一种脂肪细胞的染色方法及其应用技术

本发明专利技术公开一种脂肪组织染色方法，包括：a.用TritonX‑100处理脂肪组织冷冻切片；b.除去TritonX‑100；c.用戊二醛固定切片；d.用油红O染色切片；e.对切片脱色；f.用DMSO处理切片；g.除去DMSO；h.用考马斯亮蓝R250染色切片；i.脱色。用于对细胞骨架染色。本发明专利技术公开另一种脂肪组织染色方法，包括：a.用DMSO处理脂肪组织冷冻切片；b.除去DMSO；c.用TritonX‑100处理切片；d.除去TritonX‑100；e.用戊二醛固定切片；f.除去戊二醛；g.用考马斯亮蓝R250染色切片；h.脱色。本发明专利技术还公开了如上两种方法色两种试剂盒与应用。

A staining method of fat cells and its application

The invention discloses a method for dyeing adipose tissue, which comprises: A. treating frozen sections of adipose tissue with TritonX \u2011 100; B. removing TritonX \u2011 100; C. fixing sections with glutaraldehyde; D. dyeing sections with oil red O; e. decolorizing sections; F. treating sections with DMSO; g. removing DMSO; h. dyeing sections with Coomassie brilliant blue R250; I. decolorizing. Used for staining cytoskeleton. The invention discloses another fat tissue staining method, which comprises: A. treating frozen sections of fat tissue with DMSO; B. removing DMSO; C. treating sections with TritonX \u2011 100; D. removing TritonX \u2011 100; e. fixing sections with glutaraldehyde; F. removing glutaraldehyde; g. staining sections with Coomassie brilliant blue R250; h. decolorizing. The invention also discloses two kits and applications of the above two method colors.

