鸡传染性法氏囊精制蛋黄冻干抗体的制备方法技术

一种鸡传染性法氏囊精制蛋黄冻干抗体的制备方法，其特征在于：采用高纯度抗原素，将ＩＢＤＶ　　Ｂ８７株毒种接种到ＳＰＦ鸡胚，然后收获绒尿液、胚体、绒尿膜磨细过滤灭活为抗原，免疫产蛋鸡，收集高免鸡蛋，分离蛋黄，用蒸馏水稀释，灭活，萃提，离心，灭活，冻干，检验；将该鸡蛋经Ｃｏ６０辐照射，杀死病毒和细菌；应用新型免疫增强剂黄芪多糖冻干制成，在２－８℃下保存；以法式囊蛋黄抗体为主要成份，配合一种新型免疫增强剂制成的防治、治疗复合性药物，使得肉鸡养殖业内的危害降低，造福于人类，提高人们生活水平。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及禽类生物药制剂
， 一种鸡传染性法氏囊精制蛋黄冻干 抗体的制备方法。
技术介绍
鸡法氏囊病是引起幼龄鸡的一种急性、高度接触性传染病，病程短、发病 率高、死亡率高。病毒对鸡体的法氏囊损害最大，是世界肉鸡养殖业内危害最 严重的传染病之 -。幼鸡被感染后，可导致免疫抑制，并可诱发多种疫病或使多种疫苗免疫失败，从而引起疾病的爆发与流行，死亡率20% 50%不等。该 病能抑制鸡的体液免疫和细胞免疫,能降低鸡群对疫苗接种的应答反应性，幼鸡 感染后全身出血，继发大肠杆菌等疾病引起死亡。随着不同血清型的IBD超强 毒或变异株的出现，死亡率也相应的增加；同时还会导致感染鸡的免疫抑制， 使多种疫苗免疫失败。在鸡传染性法氏囊发病过程中也有采用传统蛋黄抗体和 高免血清进行治疗，根据国内实际情况和人民健康生产的需求，都有很多方面 的缺陷。血清有抗体含量低、生产成本高、保存期短等缺点不易被大型养殖场 应用；传统方法生产的蛋黄抗体中存在外源病原传播、非特异性抗体含量多、 引起过敏反应而死亡、不易保存运输和储存，产生保护作用、周期短等缺点。已知蛋黄是由水溶相(Water soluble fraction, WSF)和水不相容性(Water insoluble fraction, WIF)组成的乳浊液。WIF主要成份为脂蛋白构成。而蛋黄 抗体存在于WSF中。WSF脂蛋白含量甚微，其物理性状为棕色或淡黄色的透 明液体。因此，蛋黄抗体精制过程即是WSF的分离过程。精制蛋黄抗体提取的 方法国内外报道很多，其一是离心提取法这是最原始的方法，通过超速离心将 稀释蛋黄液分为上层水溶相和下沉沉淀颗粒相。上层水溶相中仍含有少量脂类， 因而并不十分澄明。不适于工业化生产。二是脂溶剂法三氯甲烷、佛利昂使脂 蛋白变性沉淀，离心可有效地除去脂类物质，上清液即为WSF。 一般而言，该 法除脂彻底，WSF透明无色。不足之处是三氯甲烷、佛利昂等化学试剂在产品 中的残留及工业废液(物)的环境污染较严重。其三是聚乙二酵法应用聚乙二醇(PEG)提取蛋黄中的抗体，原理还不太清楚，但提取效果较好。 一般采取 两步法，即第一步添加至终浓度为3X左右的PEG，处理后去上层液再另PEG 至终浓度为12%左右沉淀抗体，之后，加稀释剂溶解即成。该法从蛋黄中提取 的抗体较纯，回收率也较高，操作简便。不足之处是产品中除去PEG是一个很 大的难题。另外还有食品、医药化工试剂提取法如辛酸、海藻酸钠等提取法。 已有报道辛酸法用于少量蛋黄抗休的提取。海藻酸钠法碳酸葡聚糖法在日本已 申请专利。研究表明，这种精制蛋黄冻干抗体具有效价稳定、保存时间长、应用方便 等优点。同时精制蛋黄抗体不会在注射部位残留。