一种具有抗肿瘤活性的发酵组合物制造技术

本发明专利技术公开了一种具有抗肿瘤活性的山楂和山楂叶的发酵组合物，属于微生物发酵领域。本发明专利技术挑选成熟山楂和新鲜的山楂叶，打浆、酶解、加入益生元、使用保加利亚乳杆菌、莱氏曼氏乳杆菌、裂褶菌进行微生物发酵,发酵时间10天得到山楂和山楂叶的发酵组合物。本发明专利技术首次将莱氏曼氏乳杆菌和裂褶菌应用于山楂和山楂叶的发酵制备，两者配合保加利亚乳杆菌发酵还具有显著的协同作用，能够大大增加抗食管癌细胞系(EC‑109)和人宫颈癌细胞系‑HeLa细胞增殖的作用。

A kind of fermentation composition with antitumor activity

The invention discloses a fermentation composition of hawthorn and hawthorn leaves with antitumor activity, belonging to the field of microbial fermentation. The invention selects mature hawthorn and fresh hawthorn leaves, beating, enzymolysis, adding prebiotics, using Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus lehmannii and Schizophyllum for microbial fermentation, and the fermentation time is 10 days to obtain the fermentation composition of hawthorn and hawthorn leaves. In the invention, Lactobacillus lehmannii and Schizophyllum are applied to the fermentation preparation of hawthorn and hawthorn leaves for the first time, and they have significant synergistic effect in combination with Lactobacillus bulgaricus fermentation, which can greatly increase the effect of anti proliferation of esophageal cancer cell line (EC \u2011 109) and human cervical cancer cell line \u2011 Hela cell line.