【技术实现步骤摘要】
一种脂肪细胞的染色方法及其应用
本专利技术属于生物
，涉及一种脂肪细胞的染色方法及其应用，特别涉及一种能够同时表征脂肪细胞中的脂滴和细胞骨架的方法及其应用。
技术介绍
油红O脂肪染色法是指在日常病理诊断和科研工作中为了显示组织内的脂肪常采用油红O进行染色的方法，油红O为脂溶性染料，在脂肪内能高度溶解，可特异性的使组织内甘油三酯等中性脂肪着色。该方法用于脂肪细胞的染色，可使脂肪细胞中的脂滴着色，但是用途过于狭窄，可探究范围也有限，比如，不能够用于染色细胞骨架。显示细胞骨架的常用方法有考马斯亮蓝染色法，具有简单易行的特点，但不能区分骨架蛋白的组成，仅能用于骨架形态及完整性研究。用去垢剂TritonX-100处理细胞，可以溶解膜脂，并与大部分非骨架蛋白疏水区结合而将其溶解掉，剩下细胞骨架系统的蛋白不被溶解掉，然后用蛋白染料考马斯亮蓝染色即可显示骨架结构。该方法不适合于脂肪细胞骨架的染色，因为脂肪细胞富含油脂不易着色。由于鲜有技术不能良好地同时对脂肪细胞脂滴与细胞骨架进行染色，对于脂肪细胞脂滴与细胞骨架关系的研究，鲜有相关报道。
技术实现思路
为了解决现有技术的不足，本专利技术利用脂肪细胞脂滴与细胞骨架的特性设计了一种混合染色的方法。该方法可用于探究脂滴与细胞骨架的关系，且染色步骤简单，便于操作，染色效果好，完全可用于有关于脂肪细胞的科学研究。本专利技术利用两种染色方法的结合与创新，可以清楚显示脂肪细胞脂滴与骨架的形态分布，可用于有关脂肪细胞的研究。较为具体地，本专利技术第一方面提供了一种脂肪组织染色方法，所述染色方法包括如下步骤：a.用TritonX-100处理脂肪组织冷冻切片；b.除去所述TritonX-100；c.用戊二醛固定所述脂肪组织冷冻切片；d.用油红O染色所述脂肪组织冷冻切片；e.对所述脂肪组织冷冻切片脱色；f.用DMSO处理所述脂肪组织冷冻切片；g.除去DMSO；h.用考马斯亮蓝R250染色所述脂肪组织冷冻切片；i.脱色。在一些实施方式中，在步骤a之前，用磷酸缓冲液漂洗所述脂肪组织冷冻切片；在一些实施方式中，所述脂肪组织冷冻切片厚度30-40μm；在一些实施方式中，在步骤a中，用0.8-1.2％TritonX-100处理脂肪组织冷冻切片15-25min；在一些实施方式中，在步骤b中，用M缓冲液除去所述TritonX-100；在一些实施方式中，在步骤b中，用M缓冲液洗1-3次，每次3-6min；在一些实施方式中，在步骤c中，用2.5-3.5％戊二醛固定所述脂肪组织冷冻切片20-40min；在一些实施方式中，在步骤d中，用油红O染色所述脂肪组织冷冻切片8-12min；在一些实施方式中，在步骤e中，用异丙醇对所述脂肪组织冷冻切片脱色；在一些实施方式中，所述异丙醇的浓度为55-65％，处理时间为冲洗至洗去浮色；在一些实施方式中，在步骤f中，用45-55％％DMSO处理所述脂肪组织冷冻切片5-10分钟；在一些实施方式中，在步骤g中，用磷酸缓冲液漂洗除去DMSO；在一些实施方式中，在步骤h中，用0.15-0.25％考马斯亮蓝R250染色所述脂肪组织冷冻切片25-35min；在一些实施方式中，在步骤i中，蒸馏水洗脱色。在一些实施方式中，在步骤a之前，用磷酸缓冲液漂洗所述脂肪组织冷冻切片三次，每次一分钟；在一些实施方式中，所述脂肪组织冷冻切片厚度35μm；在一些实施方式中，在步骤a中，用1％TritonX-100处理脂肪组织冷冻切片20min；在一些实施方式中，在步骤b中，用M缓冲液除去所述TritonX-100三次，每次5min；在一些实施方式中，在步骤b中，用M缓冲液洗三次，每次5min；在一些实施方式中，在步骤c中，用3％戊二醛固定所述脂肪组织冷冻切片30min；在一些实施方式中，在步骤d中，用油红O染色所述脂肪组织冷冻切片10min；在一些实施方式中，在步骤f中，用50％的DMSO处理所述脂肪组织冷冻切片8分钟；在一些实施方式中，在步骤g中，用磷酸缓冲液漂洗一次除去DMSO；在一些实施方式中，在步骤h中，用0.2％考马斯亮蓝R250染色所述脂肪组织冷冻切片30min；在一些实施方式中，在步骤i中，蒸馏水洗两次脱色；优选，在步骤i后，将样品置于载玻片上加盖玻片。本专利技术第二方面提供了一种用于脂肪组织染色的试剂盒，所述试剂盒包括：用于盛装或盛装有磷酸缓冲液的试剂瓶；用于盛装或盛装有TritonX-100的试剂瓶；用于盛装或盛装有M缓冲液洗的试剂瓶；用于盛装或盛装有戊二醛的试剂瓶；用于盛装或盛装有油红O的试剂瓶；用于盛装或盛装有异丙醇的试剂瓶；用于盛装或盛装有DMSO的试剂瓶；用于盛装或盛装有考马斯亮蓝R250的试剂瓶；在一些实施方式中，所述试剂盒用于本专利技术第一方面所述的脂肪组织染色方法；在一些实施方式中，所述试剂盒还包括：用于盛装或盛装有蒸馏水的试剂瓶；在一些实施方式中，所述试剂盒还包括：载玻片；在一些实施方式中，所述试剂盒还包括：盖玻片。本专利技术第三方面提供了一种脂肪组织染色方法，所述染色方法包括如下步骤：a.用DMSO处理脂肪组织冷冻切片；b.除去DMSO；c.用TritonX-100处理脂肪组织冷冻切片；d.除去所述TritonX-100；e.用戊二醛固定所述脂肪组织冷冻切片；f.除去戊二醛；g.用考马斯亮蓝R250染色所述脂肪组织冷冻切片；h.脱色。在一些实施方式中，在步骤a之前，用磷酸缓冲液漂洗所述脂肪组织冷冻切片；在一些实施方式中，所述脂肪组织冷冻切片厚度30-40μm；在一些实施方式中，在步骤a中，用45-55％的DMSO处理所述脂肪组织冷冻切片5-10分钟；在一些实施方式中，在步骤c中，用0.8-1.2％TritonX-100处理脂肪组织冷冻切片15-25min；在一些实施方式中，在步骤d中，用M缓冲液除去所述TritonX-100；在一些实施方式中，在步骤d中，用M缓冲液洗1-3次，每次3-6min；在一些实施方式中，在步骤e中，用2.5-3.5％戊二醛固定所述脂肪组织冷冻切片20-40min；在一些实施方式中，在步骤f中，用磷酸缓冲液漂洗除去戊二醛；在一些实施方式中，在步骤g中，用0.15-0.25％考马斯亮蓝R250染色所述脂肪组织冷冻切片25-35min；在一些实施方式中，在步骤h中，蒸馏水洗脱色。在一些实施方式中，在步骤a之前，用磷酸缓冲液漂洗所述脂肪组织冷冻切片三次，每次一分钟；在一些实施方式中，所述脂肪组织冷冻切片厚度35μm；在一些实施方式中，在步骤a中，用50％的DMSO处理所述脂肪组织冷冻切片8分钟；在一些实施方式中，在步骤c中，用1％TritonX-100处理脂肪组织冷冻切片20min；在一些实施方式中，在步骤d中，用M缓冲液除去所述TritonX-100三次，每次5min；在一些实施方式中，在步骤e中，用3％戊二醛固定所述脂肪组织冷冻切片30min；在一些实施方式中，在步骤f中，用磷酸缓冲液漂洗三次除去戊二醛；在一些实施方式中，在步骤g中，用0.2％考马斯亮蓝R250染色所述脂肪组织冷冻切片30min；在一些实施方式中，在步骤h中，蒸馏水洗两次脱色；在一些实施方式中，在步骤h后，将样品置于载玻片上加盖玻片。本专利技术第四方面提供饿了一种用于脂肪组织染色的试剂盒，所述试剂盒包本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种脂肪组织染色方法，所述染色方法包括如下步骤：a.用TritonX‑100处理脂肪组织冷冻切片；b.除去所述TritonX‑100；c.用戊二醛固定所述脂肪组织冷冻切片；d.用油红O染色所述脂肪组织冷冻切片；e.对所述脂肪组织冷冻切片脱色；f.用DMSO处理所述脂肪组织冷冻切片；g.除去DMSO；h.用考马斯亮蓝R250染色所述脂肪组织冷冻切片；i.脱色。

