一种基于S100蛋白家族的急性胰腺炎严重程度预测模型及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于S100蛋白家族的急性胰腺炎严重程度预测模型及其检测方法，属于急性胰腺炎检测技术领域。本发明专利技术利用S100蛋白家族中的S100A6，S100A8，S100S9，S100A11，S100A12，S100P建立急性胰腺炎严重程度预测模型，该预测模型对重症急性胰腺炎的诊断灵敏度92.30％，特异性84.70％，假阳性率15.30％，假阴性率7.70％。与目前临床使用的量表检测及影像学诊断相比，人为主观性降低，更为准确，而且具有定量检测的效果。

A prediction model and detection method of acute pancreatitis severity based on S100 protein family

The invention discloses an acute pancreatitis severity prediction model based on S100 protein family and a detection method thereof, belonging to the technical field of acute pancreatitis detection. The present invention uses S100A6, S100A8, s100s9, S100A11, S100A12, S100P in S100 protein family to establish acute pancreatitis severity prediction model. The prediction model has a diagnostic sensitivity of 92.30%, a specificity of 84.70%, a false positive rate of 15.30%, and a false negative rate of 7.70% for severe acute pancreatitis. Compared with the scale detection and imaging diagnosis currently used in clinical practice, it is less subjective, more accurate and has the effect of quantitative detection.

【技术实现步骤摘要】
一种基于S100蛋白家族的急性胰腺炎严重程度预测模型及其检测方法
本专利技术涉及一种基于S100蛋白家族的急性胰腺炎严重程度预测模型及其检测方法，属于急性胰腺炎检测

技术介绍
急性胰腺炎是一种最常见胰腺无菌性炎症，主要病理表现为胰腺腺泡细胞损伤坏死和炎性级联反应。据国际临床资料显示，其发病率高达13-45/10万人，且呈现逐年上升趋势。在美国，每年有超过20万的急性胰腺炎患者需住院治疗，直接治疗费用高达20亿美金/年。2012年最新亚特兰大分类根据急性胰腺炎病情严重程度，将急性胰腺炎分为轻症急性胰腺炎(MAP)、中度重症急性胰腺炎(MSAP)、重症急性胰腺炎(SAP)。其中轻度急性胰腺炎是一种自限性疾病，预后较好，但仍有约20-30％的患者病情持续进展为重症急性胰腺炎，严重者出现全身炎症反应综合征和多器官功能衰竭，病死率高达10-30％。我国近年来急性胰腺炎，尤其是重症急性胰腺炎的发病率有升高趋势，高发病风险、病死率及高额的诊疗费用给患者和社会带来沉重的负担。目前，临床主要采用2012年RAC严重程度分级标准，首先将急性胰腺炎病程分为早期(发病第1-2周)和后期(发病1-2周后)。基于患者入院后24h内有无器官功能衰竭(Marshall评分)区分MAP和SAP，根据器官功能衰竭在48h内是否恢复区分MSAP和SAP。早期阶段主要关注是否出现器官功能损伤/衰竭；后期阶段以胰腺/胰周形态学标准作为严重程度分类依据并指导治疗。可以同时结合DBC、Ranson、APACHEII、BalthazarCT分级、MCTSI、CRP、床旁严重程度评价指数(BISAP)、无害化评分(HAPS)等严重程度评价指标。但这些评估方法预测疾病严重程度的主要依赖于临床医师的多年临床实践经验积累，主观性强，且难以实现对重症急性胰腺炎的早期预警。此外，还有研究提出将白介素家族(IL-6、IL-8等)、肿瘤坏死因子(TNF)水平等作为预测急性胰腺炎严重程度的标志物，但这些检测指标对急性胰腺炎严重程度分级，以及对重症急性胰腺炎早期诊断的敏感性、特异性均达不到临床要求，而且还存在检测复杂、费用高昂等局限性。因此，寻找新的、和疾病严重程度及进展密切相关的标记物，对重症急性胰腺炎的早期诊断和治疗将具有重大意义。数据非依赖型采集模式(Data-IndependentAcquisition，DIA)数据采集模式在一级质谱检测时，根据质荷比大小划分一些较大的采集窗口，对每个窗口内所有肽段进行合并分析，获得多个肽段混合二级质谱信号，实现数据的“无损采集”。因此，DIA定量技术具有：(1)无歧视地获得所有肽段的信息，不会造成低丰度蛋白信息的丢失；(2)循环时间固定，扫描点数均匀，定量准确度高；(3)肽段的选择没有随机性，数据可以回溯，对于复杂蛋白样本，特别是低丰度蛋白具有更优异的重现性等优势。2017年，来自苏黎世联邦理工学院的RuediAebersold教授发表于NatureCommunications的文章中，研究者在全球不同地点的11家质谱实验室，采用相同的实验和分析流程，对SWATH技术(DIA技术的一种)进行综合评估，发现DIA定量蛋白质组学数据有非常好的重现性和可靠性，适用于临床大样本检测分析。
技术实现思路
鉴于现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种基于S100蛋白家族的急性胰腺炎严重程度预测模型及其检测方法，旨在解决目前临床尚无有效的急性胰腺炎严重程度预测模型的问题。本专利技术提供了一种基于S100蛋白家族的急性胰腺炎严重程度预测模型，所述急性胰腺炎严重程度预测模型为Y＝ex，其中X＝-3.102+(-5.98E-04)*S100A11+(3.33E-06)*S100A12+(6.28E-05)*S100A6+(2.46E-05)*S100A8+(-2.54E-05)*S100A9+(1.22E-04)*S100P，所述S100A6，S100A8，S100S9，S100A11，S100A12，S100P分别为待检测样本血清中S100A6，S100A8，S100S9，S100A11，S100A12，S100P蛋白的浓度，当Y值>0.14489时，提示为高重症胰腺炎发病风险。在急性胰腺炎严重程度预测模型中包括的6种S100蛋白家族成员表达量均上调表示急性胰腺炎的发生，根据上调的量可预测出急性胰腺炎的严重程度。本专利技术还提供了一种基于S100蛋白家族的急性胰腺炎严重程度的检测方法，包括如下步骤：(1)采集血清，依次加入裂解缓冲液和Tris-HCl缓冲液，所述血清、裂解缓冲液和Tris-HCl缓冲液的体积比为1:20:5，恒温孵育；(2)加入碘乙酰胺，避光恒温孵育；(3)胰酶(胰酶：待检测蛋白质＝1:40，质量比)消化得到肽段，所得肽段加入10μLpH为2-3的三氟乙酸酸化后，以C18SPE柱除盐，然后将所得肽段冻干；(4)步骤(3)得到的样品复溶于复溶溶剂，采用DIA定量蛋白质组学分析方法检测血清中S100A6，S100A8，S100S9，S100A11，S100A12，S100P蛋白的浓度，并通过模型Y＝ex，其中X＝-3.102+(-5.98E-04)*S100A11+(3.33E-06)*S100A12+(6.28E-05)*S100A6+(2.46E-05)*S100A8+(-2.54E-05)*S100A9+(1.22E-04)*S100P计算来进行急性胰腺炎严重程度的预测，当Y值>0.14489时，提示为高重症胰腺炎发病风险。进一步地，上述技术方案中，所述步骤(1)中的裂解缓冲液为0.1M碳酸氢钠，6M尿素以及2M硫脲。进一步地，上述技术方案中，所述步骤(1)中Tris-HCl缓冲液的PH值为8.5。进一步地，上述技术方案中，所述步骤(1)中孵育条件为33℃下恒温孵育45分钟。进一步地，上述技术方案中，所述步骤(2)中碘乙酰胺的浓度为40mM，碘乙酰胺与血清的体积比为1:4，孵育温度为25℃，孵育时间为1h。进一步地，上述技术方案中，所述步骤(3)中胰酶的用量为100μL，浓度为0.01ug/μL，胰酶消化条件为33℃下消化16h。进一步地，上述技术方案中，所述步骤(4)中的复溶溶剂为含有0.1％甲酸和2％乙腈的水溶液，所述复溶溶剂的体积为20μL。进一步地，上述技术方案中，所述步骤(4)DIA定量蛋白质组学分析方法参数设置具体为：样品分离采用120分钟液相色谱梯度，其中，流动相：A:0.1％甲酸/水(体积比，甲酸：水＝0.1:99.9)；B:0.1％甲酸/水/乙腈(体积比，甲酸：水：乙腈＝0.1：19.9：80)；梯度：0～6min,3％-8％B，6～108min,8％-30％B,108～116min,30％-90％B，116～120min,90％-90％B；流速：300nL/min，进样量为0.4μg；质谱质核比范围设定为400to1000m/z，一级质谱分辨率设定为60000，二级质谱分辨率设定为30000。专利技术有益效果本专利技术上述S100蛋白家族组合可以作为急性胰腺炎严重程度的预测模型，该急性胰腺炎严重程度预测模型对重症急性胰腺炎的诊断灵敏度92.30％，特异性84.70％，假阳性率15.30％，假阴本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于S100蛋白家族的急性胰腺炎严重程度预测模型，其特征在于，所述急性胰腺炎严重程度预测模型为Y＝e

