）的消耗导致一系列事件，这些事件导致干扰素（IFN）和干扰素刺激基因的表达。因此，用单纯疱疹病毒1（HSV-1）感染这些细胞，会导致病毒基因表达的下调和病毒产量的显著降低。在本专利技术中，我们显示了通过用siRNA转染未感染的细胞而消耗PUM1的结果是双阶段的。第一阶段大致推断为siPUM1RNA的转染后12至24小时之间的间隔，其特征在于编码LGP2、CXCL10、IL6和PKR的转录物的积累显著增加。第二阶段大致推断为转染后24至48小时之间的间隔，其特征在于编码RIG-1、MAD5、SP100PML和STING、IFNβ的mRNA的积累的增加，并且编码IFNγ的mRNA的积累的程度较小。如从与先天细胞免疫相关的所选基因的上调表达的阵列可以预料的，用siRNA转染24小时后的细胞的感染导致病毒基因产物和病毒产量的显著降低。在本专利技术的一个方面，提供了一种用于预防或治疗对象中的病毒的感染的方法。该方法包含向有此需要的对象施用治疗有效量的PUM1抑制剂。在本专利技术的另一方面，提供了一种用于调节对象中的先天免疫的方法。该方法包含向有此需要的对象施用治疗有效量的PUM1抑制剂。在本专利技术的另一方面，提出了一种用于预防或治疗对象中的病毒的感染或用于调节先天免疫的药物组合物。该药物组合物包含治疗有效量的PUM1抑制剂和药学上可接受的载体。在本专利技术的另一方面，提供了PUM1抑制剂在制备用于预防或治疗对象中的病毒的感染或用于调节对象中的先天免疫的药物组合物中的用途。在本专利技术的一些实施方案中，所述病毒是干扰素敏感的病毒，特别是干扰素β敏感的病毒。在某些实施方案中，该病毒是单纯疱疹病毒1型或2型（HSV-1或HSV-2）。在本专利技术的一些实施方案中，PUM1抑制剂是PUM1选择性抑制剂，即对PUM1特异性的抑制剂。在一些实施方案中，PUM1抑制剂是对PUM家族成员（包括PUM1、PUM2和其他成员）的通用的抑制剂。在一些实施方案中，PUM1抑制剂选自插入PUM1和LGP2之间并破坏它们之间的相互作用的化合物、结合PUM1并阻断所述相互作用的化合物、结合LGP2并阻断所述相互作用但不破坏LGP2的功能的化合物、以及通过囊泡（例如外泌体）递送的靶向编码PUM1的核酸分子以阻断PUM1的合成的反义寡聚体。在一些实施方案中，编码PUM1的核酸分子选自编码PUM1的DNA、从该DNA转录的RNA和来源于这样的RNA的cDNA。在一些实施方案中，反义寡聚体选自DNA寡核苷酸、RNA寡核苷酸（例如，microRNA）和嵌合的寡核苷酸。例如，反义寡聚体选自dsRN、siRNA和shRNA。在一些实施方案中，PUM1抑制剂的施用诱导干扰素和干扰素刺激基因的上调表达。在一些实施方案中，干扰素刺激基因选自LGP2、CXCL10、IL6、PKR、RIG-1、MAD5、SP100、IFIT1、PML和STING。在一些实施方案中，所述施用在病毒的接触或潜在接触之前至少12至72小时进行。在一些实施方案中，所述施用在病毒的接触或潜在接触之前至少48至72小时进行。在优选的实施方案中，所述施用在病毒的接触或潜在接触之前至少72小时进行。本专利技术证明了通过siRNA对PUM1的消耗导致干扰素的产生和干扰素刺激基因的活化。对PUM1的消耗的反应是双阶段的。在siRNA转染后12和24小时之间开始的第一阶段，导致已知调节先天免疫应答的几个基因的表达。第二阶段，在24和48小时之间开始，导致编码干扰素和干扰素刺激基因的mRNA的积累。在本专利技术中，通过暴露于来自用针对PUM1的siRNA转染的细胞的用过的培养基的细胞中单纯疱疹病毒1的复制减少，证明了受刺激的先天免疫应答的影响。用过的培养基与抗干扰素的抗体的预温育，减少了用过的培养基的抑制作用。结果表明，降低PUM1的功能可能是增强针对感染因子的系统性宿主防御的合适方法。附图说明图1。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种预防或治疗对象中的病毒感染的方法，包含向所述对象施用治疗有效量的PUM1抑制剂。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种预防或治疗对象中的病毒感染的方法，包含向所述对象施用治疗有效量的PUM1抑制剂。