【技术实现步骤摘要】
一种具有抗肿瘤活性的发酵组合物
本专利技术涉及一种具有抗肿瘤活性的山楂和山楂叶的发酵组合物，属于微生物发酵领域。
技术介绍
山楂树为落叶乔木，其叶片宽卵形或三角状卵形，长5-10厘米，宽4-7.5厘米，两侧各有3-5羽状深裂片，裂片卵状披针形或带形，山楂树有花期，一般花期5-6月，然后在9-10月结果。中国的山楂树资源丰富，山楂树生长容易，在我国的内蒙古、河北、河南、山东、山西、陕西、江苏等地常见，多生于山坡林边或灌木丛中。山楂叶可做中药，一般泡茶饮。具有活血化瘀，理气通脉，化浊降脂的功效；山楂干制后可入药，是中国特有的药果兼用树种，其具有降血脂、血压、强心、抗心律不齐等作用，同时也是健脾开胃、消食化滞、活血化痰的良药。山楂和山楂叶含有多种对人体有益的功能成分，例如山楂酸、总黄酮、多种微量元素等有效成分。微生物发酵是在我国具有几千年的悠久历史。《本草纲目》记载：“古人用麴，多是造酒之麴。后医乃造神麴，专以供药，力更胜之”。传统的中药生产中的中药炮制就利用了微生物进行中药发酵，以提高药效、消除副作用、改变药性等等方面。例如：六神曲、半夏曲等传统中药均由天然微生物发酵而成。微生物发酵并越来越受人们重视。目前我国山楂加工多是传统工艺，产品附加值低。山楂叶除开入传统药外，多无其他的用处而废弃。对山楂和山楂叶的微生物发酵研究还是空白。微生物发酵本身非常复杂多变，不同的菌株，不同的发酵条件都会导致结果差别很大。本专利技术为了充分利用山楂和山楂叶中的的活性物质，发挥山楂和山楂叶独特的保健作用。提供一种利用山楂叶和山楂进行微生物发酵的发酵组合物。本专利技术的发酵方法工艺简单，可以提高免疫功能，在细胞学实验层面观察到一定的抗肿瘤活性，具有良好的保健效果和很好的市场前景。
技术实现思路
本专利技术为了充分利用山楂和山楂叶中的的活性物质，发挥山楂和山楂叶独特的保健作用，提供一种利用山楂叶和山楂进行微生物发酵的发酵组合物。本专利技术的发酵方法工艺简单，可以提高免疫功能，在细胞学实验层面观察到一定的抗肿瘤活性，具有良好的保健效果和很好的市场前景。本专利技术用到保加利亚乳杆菌，拉丁名称：Lactobacillusdelbrueckiisubsp.Bularicus，可购自广东省微生物研究所专利菌种保藏中心，菌种编号为GIM1.155，革兰氏阳性杆菌，可用于具体用途：生产酸奶。本专利技术用到裂褶菌，拉丁名称：SchizophyllumcommuneFr，可购自广东省微生物研究所专利菌种保藏中心，菌种编号为GIM5.44，真菌，可用于具体用途：产L-苹果酸。本专利技术用到莱氏曼氏乳杆菌，拉丁名称：Lactobacillusleichmannii，可购自广东省微生物研究所专利菌种保藏中心，菌种编号为GIM1.823，革兰氏阳性杆菌，可用于具体用途：用于维生素B12钴胺素。本专利技术首次将保加利亚乳杆菌、裂褶菌、莱氏曼氏乳杆菌应用于山楂和山楂叶的发酵产物制备。本专利技术发现，使用普通的保加利亚乳杆菌对山楂和山楂叶的发酵并没有相应的抗食管癌细胞系(EC-109)和人宫颈癌细胞系-HeLa细胞增殖的作用，裂褶菌是一种常见的真菌，其本身有一定的抗肿瘤的作用，本次试验发现单添加裂褶菌能够对HeLa细胞有一定抑制作用，但是对食管癌细胞系(EC-109)抑制作用弱。而单添加莱氏曼氏乳杆菌对食管癌细胞系(EC-109)和HeLa细胞抑制作用均弱。但是同时添加莱氏曼氏乳杆菌和裂褶菌能够大大增加抗食管癌细胞系(EC-109)和抗人宫颈癌细胞系-HeLa细胞增殖的作用。本专利技术的技术方案如下：菌种的活化培养保加利亚乳杆菌：取乳酸菌接种到MRS固体培养基中划线，37℃培养24h。挑取平板中长势较好的单菌落接种至MRS液体培养基中活化，培养24h后即可作为5*107(CFU/ml)保加利亚乳杆菌种子液，培养条件：30℃，200r/min。即可各作为保加利亚乳杆菌种子液。莱氏曼氏乳杆菌：取乳酸菌接种到MRS固体培养基中划线，37℃培养24h。挑取平板中长势较好的单菌落接种至MRS液体培养基中活化，培养24h后即可作为5*107(CFU/ml)莱氏曼氏乳杆菌种子液，培养条件：30℃，200r/min。即可各作为莱氏曼氏乳杆菌种子液。裂褶菌：取裂褶菌在裂褶菌综合固体培养基，27℃培养30天。使用接种铲从裂褶菌的培养基上挖取菌块(5mm)接种10％(质量分数)至裂褶菌液体培养基中(20％马铃薯汁1L、葡萄糖20g/L、KH2PO43g/L、MgSO41.5g/L、琼脂15gpH6)；裂褶菌液体培养基：葡萄糖20g/L、玉米粉50g/L、KH2PO43g/L、MgSO41.5g/L、培养条件：27℃，120r/min。培养10天后即可作为1*107(CFU/ml)裂褶菌种子液。用上述的复合菌剂发酵山楂和山楂叶的方法，其步骤如下：(1)挑选成熟山楂，要求无霉烂果实，清洗洗净山楂果表面的污物，沥干水分。将洗好的块备用。(2)挑选新鲜的山楂叶，要求无烂叶。将新鲜的山楂叶洗净烘干粉粹成山楂叶粉备用。(3)将纯净水：山楂果按1:1混合打浆制备山楂果浆。在山楂果浆加入山楂叶粉(10％质量分数)，混匀，再使用0.1％果胶酶52℃酶解2小时。得到山楂和山楂叶的混悬液。(4)将山楂和山楂叶的混悬液加入葡萄糖1％(质量分数),低聚木糖1-2％(质量分数)，保加利亚乳杆菌5％(体积比)、莱氏曼氏乳杆菌液3-5％(体积比)、裂褶菌液5-8％(体积比)进行微生物发酵,发酵时间10天、发酵温度30℃，100-120r/min。(5)得到山楂和山楂叶的发酵组合物进行絮凝沉淀物过滤，杀菌，在4℃条件下密封保存。本专利技术的优点：本专利技术创新性的提出一种新型山楂和山楂叶的发酵组合物，首次将莱氏曼氏乳杆菌和裂褶菌应用于山楂和山楂叶的发酵制备，两者配合保加利亚乳杆菌发酵还具有显著的协同作用，能够大大增加抗食管癌细胞系(EC-109)和人宫颈癌细胞系-HeLa细胞增殖的作用。具体实施方式下面详细描述本专利技术的实施例，所述实施例仅用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。本专利技术的具体实施例如以下说明。本专利技术用到保加利亚乳杆菌，拉丁名称：Lactobacillusdelbrueckiisubsp.Bularicus，可购自广东省微生物研究所专利菌种保藏中心，菌种编号为GIM1.155，革兰氏阳性杆菌，可用于具体用途：生产酸奶。本专利技术用到裂褶菌，拉丁名称：SchizophyllumcommuneFr，可购自广东省微生物研究所专利菌种保藏中心，菌种编号为GIM5.44，真菌，可用于具体用途：产L-苹果酸。本专利技术用到莱氏曼氏乳杆菌，拉丁名称：Lactobacillusleichmannii，可购自广东省微生物研究所专利菌种保藏中心，菌种编号为GIM1.823，革兰氏阳性杆菌，可用于具体用途：用于维生素B12钴胺素。实施例1：菌种的活化培养：保加利亚乳杆菌：取乳酸菌接种到MRS固体培养基中划线，37℃培养24h。挑取平板中长势较好的单菌落接种至MRS液体培养基中活化，培养24h后即可作为5*107(CFU/ml)保加利亚乳杆菌种子液，培养条件：30℃，200r/min。即可各作为保加利亚乳杆菌种子液。莱氏曼氏乳杆菌：取乳酸菌接种到MRS固体培养基中划线，37本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有抗肿瘤活性的发酵组合物，其特征在于，其制备过程如下(1)挑选成熟山楂果洗好的块备用；(2)挑选新鲜的山楂叶洗净烘干粉粹成山楂叶粉备用；(3)将纯净水，山楂果，山楂叶粉芬混匀，使用0.1％果胶酶52℃酶解2小时，得到山楂和山楂叶的混悬液；(4)将山楂和山楂叶的混悬液加入葡萄糖,低聚木糖，保加利亚乳杆菌5％、莱氏曼氏乳杆菌液、裂褶菌液5‑8％进行微生物发酵；(5)得到山楂和山楂叶的发酵组合物进行絮凝沉淀物过滤，杀菌，在4℃条件下密封保存。

