【技术实现步骤摘要】
一种提高自溶链霉菌洋橄榄叶素及其衍生物产量的方法
本专利技术属于微生物突变的基因工程，及其利用所构建的菌株发酵提高特定化合物产量的方法。
技术介绍
聚酮类化合物是由细菌、真菌、植物以及动物所产生的次生代谢物的一个种类，其形式极其繁多，在天然产物中具有不可替代的作用，新药开发潜力和商业价值巨大。聚酮化合物洋橄榄叶素是一种具有C2-对称性的十六元环大环内二酯类抗生素，在Streptomycessp.DSM4137、S.melanosporus、S.hygroscopicusvar.azalomyceticus和S.violaceoniger（Tu905）等链霉菌的次级代谢产物中均有发现。洋橄榄叶素具有抗革兰阳性菌、抗线虫、抗原生动物、免疫抑制和抗哺乳动物肿瘤细胞等多种生物学活性。Streptomycessp.DSM4137中洋橄榄叶素可能的生物合成基因簇已经克隆，其生物合成包括聚酮合成和糖组分的合成。自溶链霉菌（StreptomycesautolyticusCGMCC0516）是从西双版纳原始森林的土壤中采集并分离得到的一株放线菌新种，它能够通过微生物代谢途径产生多种...
【技术保护点】
1.敲除自溶链霉菌野生型菌株的
【技术特征摘要】
1.敲除自溶链霉菌野生型菌株的orf17基因的方法，其特征在于：敲除自溶链霉菌（Streptomycesautolyticus）orf17基因以获得突变株，该突变株保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），地址：中国武汉，保藏编号：CCTCCNO：M2018839，保藏日期：2018年11月28日。2.根据权利要求1所述的方法，包括以下步骤：（1）采用Red/ET一步PCR法，以质粒pHY773为模板，通过PCR扩增获得两端带有与orf17基因同源序列的aac(3)IV基因插入盒；PCR扩增的引物为：5′-GGAGATCCTGCGCGTTCTGCGGCGGTGGGCGCGGGCATGATTCCGGGGATCCGTCGACCTGC-3′和5′-CGAACTCGCCGTCCCCGTGAGCCGGCGAACGCGGCCTCATGTAGGCTGGAGCTGCTTCGAAG-3′；PCR扩增条件为：94℃预热2分钟，1个循环；94℃变性45秒，62℃复性45秒，72℃扩增2分钟，31个循环；72℃扩增10分钟；4℃1小时；（2）通过电转化把所扩增片段导入含pIJ790和orf17基因粘粒质粒的大肠杆菌Escherichiacoli中，筛选阿泊拉霉素抗性的转化子，该转化子即为含有插入突变的orf17基因；（3）用上述转化子制备含有插入突变的orf17基因的粘粒质粒，通过电转化导入大肠杆菌ET12567/pUZ8002中；（4）利用接合转移把含有插入突变的orf17基因的粘粒质粒导入野生型自溶链霉菌中，筛...
【专利技术属性】
技术研发人员：鲁涛，纪开燕，韩秀林，杨玲，
申请(专利权)人：云南大学，
类型：发明
国别省市：云南,53
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。