【技术特征摘要】
1.一种基于S100蛋白家族的急性胰腺炎严重程度预测模型，其特征在于，所述急性胰腺炎严重程度预测模型为Y＝ex，其中X＝-3.102+(-5.98E-04)*S100A11+(3.33E-06)*S100A12+(6.28E-05)*S100A6+(2.46E-05)*S100A8+(-2.54E-05)*S100A9+(1.22E-04)*S100P，所述S100A6，S100A8，S100S9，S100A11，S100A12，S100P分别为待检测样本血清中S100A6，S100A8，S100S9，S100A11，S100A12，S100P蛋白的浓度，当Y值>0.14489时，提示为高重症胰腺炎发病风险。2.根据权利要求1所述的预测模型的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)采集血清，依次加入裂解缓冲液和Tris-HCl缓冲液，所述血清、裂解缓冲液和Tris-HCl缓冲液的体积比为1:20:5，恒温孵育；(2)加入碘乙酰胺，避光恒温孵育；(3)胰酶消化得到肽段，所得肽段加入10μLpH2-3的三氟乙酸酸化后，以C18SPE柱除盐，然后将所得肽段冻干；(4)步骤(3)得到的样品复溶于复溶溶剂，采用DIA定量蛋白质组学分析方法检测血清中S100A6，S100A8，S100S9，S100A11，S100A12，S100P蛋白的浓度，并通过模型Y＝ex，其中X＝-3.102+(-5.98E-04)*S100A11+(3.33E-06)*S100A12+(6.28E-05)*S100A6+(2.46E-05)*S100A8+(-2.54E-05)*S100A9+(1.22E-04)*S100P计算来...

【专利技术属性】
技术研发人员：尚东，尹沛源，刘建均，项红，宋慧一，
申请(专利权)人：大连医科大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：辽宁,21