一种荧光素母体结构的检测肼用荧光探针制造技术

本发明专利技术提供一种荧光素母体结构的检测肼用荧光探针，具体涉及荧光探针领域，S1、将适量二氯荧光素和三乙胺加入到圆底烧瓶中后；S2、加入适量无水二氯乙烷后混合搅拌，向圆底烧瓶中慢慢地滴加适量溶有丙烯酰氯的无水二氯乙烷溶液，在室温下反应，通过TLC监测；S3、待反应结束之后，解除真空状态，旋干溶剂，柱层析，得探针。本发明专利技术运用肼的强亲核特性与探针分子底物的反应，游离出二氯荧光团母体来，荧光从无到有，进而实现对肼的检测研究。

A fluorescent probe for the detection of hydrazine

The invention provides a fluorescent probe for detecting hydrazine with the parent structure of fluorescein, which specifically relates to the field of fluorescent probe. S1. After adding an appropriate amount of dichlorofluorescein and triethylamine into a round bottom flask, S2. After adding an appropriate amount of anhydrous dichloroethane, mix and stir, slowly drop an appropriate amount of anhydrous dichloroethane solution dissolved with acryloyl chloride into the round bottom flask, react at room temperature, and monitor through TLC Measure; S3. After the reaction, remove the vacuum state, spin dry the solvent and column chromatography to obtain the probe. The invention uses the strong nucleophilic property of hydrazine and the reaction of probe molecular substrate to dissociate the parent of dichlorofluorophore, and the fluorescence comes from nothing, so as to realize the detection and research of hydrazine.

