免疫增强剂、药物组合物及其应用制造技术

本发明专利技术公开免疫增强剂、药物组合物及其应用。本发明专利技术的免疫增强剂包含(a)IL12p70或其功能性片段，或它们的编码核酸；(b)能够抑制配体与PD‑1结合的PD‑1重组蛋白或其编码核酸；和(c)能够抑制TGF‑β与受体结合的融合蛋白或其编码核酸。本发明专利技术免疫增强剂能够显著增强DC细胞致敏T细胞的效果，可以诱导出更强比例的IFN‑r和TNF‑a阳性的CD4以及CD8 T淋巴细胞，引起更强的抗原特异的抗肿瘤免疫应答。

Immunoenhancer, pharmaceutical composition and Application

【技术实现步骤摘要】
免疫增强剂、药物组合物及其应用
本专利技术涉及医药制品，具体涉及免疫增强剂、药物组合物及其应用。
技术介绍
机体的免疫反应首先是由抗原递呈细胞(APC)捕获抗原，经过加工和处理后将抗原信息递呈给淋巴细胞，继而引发一系列的特异性免疫应答。树突状细胞(DC)是目前认为的功能最强的APC，其最大的特点是能够刺激初始型T细胞(Tcells)的增殖和活化，是启动、调控并维持特异性免疫应答的中心环节。在机体抗肿瘤免疫中，由T细胞介导的细胞免疫发挥着重要作用。研究发现，肿瘤患者存在DC数量减少及功能缺陷的特点，肿瘤组织及其周围浸润DC的数量、功能与肿瘤的发生、发展、转移、预后有着密切的关系。DC密集浸润的肿瘤分化程度高，预后较好；而DC轻度浸润的肿瘤常伴有分化程度低和恶性进展。肿瘤细胞具有较高水平的Fas表达，能诱导FasL表达的淋巴细胞凋亡，并能分泌TGF-β、IL-10等免疫抑制性细胞因子，导致抗原提呈能力下降，从而逃避免疫攻击。近年来，已经清楚了免疫系统确实识别肿瘤抗原，但是尽管存在肿瘤抗原，T细胞确保持静止状态。基于此现象，有这样的假说：患者体内的抗原呈递细胞，不能正确识别肿瘤抗原，将之呈递给T淋巴细胞，引起肿瘤特异的免疫应答。近年来，如何增加抗原呈递细胞的数量，提高抗原呈递细胞，特别是DC细胞摄取、转运、呈递抗原、刺激T细胞的能力，是目前肿瘤免疫研究中的一个重点。近年来，有大量的使用负载了抗原的DC疫苗治疗肿瘤的报道，从目前报道的数据来看，DC疫苗似乎代表了一种用于改善的肿瘤免疫治疗的新的非常有潜力的方法。然而，单独的DC疫苗的使用通常不能导致所期待的免疫治疗效果的改善，不能得到令人满意的临床效果。PD-1在活化的T细胞、B细胞以及在参与调解免疫激活与耐受平衡的单核细胞上表达。其主要作用是在针对感染的炎性应答中限制炎性周围的T细胞活性和限制自身免疫性。该调节的基础是PD-1分子的配体PD-L1和PD-L2相应多种促炎性因子被上调，并且可以结合炎症组织中活化T细胞上的PD-1分子，抑制T细胞功能，从而限制免疫应答。另外，发现在多种不同的肿瘤中，PD-L1表达通常上调，其通过与肿瘤浸润的淋巴细胞上面的PD-1结合而抑制局部的抗肿瘤T细胞应答，从而导致免疫逃逸的发生。研究发现在宫颈癌和肝癌中，有近半数以上的肿瘤浸润CD8阳性T细胞表达PD-1分子，其与肿瘤细胞表面表达的PD-L1分子结合后，可以导致T细胞的耗竭以及凋亡。最近，已经有数个靶向PD-1受体及其配体PD-L1的免疫检验点抑制剂药物获批上市。这些免疫检验点抑制剂在多种肿瘤如黑色素瘤、肾癌、结直肠癌、非小细胞肺癌和肝癌等患者中都有比较好的临床疗效。然而，目前的多个临床研究数据表明，仅仅使用PD-1/PD-L1抗体临床应答率较低，如在肝癌患者中，仅仅15％左右的患者能够获得临床受益。在更近的研究中，已经有在临床模型中评价了与PD-1途径免疫检验点抑制剂组合的抗肿瘤效果。例如，研究报道了使用PD-1配体PD-L1和PD-L2的siRNA转染到树突细胞(DC)里面抑制PD-L1和PD-L2的表达，并用次要的组织相容性抗原(MiHA)负载树突细胞制备成树突细胞疫苗。这些负载有MiHA的PD-L1/L2沉默的DC表现出了高效的激活以及扩增MiHA特异性T细胞功能：能够显著地增强MiHA特异性的CD8+T细胞的功能；与未对PD-L1/L2沉默的负载MiHA的DC相比，在一周的体外刺激过程中，其扩增出来的MiHA特异性的CD8+T细胞增加了14.4倍，体外刺激两周后，其扩增出来的T细胞增加了20倍(A.B.vanderWaart等，2015年，CancerImmunolImmunother(2015)64:645–654)。类似地，以靶向PD-L1/L2的siRNA-脂-纳米颗粒复合物沉默DC细胞的PD-L表达，再给DC负载抗原mRNA或者多肽制备成的树突细胞疫苗，能够有效地增加来自异体干细胞移植肿瘤患者的辅助性T细胞(Th1和Th2细胞)以及抗原特异性CD8+T细胞应答(MiekeW.H.Roeven等，JImmunother2015；38:145–154)。另一项研究检验了肝脏中PD-L1沉默的浦肯野氏细胞(KC)对自然杀伤细胞(NK细胞)和CD8+T细胞的影响。数据表明，在感染了病毒的肝脏中，PD-L1沉默的浦肯野氏细胞(KC)能够增加NK细胞的功能和聚集；同时还能增强CD8+T细胞在病毒感染组织的集聚、对病毒感染细胞的杀伤能力以及细胞增殖、CD8+T细胞介导的病毒清除能力以及记忆(JosephSDolina等，MolecularTherapy–NucleicAcids(2013)2,e72)。另一份检验PD-L1抑制对肿瘤生长的影响的报道表明，系统性使用抗PD-L1抗体加黑素瘤肽负载的树突细胞(DC)能够产生更多数量的黑素瘤肽特异性的CD8+T细胞，但是该组合并不足以延缓已存在的B16黑素瘤的生长。尽管另外的机体辐照延缓肿瘤生长，但是抗原-特异性的CD8+T细胞的进一步的过继转移是实现所治疗的小鼠的肿瘤消退和长期存活所需要的(Pilon-Thomas等2010.JImmunol(免疫学杂志)1；184(7)：3442-9)。
技术实现思路
为解决现有技术中的至少部分技术问题，本专利技术在深入研究后发现通过组合三种不同的成分得到的调节剂可协同增强或提高抗原的免疫力。至少部分地基于此完成了本专利技术。具体地，本专利技术包括以下内容。本专利技术的第一方面，提供免疫增强剂，其包含下述(a)至(c)三种成分：(a)IL12p70或其功能性片段，或它们的编码核酸；(b)能够抑制配体与PD-1结合的PD-1重组蛋白或其编码核酸；和(c)能够抑制TGF-β与受体结合的融合蛋白或其编码核酸。在某些实施方案中，所述成分(a)中的功能性片段是指具有至少下述功能(1)至(3)之一的源自IL12p70的截短的片段：(1)促进CD4+Th0细胞分化为Th1细胞；(2)诱导CTL和NK细胞的细胞毒活性，并促进其分泌IFN-γ、TNF-α和/或GM-CSF细胞因子；(3)促进NK细胞和IL-2rα、TNF受体及CD56分子的表达。在某些实施方案中，所述PD-1重组蛋白包含PD-1蛋白胞外结构域。在某些实施方案中，所述PD-1重组蛋白是PD-1蛋白胞外结构域和免疫球蛋白的Fc片段的融合蛋白。在某些实施方案中，所述成分(c)为含TGFBR3胞外结构域的重组蛋白或其编码核酸。在某些实施方案中，所述成分(c)为可溶性TGFBR3胞外结构域与免疫球蛋白的Fc片段的融合蛋白或其编码核酸。本专利技术的第二方面，提供药物组合物，其包含第一方面的免疫增强剂，和抗原或编码所述抗原的核酸。本专利技术的第三方面，提供提高淋巴细胞中TNF-a和/或IFN-r含量的方法，其包括使本专利技术的免疫增强剂，或本专利技术的药物组合物作用于淋巴细胞的步骤。本专利技术的第四方面，提供一种提高淋巴细胞群中TNF-a+和/或IFN-r+细胞的比例的方法，其包括使本专利技术的免疫增强剂，或本专利技术的药物组合物作用于淋巴细胞群的步骤。本专利技术的第五方面，提供另一种提高淋巴细胞群中TNF-a+和/或IFN-r+细胞的比例的方法，其包括以下步骤：1)将试剂引入表达细胞得到转染细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免疫增强剂，其特征在于，包含下述(a)至(c)三种成分：(a)IL12p70或其功能性片段，或它们的编码核酸；(b)能够抑制配体与PD‑1结合的PD‑1重组蛋白或其编码核酸；和(c)能够抑制TGF‑β与受体结合的融合蛋白或其编码核酸。

