一种磷脂酰丝氨酸乳剂的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种磷脂酰丝氨酸乳剂的制备方法，分别通过磷脂酰丝氨酸浓度的选择、长链甘油三酯（LCT）和中链甘油三酯（MCT）种类及应用比例的选择，水相、油相及混合相的制备；乳化剂种类及比例的选择，通过高压均质机均质制备，得出一种高稳定性的磷脂酰丝氨酸乳剂。本发明专利技术一改通常情况下磷脂酰丝氨酸片剂和软胶囊的剂型，可望提高产品的生物利用度及有效性，从而增加了磷脂酰丝氨酸的临床选择。

A preparation method of phosphatidylserine emulsion

【技术实现步骤摘要】
一种磷脂酰丝氨酸乳剂的制备方法
本专利技术属于药物制剂及营养食品制备领域，具体涉及一种磷脂酰丝氨酸乳剂的制备方法。
技术介绍
磷脂酰丝氨酸(简称，PS)是细胞膜双分子结构物质中的成分之一，是大脑细胞膜的重要组成部分。磷脂酰丝氨酸是能够调控细胞膜关键蛋白的功能状态的磷脂，具有修复损伤和改善大脑的功能。大量数据表明，PS可通过调控膜蛋白的信号通路从而调节神经元及神经胶质细胞的分化与成熟。PS还可通过调节神经递质的释放控制神经元的兴奋性，从而影响脑细胞活性。因此，PS成为“脑专一性物质”。近年来，科学家们对口服磷脂酰丝氨酸能够引起人类认知功能改善的研究表现出极大的兴趣，大量的临床试验和动物实验表明，口服磷脂酰丝氨酸可以提高与年龄相关的退行性记忆力减退、改善儿童多动症等症状。目前，常见的磷脂酰丝氨酸制剂形式主要为片剂和软胶囊，乳剂形式存在的磷脂酰丝氨酸制剂并不常见。由于磷脂酰丝氨酸本身同时存在亲水和疏水的结构，使得磷脂酰丝氨酸具备了成为乳剂和脂质体的可能性。在通常情况下，水包油型乳剂(O/W)是药物制剂的主要手段之一，口服乳剂可以提高生物活性物质的生物利用率，增加产品的有效性，同时对吞咽困难的人群，可以通过鼻饲等方式进行给药。因此，乳剂的成功制备和应用，不仅可以提高产品的有效性，还可以降低原料成本、从而增加磷脂酰丝氨酸的临床选择。
技术实现思路
为了解决现有技术的不足，本专利技术提供了一种磷脂酰丝氨酸乳剂的制备方法。本专利技术的目的通过以下技术方案来实现：一种磷脂酰丝氨酸乳剂的制备方法，包括如下步骤，S1、油相选择：所述油相试剂选用不同链长的甘油三酯；S2、乳化剂的选择和处理：乳清分离蛋白、吐温80，分别将乳清分离蛋白、T80或它们的混合物分散在10mM磷酸盐缓冲液中，确保其完全溶解和水化，并在4℃下搅拌过夜；S3、油水混合相的制备：首先将磷脂酰丝氨酸加入到S1的油相中，在50℃-60℃的温度下搅拌10小时；按10:90的油水比例，将以上含磷脂酰丝氨酸油相和S2含有WPI/T80磷酸盐缓冲液水相进行充分混合制得油水混合相，搅拌以确保磷脂酰丝氨酸在含有不同链长的甘油三酯或按比例混合的WPI/T80乳化剂混合液中充分溶解，所述乳化剂混合液中WPI与T80按质量百分比混合比例分别为2.0：0.0、1.5：0.5、1.0：1.0、0.5：1.5、0.0：2.0；S4、初乳的制备：将磷脂酰丝氨酸和LCT或MCT加入到S3形成的含有WPI/T80的乳化剂溶液中进行15-20分钟的剪切；S5、PS乳剂的制备：在70MPa的压力下，将初乳液通过高压均质机均质得最终PS乳剂。优选地，所述S1中油相试剂为具有长链甘油三酯-LCT的玉米油、具有中链甘油三酯-MCT的椰子油。优选地，所述S2中磷酸盐缓冲液pH＝7.0。