可曝光预染蛋白marker及其制备方法、应用技术

本发明专利技术公开了一种可曝光预染蛋白marker及其制备方法、应用，包括如下步骤：S1、根据各蛋白条带分子量大小设计对应的基因片段，并确定与之对应的表达载体；S2、预备所述表达载体，并通过PCR扩增获得所述基因片段；将基因片段连接到与之对应的表达载体上，并转入宿主细胞内进行表达、纯化；S3、将不同分子量大小的发光蛋白分别与染料混合，以获得不同分子量的预染蛋白；S4、将不同分子量大小的预染蛋白按预设比例混合，得到可曝光预染蛋白marker。其制备方法简单、易操作，且制备获得的可曝光预染蛋白marker即是可见的预染蛋白，又是可以发光的发光蛋白，且显现在X胶片上。

The method of preparation and application of the exposure pre dyed protein marker

【技术实现步骤摘要】
可曝光预染蛋白marker及其制备方法、应用
本专利技术涉及分子生物学与基因工程领域，尤其是涉及一种可曝光预染蛋白marker及其制备方法、应用。
技术介绍
蛋白分子量标准，常称之为蛋白Marker，其作为一种蛋白质分子量大小的标准被广泛应用于蛋白质电泳中。在免疫印迹(Western-blot)实验中，只有Marker精确无误，实验结果才有说服力。除此之外，蛋白Marker还能够提示电泳是否正常，转移是否成功等信息。所以选择正确的蛋白Marker是western-blot实验成功的必要条件之一。现有的蛋白Marker研发经历了普通Marker、预染Marker和曝光Marker三个发展阶段。其中，普通蛋白Marker由于没有附带染料分子或者是标记分子，所示分子量大小正好是蛋白原本的大小，在早期可精确判断蛋白大小。但因为电泳过程中完全看不到普通Marker，要和目标蛋白一起最后染色才能看见，无法对实验过程起预示参照作用。预染Marker是将普通蛋白marker中的每个蛋白(或多肽)经过化学修饰，与一种蓝色或其他颜色的染料共价偶联而成。预染蛋白marker的出现给WesternBlot带本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种可曝光预染蛋白marker的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、根据预染发光蛋白marker中各蛋白条带分子量大小设计对应的核酸片段，并确定与之对应的表达载体；S2、预备所述表达载体，并通过PCR扩增获得所述基因片段；将核酸片段连接到与之对应的表达载体上，并转入宿主细胞内进行表达、纯化，以得到与条带对应的不同分子量大小的发光蛋白；S3、将不同分子量大小的发光蛋白分别与染料混合，以获得不同分子量的预染蛋白；S4、将不同分子量大小的预染蛋白按预设比例混合，得到可曝光预染蛋白marker。

【技术特征摘要】
1.一种可曝光预染蛋白marker的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、根据预染发光蛋白marker中各蛋白条带分子量大小设计对应的核酸片段，并确定与之对应的表达载体；S2、预备所述表达载体，并通过PCR扩增获得所述基因片段；将核酸片段连接到与之对应的表达载体上，并转入宿主细胞内进行表达、纯化，以得到与条带对应的不同分子量大小的发光蛋白；S3、将不同分子量大小的发光蛋白分别与染料混合，以获得不同分子量的预染蛋白；S4、将不同分子量大小的预染蛋白按预设比例混合，得到可曝光预染蛋白marker。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述蛋白条带的氨基酸序列包括SEQIDNO.1～SEQIDNO.6中的一项或几项。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述表达载体包括pET21a和/或pET28a-his-MBP。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述pET28a-his-MBP载体的核酸序列包括SEQIDNO.7所示序列。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述宿主细胞包括E.coli。6.根据权利要求1所述的制备方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：方卫斌，
申请(专利权)人：天德悦北京生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：北京,11