多亚基蛋白质例如抗体在转化的微生物例如巴斯德毕赤酵母中的高纯度产生制造技术

本发明专利技术公开了用于在转化的细胞中产生异源多亚基蛋白质的方法。具体地，本公开提供了以更高的产率和减少的非所需副产物产量产生多亚基蛋白质的改进方法，所述多亚基蛋白质包括可能会或可能不会被分泌出的抗体和其它多亚基蛋白质。在示例性实施方案中，转化的细胞为酵母，例如甲醇营养型酵母如巴斯德毕赤酵母。

High purity production of multisubunit proteins such as antibodies in transformed microorganisms such as Pichia pastoris

【技术实现步骤摘要】
多亚基蛋白质例如抗体在转化的微生物例如巴斯德毕赤酵母中的高纯度产生本申请是2012年5月8日提交的同名专利技术专利申请201280035868.4的分案申请。相关申请公开本申请要求2011年8月19日提交的美国临时申请序列号61/525,307(代理人案卷号67858.730200)(标题为“MULTI-COPYSTRATEGYFORHIGH-TITERANDHIGH-PURITYPRODUCTIONOFMULTI-SUBUNITPROTEINSSUCHASANTIBODIESINTRANSFORMEDMICROBESSUCHASPICHIAPASTORIS”、2011年5月20日提交的美国临时申请序列号61/488,660(代理人案卷号67858.730300)(标题为“ANTI-CGRPCOMPOSITIONSANDUSETHEREOF”)、2011年6月14日提交的美国临时申请序列号61/496,860(代理人案卷号67858.760000)(标题为“USEOFANTI-CGRPANTIBODIESANDANTIBODYFRAGMENTSTOPREVENTORINHIBITPHO本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种产生全长抗体的方法，其包括：(a)提供包含含有提供所述全长抗体的表达的基因的巴斯德毕赤酵母细胞的生长培养物，和使所述毕赤酵母在所述生长培养物中生长约12‑16小时的生长期；(b)在所述生长期后将乙醇添加至所述培养物，其中乙醇至巴斯德毕赤酵母培养物的添加是单次大剂量添加，所述大剂量导致所述培养物中的乙醇浓度在0.5％与1.5％w/v之间；和(c)培养所述培养物以产生分泌的所述全长抗体，其中所述培养包括将含有可发酵碳源的进料添加至所述培养物，其中所述方法相对于在所述大剂量乙醇不存在的情况下进行的所述相同方法降低具有异常化学计量的抗体复合物的相对丰度。

【技术特征摘要】
2011.05.20 US 61/488,660;2011.06.14 US 61/496,860;1.一种产生全长抗体的方法，其包括：(a)提供包含含有提供所述全长抗体的表达的基因的巴斯德毕赤酵母细胞的生长培养物，和使所述毕赤酵母在所述生长培养物中生长约12-16小时的生长期；(b)在所述生长期后将乙醇添加至所述培养物，其中乙醇至巴斯德毕赤酵母培养物的添加是单次大剂量添加，所述大剂量导致所述培养物中的乙醇浓度在0.5％与1.5％w/v之间；和(c)培养所述培养物以产生分泌的所述全长抗体，其中所述培养包括将含有可发酵碳源的进料添加至所述培养物，其中所述方法相对于在所述大剂量乙醇不存在的情况下进行的所述相同方法降低具有异常化学计量的抗体复合物的相对丰度。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述大剂量乙醇相对于在所述大剂量乙醇不存在的情况下进行的所述相同方法增加稳定的二硫键的形成。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗体包含一个或多个包...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·D·麦克尼尔，N·詹森，G·L·莱斯尼基，P·齐，J·A·莱瑟姆，L·F·加西亚马丁内斯，
申请(专利权)人：奥尔德生物控股有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国,US