优选地，所述S3中油相水相混合后在4℃搅拌过夜，并在室温下搅拌1-2小时确保磷脂酰丝氨酸在含有不同链长的甘油三酯或按比例混合的WPI/T80乳化剂混合液中充分溶解。优选地，所述S4初乳的制备中加入乳化剂溶液中加入质量百分比为0.6％磷脂酰丝氨酸、10％LCT或10％MCT。优选地，所述磷脂酰丝氨酸乳剂制备完成后加入质量百分比0.02％叠氮化钠以防止微生物生长。优选地，当所述MCT制备的磷脂酰丝氨酸乳剂其乳化剂混合液中WPI与T80的比例为0.0：2.0，或是LCT制备的磷脂酰丝氨酸乳剂其乳化剂混合液中WPI与T80的比例为0.5：1.5时，制得的初乳在70MPa的压力下得到最终活性成分浓度为600PSmg/100ml的乳剂。本专利技术的有益效果体现在：本专利技术提供了一种可制备稳定的水包油型磷脂酰丝氨酸乳液的工艺，以长链/中链甘油三酯为油相，乳清蛋白和聚氧化乙烯山梨醇酐单油酸酯(吐温-80)为乳化剂，利用高压均质法制备稳定的磷脂酰丝氨酸乳剂，并通过对磷脂酰丝氨酸乳剂的粒径、电位、离心稳定常数等测定，揭示了磷脂酰丝氨酸乳剂在不同油相及不同乳化剂条件下对其物理稳定性的影响，为磷脂酰丝氨酸乳剂的工艺及放大提供理论参考及依据。提高了产品的有效性，且原料成本低、增加了磷脂酰丝氨酸的临床选择。附图说明图1：本专利技术实施例中LCT制备的PS乳剂贮存21天后粒径变化曲线图。图2：本专利技术实施例中MCT制备的PS乳剂贮存21天后粒径变化曲线图。图3：本专利技术实施例中LCT制备的PS乳剂的乳化剂浓度与离心稳定常数的关系示意图。图4：本专利技术实施例中LCT制备的PS乳剂的乳化剂浓度与离心稳定常数的关系示意图。具体实施方式本专利技术揭示了一种磷脂酰丝氨酸乳剂的制备方法，包括如下步骤：S1、油相选择：玉米油(长链甘油三酯-LCT)、椰子油(中链甘油三酯-MCT)。S2、乳化剂的选择和制备：乳清分离蛋白(WPI)、吐温80(T80)，分别将WPI、T80或它们的混合物分散在10mM磷酸盐缓冲液(PB)中，pH＝7.0，确保其完全溶解和水化，并将样品在4℃下搅拌过夜。S3、油水混合相的制备：首先将磷脂酰丝氨酸加入到油相中(不同链长的甘油三酯)，在50℃的温度下搅拌10小时，按10：90的油水比例，将油相(含磷脂酰丝氨酸)和水相(含有WPI/T80磷酸盐缓冲液)进行充分混合制得油水混合相，4℃搅拌过夜并在室温下搅拌1小时，以确保磷脂酰丝氨酸在分别含有不同链长的甘油三酯或按比例混合的WPI/T80乳化剂混合液中充分溶解，其中，WPI/T80的乳化剂溶液中WPI/T80比例分别为2.0：0.0、1.5：0.5、1.0：1.0、0.5：1.5、0.0：2.0％(w/w)。S4、初乳的制备：将磷脂酰丝氨酸(0.6％，w/w)和LCT(10％w/w)或MCT(10％w/w)加入到含有WPI/T80的乳化剂溶液中(10mMPb，pH＝7.0)进行15分钟的剪切(4000转/分，L5M-A，英国Silverson有限公司)。S5、PS乳剂的制备：当所述乳化剂混合液中WPI与T80的比例为0.0：2.0时，在10150psi(70MPa)的压力下，将初乳液通过高压均质机(LLCD-3L，PhdTechnologyLLC，USA)均质4次得到。乳剂的最终活性成分浓度为600PSmg/100ml。制备后加入0.02％(w/w)叠氮化钠以防止微生物生长。为进一步的对制备后的PS乳剂进行性能的确认，对制备后的PS乳剂物理性质及稳定性进行检测。PS乳剂粒径的测定，采用MalvernZetasizerNanoZSP激光粒度分析仪测定粒度分布，测定温度25℃。