一种利用内质网滞留信号肽提高酵母细胞表面展示Fab片段抗原结合能力的重组载体制造技术

本发明专利技术公开了一种利用酵母内质网滞留信号肽提高酵母细胞表面展示Fab片段抗原结合能力的重组载体，属于抗体工程技术领域。本发明专利技术利用GAL1‑GAL10双向启动子载体同时表达Adalimumab或Infliximab的VH‑CH1和VL‑CL两个结构域，通过氨基端内质网定位信号肽定位在内质网内组装成天然Fab形式片段，再利用Aga1‑Aga2酵母细胞展示系统展示到细胞表面。同时，通过将酿酒酵母内质网滞留信号肽融合到Fab片段VL‑CL结构域的羧基端，明显提高了酵母细胞表面展示的Fab片段结合抗原的能力，促进了功能性Fab片段的展示，从而更适用于Fab片段的酵母细胞表面展示，为抗体工程中Fab的改造方法提供了一种优化策略。

A Recombinant Vector for Enhancing the Antigen Binding Ability of Fab Fragment on Yeast Cell Surface by Using Endoplasmic Reticulum Retention Signaling Peptide

【技术实现步骤摘要】
一种利用内质网滞留信号肽提高酵母细胞表面展示Fab片段抗原结合能力的重组载体
本专利技术涉及一种利用内质网滞留信号肽提高酵母细胞表面展示Fab片段抗原结合能力的重组载体，属于抗体工程

技术介绍
抗体是机体在抗原刺激下由免疫细胞分泌的可与相应抗原特异性结合的免疫球蛋白。单克隆抗体是目前最具有经济价值的生物治疗药物之一，被广泛用于治疗病毒感染、免疫疾病和癌症等。目前，生产抗体的方式主要有两种，传统的动物免疫和抗体工程。一般动物免疫产生抗体的方法大多比较耗时，并且成本昂贵。因此，抗体工程技术逐渐发展起来，包括噬菌体展示、核糖体展示和细胞展示技术等，被应用于抗体的生产和改造。其中，酵母细胞表面展示技术因是真核表达宿主，并且可以结合流式细胞仪的高通量筛选技术等优势，被广泛用于多种形式的抗体文库的改造和筛选。目前抗体酵母展示片段主要有两种形式，包括单链可变区片段(single-chainvariablefragment,scFv)和抗原结合片段(Fragmentofantigenbinding，Fab)。ScFv是由抗体重链和轻链可变区通过15-20个氨基酸短肽连接而成的具有抗体活性的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用内质网滞留信号肽提高酵母细胞表面展示Fab片段抗原结合能力的重组载体，其特征在于，该重组载体的结构为pESD‑ERS‑HA‑CL‑VL‑GAL1‑GAL10‑VH‑CH1‑FLAG‑Aga2，所述的ERS为内质网滞留信号肽，所述的HA或FLAG为荧光抗体标签，所述的GAL1‑GAL10为控制Fab两条链表达的双向启动子，所述的Aga2为酵母细胞表面展示蛋白。

【技术特征摘要】
1.一种利用内质网滞留信号肽提高酵母细胞表面展示Fab片段抗原结合能力的重组载体，其特征在于，该重组载体的结构为pESD-ERS-HA-CL-VL-GAL1-GAL10-VH-CH1-FLAG-Aga2，所述的ERS为内质网滞留信号肽，所述的HA或FLAG为荧光抗体标签，所述的GAL1-GAL10为控制Fab两条链表达的双向启动子，所述的Aga2为酵母细胞表面展示蛋白。2.根据权利要求1所述利用内质网滞留信号肽提高酵母细胞表面展示Fab片段抗原结合能力的重组载体，其特征在于，所述的内质网滞留信号肽选自如下的任一种或两种：FEHDEL、WEHDEL。3.根据权利要求1所述利用内质网滞留信号肽提高酵母细胞表面展示Fab片段抗原结合能力的重组载体，其特征在于，所述的内质网滞留信号肽融合到Fab轻链的羧基端。4.根据权利要求1所述利用内质网滞留信号肽提高酵母细胞表面展示Fab片段抗原结合能力的重组载体，其特征在于，所述重组载体的序列为SEQIDNO：1或SEQIDNO：2或SEQIDNO：3或SEQIDNO：4所示。5.根据权利要求1-3任一项所述利用内质网滞留信号肽提高酵母细胞表面展示Fab片段抗原结合能力的重组载体，其特征在于，所述的抗体为Adalimumab或Infliximab。6.一种利用内质网滞留信号肽提高酵母细胞表面展示Fab片段抗原结...

【专利技术属性】
技术研发人员：易犁，梅萌，李俊红，汪声晨，张桂敏，
申请(专利权)人：湖北大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42