【技术特征摘要】
1.一种脂肪组织染色方法，所述染色方法包括如下步骤：a.用TritonX-100处理脂肪组织冷冻切片；b.除去所述TritonX-100；c.用戊二醛固定所述脂肪组织冷冻切片；d.用油红O染色所述脂肪组织冷冻切片；e.对所述脂肪组织冷冻切片脱色；f.用DMSO处理所述脂肪组织冷冻切片；g.除去DMSO；h.用考马斯亮蓝R250染色所述脂肪组织冷冻切片；i.脱色。2.如权利要求1所述的脂肪组织染色方法，其特征在于：在步骤a之前，用磷酸缓冲液漂洗所述脂肪组织冷冻切片；优选，所述脂肪组织冷冻切片厚度30-40μm；优选，在步骤a中，用0.8-1.2％TritonX-100处理脂肪组织冷冻切片15-25min；优选，在步骤b中，用M缓冲液除去所述TritonX-100；优选，在步骤b中，用M缓冲液洗1-3次，每次3-6min；优选，在步骤c中，用2.5-3.5％戊二醛固定所述脂肪组织冷冻切片20-40min；优选，在步骤d中，用油红O染色所述脂肪组织冷冻切片8-12min；优选，在步骤e中，用异丙醇对所述脂肪组织冷冻切片脱色；优选，所述异丙醇的浓度为55-65％，处理时间为冲洗至洗去浮色；优选，在步骤f中，用45-55％％DMSO处理所述脂肪组织冷冻切片5-10分钟；优选，在步骤g中，用磷酸缓冲液漂洗除去DMSO；优选，在步骤h中，用0.15-0.25％考马斯亮蓝R250染色所述脂肪组织冷冻切片25-35min；优选，在步骤i中，蒸馏水洗脱色。3.如权利要求1或2所述的脂肪组织染色方法，其特征在于：在步骤a之前，用磷酸缓冲液漂洗所述脂肪组织冷冻切片三次，每次一分钟；优选，所述脂肪组织冷冻切片厚度35μm；优选，在步骤a中，用1％TritonX-100处理脂肪组织冷冻切片20min；优选，在步骤b中，用M缓冲液除去所述TritonX-100三次，每次5min；优选，在步骤b中，用M缓冲液洗三次，每次5min；优选，在步骤c中，用3％戊二醛固定所述脂肪组织冷冻切片30min；优选，在步骤d中，用油红O染色所述脂肪组织冷冻切片10min；优选，在步骤f中，用50％的DMSO处理所述脂肪组织冷冻切片8分钟；优选，在步骤g中，用磷酸缓冲液漂洗一次除去DMSO；优选，在步骤h中，用0.2％考马斯亮蓝R250染色所述脂肪组织冷冻切片30min；优选，在步骤i中，蒸馏水洗两次脱色；优选，在步骤i后，将样品置于载玻片上加盖玻片。4.一种用于脂肪组织染色的试剂盒，所述试剂盒包括：用于盛装或盛装有磷酸缓冲液的试剂瓶；用于盛装或盛装有TritonX-100的试剂瓶；用于盛装或盛装有M缓冲液洗的试剂瓶；用于盛装或盛装有戊二醛的试剂瓶；用于盛装或盛装有油红O的试剂瓶；用于盛装或盛装有异丙醇的试剂瓶；用于盛装或盛装有DMSO的试剂瓶；用于盛装或盛装有考马斯亮蓝R250的试剂瓶；优选，所述试剂盒用于权利要求1-3中任一项所述的脂肪组织染色方法；优选，所述试剂盒还包括：用于盛装或盛装...

【专利技术属性】
技术研发人员：屈长青，孙晶晶，杨梅，姬云涛，岳少云，张尚荣，
申请(专利权)人：阜阳师范大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34