2.根据权利要求1所述的方法，其中所述病毒是干扰素敏感的病毒，特别是干扰素β敏感的病毒。


3.根据权利要求2所述的方法，其中所述病毒是单纯疱疹病毒1型或2型。


4.根据权利要求1所述的方法，其中所述PUM1抑制剂是PUM1选择性抑制剂。


5.根据权利要求1或4所述的方法，其中所述PUM1抑制剂选自插入PUM1和LGP2之间并破坏其之间的相互作用的化合物、结合PUM1并阻断所述相互作用的化合物、结合LGP2并阻断所述相互作用但不破坏LGP2的功能的化合物、以及通过囊泡递送的靶向编码PUM1的核酸分子以阻断PUM1的合成的反义寡聚体。


6.根据权利要求4所述的方法，其中所述编码PUM1的核酸分子选自编码PUM1的DNA、从所述DNA转录的RNA、以及来源于这样的RNA的cDNA。


7.根据权利要求4所述的方法，其中所述反义寡聚体选自DNA寡核苷酸、RNA寡核苷酸、以及嵌合寡核苷酸。


8.根据权利要求7所述的方法，其中所述反义寡聚体选自dsRNA、siRNA和shRNA。


9.根据权利要求4所述的方法，其中所述囊泡是外泌体。


10.根据权利要求1所述的方法，其中所述PUM1抑制剂的施用诱导干扰素和干扰素刺激基因的表达上调。


11.根据权利要求10所述的方法，其中所述干扰素刺激基因选自LGP2、CXCL10、IL6、PKR、RIG-I、MAD5、SP100、IFIT1、PML和STING。


12.根据权利要求1所述的方法，其中所述施用是在所述病毒的接触或潜在接触之前至少12至72小时进行。


13.根据权利要求12所述的方法，其中所述施用是在所述病毒的接触或潜在接触之前至少48至72小时进行。


14.根据权利要求1所述的方法，其中所述对象是哺乳动物。


15.根据权利要求10所述的方法，其中所述哺乳动物是人。


16.一种调节对象中的先天免疫的方法，包含向所述对象施用治疗有效量的PUM1抑制剂。


17.根据权利要求16所述的方法，其中所述PUM1抑制剂是PUM1选择性抑制剂。


18.根据权利要求16或17所述的方法，其中所述PUM1抑制剂选自插入PUM1和LGP2之间并破坏其之间的相互作用的化合物、结合PUM1并阻断所述相互作用的化合物、结合LGP2并阻断所述相互作用但不破坏LGP2的功能的化合物、以及通过囊泡（例如外泌体）递送的靶向编码PUM1的核酸分子以阻断PUM1的合成的反义寡聚体。


19.根据权利要求18所述的方法，其中所述编码PUM1的核酸分子选自编码PUM1的DNA、从所述DNA转录的RNA、以及来源于这样的RNA的cDNA。


20.根据权利要求18所述的方法，其中所述反义寡聚体选自DNA寡核苷酸、RNA寡核苷酸、以及嵌合寡核苷酸。


21.根据权利要求18所述的方法，其中所述反义寡聚体选自dsRNA、siRNA和shRNA。


22.根据权利要求16所述的方法，其中所述PUM1抑制剂的施用诱导干扰素和干扰素刺激基因的表达上调。


23.根据权利要求22所述的方法，其中所述干扰素刺激基因选自LGP2、CXCL10、IL6、PKR、RIG-I、MAD5、SP100、IFIT1、PML和STING。


24.根据权利要求10所述的方法，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：周国瑛，伯纳德·罗兹曼，刘永红，
申请(专利权)人：深圳罗兹曼国际转化医学研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44