样品制备后贮存于4℃，并在第7天、14天和21天进行粒径测量。PS乳剂Zeta电位的测定，采用MalvernZetasizerNanoZSP分析仪测定PS乳剂的Zeta电位。重复3次，取平均值，测定温度25℃。PS乳剂离心稳定常数的测定，乳剂的物理稳定性变化表现为分层、絮凝、破乳等现象。将乳剂在一定转速下离心一段时间，对乳剂的影响相当于自然静置较长时间对其产生影响。因此，用离心-紫外分光光度法测定的离心稳定常数ke可作为评价乳剂物理稳定性的指标。相同条件下，ke值越小，表明乳剂越稳定。取PS乳剂2mL置于离心管中，4000rpm离心15min，取离心前、后的乳剂下层各25μL置于10mL容量瓶中，用超纯水定容摇匀，以超纯水为空白，于波长500nm本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种磷脂酰丝氨酸乳剂的制备方法，其特征在于：包括如下步骤，S1、油相选择：所述油相试剂选用不同链长的甘油三酯；S2、乳化剂的选择和处理：乳清分离蛋白、吐温80，分别将乳清分离蛋白、T80或它们的混合物分散在10 mM磷酸盐缓冲液中，确保其完全溶解和水化，并在4℃下搅拌过夜；S3、油水混合相的制备：首先将磷脂酰丝氨酸加入到S1的油相中，在50℃‑60℃的温度下搅拌10小时；按10:90的油水比例，将以上含磷脂酰丝氨酸油相和S2含有WPI/T80 磷酸盐缓冲液水相进行充分混合制得油水混合相，搅拌以确保磷脂酰丝氨酸在含有不同链长的甘油三酯或按比例混合的WPI/T80乳化剂混合液中充分溶解，所述乳化剂混合液中WPI与T80按质量百分比混合比例分别为2.0：0.0、1.5：0.5、1.0：1.0、0.5：1.5、0.0：2.0；S4、初乳的制备：将磷脂酰丝氨酸和LCT 或 MCT加入到S3形成的含有WPI/T80的乳化剂溶液中进行15‑20分钟的剪切；S5、PS乳剂的制备：在70 MPa的压力下，将初乳液通过高压均质机均质得最终PS乳剂。

【技术特征摘要】
1.一种磷脂酰丝氨酸乳剂的制备方法，其特征在于：包括如下步骤，S1、油相选择：所述油相试剂选用不同链长的甘油三酯；S2、乳化剂的选择和处理：乳清分离蛋白、吐温80，分别将乳清分离蛋白、T80或它们的混合物分散在10mM磷酸盐缓冲液中，确保其完全溶解和水化，并在4℃下搅拌过夜；S3、油水混合相的制备：首先将磷脂酰丝氨酸加入到S1的油相中，在50℃-60℃的温度下搅拌10小时；按10:90的油水比例，将以上含磷脂酰丝氨酸油相和S2含有WPI/T80磷酸盐缓冲液水相进行充分混合制得油水混合相，搅拌以确保磷脂酰丝氨酸在含有不同链长的甘油三酯或按比例混合的WPI/T80乳化剂混合液中充分溶解，所述乳化剂混合液中WPI与T80按质量百分比混合比例分别为2.0：0.0、1.5：0.5、1.0：1.0、0.5：1.5、0.0：2.0；S4、初乳的制备：将磷脂酰丝氨酸和LCT或MCT加入到S3形成的含有WPI/T80的乳化剂溶液中进行15-20分钟的剪切；S5、PS乳剂的制备：在70MPa的压力下，将初乳液通过高压均质机均质得最终PS乳剂。2.如权利要求1所述的一种磷脂酰丝氨酸乳剂的制备方法，其特征在于：所述S1中油相试剂为具有长...

【专利技术属性】
技术研发人员：张宁，张瑞岩，王正平，刘春红，韩军，
申请(专利权)人：聊城大学，海门品尚医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37