【技术特征摘要】
1.一种具有抗肿瘤活性的发酵组合物，其特征在于，其制备过程如下(1)挑选成熟山楂果洗好的块备用；(2)挑选新鲜的山楂叶洗净烘干粉粹成山楂叶粉备用；(3)将纯净水，山楂果，山楂叶粉芬混匀，使用0.1％果胶酶52℃酶解2小时，得到山楂和山楂叶的混悬液；(4)将山楂和山楂叶的混悬液加入葡萄糖,低聚木糖，保加利亚乳杆菌5％、莱氏曼氏乳杆菌液、裂褶菌液5-8％进行微生物发酵；(5)得到山楂和山楂叶的发酵组合物进行絮凝沉淀物过滤，杀菌，在4℃条件下密封保存。2.权利要求1所述的发酵组合物，其特征在于：(1)挑选成熟山楂，要求无霉烂果实，清洗洗净山楂果表面的污物，沥干水分；将洗好的块备用；(2)挑选新鲜的山楂叶，要求无烂叶；将新鲜的山楂叶洗净烘干粉粹成山楂叶粉备用；(3)将纯净水：山楂果按1:1混合打浆制备山楂果浆；在山楂果浆加入山楂叶粉(10％质量分数)，混匀，再使用0.1％果胶酶52℃酶解2小时；得到山楂和山楂叶的混悬液；(4)将山楂和山楂叶的混悬液加入葡萄糖1％(质量分数),低聚木糖1-2％(质量分数)，保加利亚乳杆菌5％(体积比)、莱氏曼氏乳杆菌液3-5％(体积比)、裂褶菌液5-8％(体积比)进行微生物发酵,发酵时间10天、发酵温度30℃，100-120r/min；(5)得到山楂和山楂叶的发酵组合物进行絮凝沉淀物过滤，杀菌，在4℃条件下密封保存。3.权利要求1或2所述的发酵组合物，其特征在于：菌种的活化过程为：保加利亚乳杆菌：取乳酸菌接种到MRS固体培养基中划线，37℃培养24h；挑取平板中长势较好的单菌落接种至MRS液体培养基中活化，培养24h后即可作为5*107(CFU/ml)保加利亚乳杆菌种子...

【专利技术属性】
技术研发人员：马银雄，马烨，
申请(专利权)人：广东锦玛绿色食品科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44