一种用于毕赤酵母的基因编辑载体pHS-AVC-LW1073制造技术

本发明专利技术公开了一种用于毕赤酵母的基因编辑载体pHS‑AVC‑LW1073。本发明专利技术构建的CRISPR/Cas9基因载体，包括复制起始位点、启动子、筛选标记基因、Cas9蛋白基因、核定位序列和gRNA编码的DNA。本发明专利技术构建的CRISPR/Cas9基因载体能够对毕赤酵母基因组进行有效的编辑(包括基因或者DNA序列的敲除、置换、插入等操作)，具有试验周期短、操作简洁和节省成本等优点。

A Gene Editing Vector pHS-AVC-LW1073 for Pichia pastoris

【技术实现步骤摘要】
一种用于毕赤酵母的基因编辑载体pHS-AVC-LW1073
本专利技术属于基因工程
，涉及一种用于毕赤酵母的基因编辑载体，具体为一种用于毕赤酵母的CRISPR/Cas9基因编辑载体pHS-AVC-LW1073。
技术介绍
对基因进行定点编辑，是生物研究领域重要的方法之一。科学家们一直在寻找能对基因进行精确而快速的编辑方法，直至2013年发现了CRISPR/Cas9系统。CRISPR/Cas9系统是细菌和古细菌在不断进化的过程中产生的适应性的免疫防御机制，用来保护自身的基因组免受外源核酸如噬菌体、病毒等的干扰和破坏。CRISPR/Cas9系统作为一套适应性免疫系统，应用CRISPRRNA(crRNA)以碱基互补的形式引导Cas蛋白识别入侵的外源基因组，并对其DNA进行剪切。与先前的ZFN和TALEN等技术相比，CRISPR/Cas9系统能更好地识别靶基因，且CRISPR/Cas9系统由crRNA和Cas9蛋白组成，结构简单，仅需构建一对引物。因此该基因编辑技术具有更高的编辑效率、更简单的操作、成本低、编辑范围广等优势。毕赤酵母作为一种表达外源基因的宿主菌，既具有操作简单，生长快等本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于毕赤酵母的基因编辑载体pHS‑AVC‑LW1073，其特征在于，所述的载体pHS‑AVC‑LW1073包括质粒pGAPZaA、sgRNA元件和Cas9元件，所述的sgRNA元件由sgRNA启动子、sgRNA backbone和靶点插入酶切位点组成，所述的Cas9元件为编码基因Cas9的全长CDS序列并且N端加有核定位信号SV40NLS。

【技术特征摘要】
1.一种用于毕赤酵母的基因编辑载体pHS-AVC-LW1073，其特征在于，所述的载体pHS-AVC-LW1073包括质粒pGAPZaA、sgRNA元件和Cas9元件，所述的sgRNA元件由sgRNA启动子、sgRNAbackbone和靶点插入酶切位点组成，所述的Cas9元件为编码基因Cas9的全长CDS序列并且N端加有核定位信号SV40NLS。2.根据权利要求1所述的一种用于毕赤酵母的基因编辑载体pHS-AVC-LW1073，其特征在于，所述的载体pHS-AVC-LW1073的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。3.根据权利要求1所述的一种用于毕赤酵母的基因编辑载体pHS-AVC-LW1073，其特征在于，所述的gRNA元件具体区域为SEQIDNO.1所示序列的第6904-7274的核苷酸序列。4.根据权利要求1所述的一种用于毕赤酵母的基因编辑载体pHS-AVC-LW1073，其特征在于，所述的sgRNA启动子为pSNR52，具体为SEQIDNO.1所示序列的第6094-7172的核苷...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄遵锡，马瑜，丁俊美，韩楠玉，慕跃林，吴倩，
申请(专利权)人：云南师范大学，
类型：发明
国别省市：云南,53