【技术实现步骤摘要】
一种荧光素母体结构的检测肼用荧光探针
本专利技术属于荧光探针领域，具体涉及一种荧光素母体结构的检测肼用荧光探针。
技术介绍
荧光素，也称为荧光黄，荧光红，化学名称为3’,6’-二羟基螺[异苯并呋喃-1(3H),9’-(9H)-吨-3-酮]或2-(6-羟基-3-氧代-3H-呫吨-9-基)苯甲酸。虽然荧光素的结构类似于罗丹明的结构，但由于两个苯环通过氧桥连接在同一平面上，该分子在刚性共面表面上具有更大的共轭结构，并且由于激发光的作用而具有强的黄绿色荧光。荧光素及其衍生物具有许多优点：激发波长和发射波长均在可见光范围内，水中荧光量子产率高，消光系数高，无毒副作用，成本低廉等。因此，它通常用作生物染色剂，荧光光度计和氧化还原指示剂等。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种荧光素母体结构的检测肼用荧光探针，基于荧光素衍生物二氯荧光素设计合成了肼检测用荧光探针，并对其分子结构进行了相应的表征分析，运用肼的强亲核特性与探针分子底物的反应，游离出二氯荧光团母体来，荧光从无到有，进而实现对肼的检测研究。本专利技术提供了如下的技术方案：一种荧光素母体结构的检测肼用荧光探针，探针合成步骤如下：S1、根据下述公式，将二氯荧光素(0.40g,1.0mmol)和三乙胺(1.2mmol,168μL)加入到圆底烧瓶中后，S2、在0℃、氮气保护下，加入10mL无水二氯乙烷后混合搅拌，向圆底烧瓶中慢慢地滴加溶有丙烯酰氯(1.5mmol,123μL)的10mL无水二氯乙烷溶液，在室温下反应，通过TLC监测。S3、待反应结束之后，解除真空状态，旋干溶剂，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5:1为淋洗液)，得探针。本专利技术的有益效果：本专利技术运用肼的强亲核特性与探针分子底物的反应，游离出二氯荧光团母体来，荧光从无到有，进而实现对肼的检测研究。附图说明附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。在附图中：图1为探针的检测限；图2为在350μMN2H4存在下，在25℃下，探针(10μM)在水溶液(DMSO/PBS＝1:9,pH＝7.4)中的时间依赖性荧光变化；λex＝504nm；图3为在缓冲溶液中不存在和存在肼的情况下探针(10μM)的吸收光谱变化；图4为荧光光谱变化(DMSO/PBS＝1:9,v/v,10mM,pH＝7.4,在25℃下，λem/ex＝528/504nm)；图5为探针(10μM)对N2H4(350μM)阳离子在在504nm激发时的光谱；图6为各种分析物(1000μM)在缓冲溶液中的荧光响应(DMSO/PBS＝1:9,v/v,10mM,pH＝7.4；λem/ex＝530/504nm)在25℃下阴离子在504nm激发时的光谱；图7为氨基化合物在504nm激发时的光谱；图8为在25℃下在DMSO/PBS(1:9,v/v)中存在和存在N2H4(350μM)时，pH对探针(10μM)的528nm处的荧光强度的影响；图9为在使用365nmUV灯照射下暴露于不同浓度的肼溶液后，含有探针(0.5mM)的滤纸的荧光颜色变化；图10为用探针(0-100μM)处理的HeLa细胞的活力测定；图11为Hela细胞的探针荧光图像(kex＝504nm).(a,c):在37℃下仅用探针(10μM)孵育1小时的细胞；(b,d):用10μM探针预处理细胞1小时，然后用330μMN2H4再预处理0.5小时；(a,b):明亮的场景；(c,d):绿色通道(450-600nm)；图12为肼的4-溴丁酰基探针的传感机制；图13为探针化合物1检测肼时的反应机理图；图14为探针化合物1与肼作用前后的质谱图。具体实施方式除非另有说明，所有化学品均是从商业供应商处获得的，不经进一步纯化就可以直接使用。一切测量均在DMSO/PBS缓冲液(1:9,v/v,10mM,pH＝7.4)中进行，室温下进行滴定和选择性实验。在具有TMS(四甲基硅烷，0.00ppm)作为内标的BrukerDRX-400和DRX-400/4光谱仪上测量相关化合物的1HNMR和13CNMR谱。1HNMR的数据表述如下：化学位移(ppm)，多重性(s＝单峰；d＝双峰；t＝三重峰；q＝四重峰，m＝多重峰)，积分，偶合常数(Hz)。13CNMR谱图以CDCl3(77.67ppm)为参考信号；在E.I.模式中记录质谱。用pH-10C数字pH计进行所有pH值测量。所有测量实验均在室温下进行。采用试剂：二氯荧光素、丙烯酰氯、二氯甲烷、三乙胺、乙酸乙酯、石油醚。采用仪器：不同规格的圆底烧瓶、硅胶柱以及其他相关玻璃仪器；F97pro荧光分光光度计、上海亚荣RE-2000旋转蒸发仪、85-2型恒温磁力搅拌器、DLSB-5/20低温冷却循环泵、SHZ-DIII循环水真空泵、WTH-203型三用紫外分析仪、T-114型电子天平、1800/1600系列紫外可见分光光度计、日本电子JOEL400MHz液体核磁共振谱仪等。根据上述公式将二氯荧光素(0.40g,1.0mmol)和三乙胺(1.2mmol,168μL)加入到圆底烧瓶中后，在0℃、氮气保护下，加入10mL无水二氯乙烷后混合搅拌，向圆底烧瓶中慢慢地滴加溶有丙烯酰氯(1.5mmol,123μL)的10mL无水二氯乙烷溶液，在室温下反应，通过TLC监测。待反应结束之后，解除真空状态，旋干溶剂，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5:1为淋洗液)，得探针(193mg,产率38％)；化合物1:1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm:8.01(d,J＝8.0Hz,1H),7.66(m,2H),7.19(s,1H),7.15(d,J＝8.0Hz,2H),6.82(s,2H),6.64(t,2H),6.60(t,J＝4.0Hz,2H),6.28(q,J＝28.0Hz,2H),6.04(d,J＝12.0Hz,2H).13CNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:168.48,162.86,151.84,149.67,148.27,135.76,134.16,130.62,128.88,126.62,125.61,123.94,122.62,117.62,112.67.MS(ESI,m/z):C26H14Cl2O7,found[M]+509.实验测试：1、光谱材料与方法及量子产率的测定所有水溶液均使用去离子水制备。一切测量均在DMSO/PBS缓冲液(1:9,v/v,10mM，pH＝7.4)中进行。所有的pH值均使用pH-10C数字pH计进行。吸收光谱使用VarianUV-Cary5000分光光度计记录。使用配备有氙闪光灯的HitachiF-7000扫描荧光分光光度计记录荧光光谱。用于吸收和荧光测量的样品被包括在1cm×1cm的石英比色皿(3.5mL体积)中。根据下述公式确定探针的量子产本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种荧光素母体结构的检测肼用荧光探针，其特征在于：探针合成步骤如下：/nS1、根据下述公式，/n

【技术特征摘要】
1.一种荧光素母体结构的检测肼用荧光探针，其特征在于：探针合成步骤如下：
S1、根据下述公式，



将适量二氯荧光素和三乙胺加入到圆底烧瓶中后；
S2、加入适量无水二氯乙烷后混合搅拌，向圆底烧瓶中慢慢地滴加适量溶有丙烯酰氯的无水二氯乙烷溶液，在室温下反应，通过TLC监测。
S3、待反应结束之后，解除真空状态，旋干溶剂，柱层析，得探针。


2.根据权利要求1所述的一种荧光素母体结构的检测肼用荧光探针，其特征在于：S1步骤中,将二氯荧光素(0.40g,1.0mmol)和三乙胺...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘相，孙莹添，苏中兴，黄国生，董翔，牛雁宁，万元，蒋伟，李静，
申请(专利权)人：兰州大学，兰州大学淮安高新技术研究院，江苏星源科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：甘肃;62