【技术特征摘要】
1.一种免疫增强剂，其特征在于，包含下述(a)至(c)三种成分：(a)IL12p70或其功能性片段，或它们的编码核酸；(b)能够抑制配体与PD-1结合的PD-1重组蛋白或其编码核酸；和(c)能够抑制TGF-β与受体结合的融合蛋白或其编码核酸。2.根据权利要求1所述的免疫增强剂，其特征在于，所述成分(a)中的功能性片段是指具有至少下述功能(1)至(3)之一的源自IL12p70的截短的片段：(1)促进CD4+Th0细胞分化为Th1细胞；(2)诱导CTL和NK细胞的细胞毒活性，并促进其分泌IFN-γ、TNF-α和/或GM-CSF细胞因子；(3)促进NK细胞和IL-2rα、TNF受体及CD56分子的表达。3.根据权利要求1所述的免疫增强剂，其特征在于，所述PD-1重组蛋白包含PD-1蛋白胞外结构域。4.根据权利要求1所述的免疫增强剂，其特征在于，所述PD-1重组蛋白是PD-1蛋白胞外结构域和免疫球蛋白的Fc片段的融合蛋白。5.根据权利要求1所述的免疫增强剂，其特征在于，所述成分(c)为含TGFBR3胞外结构域的重组蛋白或其编码核酸。6.根据权利要求1所述的免疫增强剂，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋俊，林鑫，吴斐然，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：启辰生生物科技珠海有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44