适合工厂化规范化生产需要 的蛋黄精制冻干抗体，工艺流程必须保持抗体的活性及效价。为此，我们对4 种蛋黄抗体萃提技术进行了比较。柠檬酸沉降法PEG沉淀法、酸化水溶法、 (NH4)2S04沉淀法，四种方法都能提出抗体，但前三种他们都各有优缺点。柠檬 酸沉降法效价低；PEG沉淀法虽然可以得到纯化的卵黄抗体，但由于得到的产 物体积较大，还需进一步包埋浓縮，浓縮后的产物效价大幅度下降；酸化水溶 法用于提纯不仅费时，原材料消耗大，而且沉淀效果也不理想
技术实现思路
为了解决禽病毒对鸡体的法氏囊损害最大，造成肉鸡养殖业危害最严重的传染病的问题，本专利技术的目的是提供一种鸡传染性法氏囊精制蛋黄冻干抗体的 制备方法，以法式囊蛋黄抗体为主要成份，配合一种新型免疫增强剂制成的防 治、治疗复合性药物，使得肉鸡养殖业内的危害降低，造福于人类，提高人们 生活水平。该，采用高纯度抗原素，将 IBDV B87株毒种接种到SPF鸡胚，然后收获绒尿液、胚体、绒尿膜磨细过滤 灭活为抗原，免疫产蛋鸡，收集高免鸡蛋，分离蛋黄，用蒸馏水稀释，灭活，萃提，离心，灭活，冻干，检验；将该鸡蛋经Co60辐照射，杀死病毒和细菌；应用新 型免疫增强剂黄芪多糖冻千制成，在2 — 8t:下保存，保存期可达三年。该鸡传染件法氏囊精制蛋黄冻干抗体的制备方法，生产用毒种的制备 IBDVB87株毐种适当稀释,接种，收获；病毒繁殖IBDVB87株毒种适当稀释,接种，收获胚液、胚体绒毛尿囊膜磨细过滤；灭活抗原.*免疫产蛋鸡、收集高免 蛋，取高免蛋黄15克，蒸馏水稀释，灭活，6(TC加热灭活8-15分钟，萃取、 离心，加入终浓度为15-18%的硫酸铵，8000转/分离心15分钟，收集沉淀；灭活 采用钴60照射杀灭卵黄屮的外源病毒；半成品加入黄芪多糖3g，多粘菌素B1 微克，山梨醇，甘露醇保护剂，分装冻干，成品检验，贴签，包装入库。该，生产用毒种的制备: IBDVB87株毒种适当稀释，接种，收获，病毒繁殖IBDVB87株毒种适当稀释, 接种，收获胚液、胚体绒毛尿囊膜磨细过滤，灭活抗原，免疫产蛋鸡、收集高免 蛋，取高免蛋黄16克，蒸馏水稀释，灭活，6(TC加热灭活8-15分钟,萃取、离 心，加入终浓度为15-18%的硫酸铵，8000转/分离心15分钟，收集沉淀，灭活 钴60照射杀灭卵黄中的外源病毒，半成品加入黄芪多糖4g、多粘菌素B1.5微 克,山梨醇、甘露醇等保护剂，分装冻干，成品检验，贴签，包装入库。该，生产用毒种的制备: IBDV B87株毒种适当稀释,接种，收获，病毒繁殖IBDV B87株毒种适当稀释, 接种,收获胚液、胚体绒毛尿囊膜磨细过滤，灭活抗原，免疫产蛋鸡、收集高免 蛋，取高免蛋黄17克，蒸馏水稀释；灭活6(TC加热灭活8-15分钟，萃取、离 心，加入终浓度为15-18%的硫酸铵，8000转/分离心15分钟，收集沉淀，灭活 钴60照射杀灭卵黄中的外源病毒，半成品加入黄芪多糖5g、多粘菌素B2微克, 山梨醇、廿露醇等保护剂，分装冻干，成品检验，贴签，包装入库。该，采用了硫酸铵法沉淀蛋 黄抗体，并且在15-18%的浓度时沉淀。由于采用了如上所述技术方案，本专利技术具有如下优越性该，其采用了一种集热灭活、化学灭活为一体的先进钴60 (Co60)辐照射灭活综合灭活技术.蛋黄抗体微牛物灭活即防污染技术。蛋黄中微生物的来源有两个方面。 一是经垂直传播来自母体。如鸡白痢沙门氏菌、禽呼肠孤病毒等；二是经蛋黄由外界进入。先进钴60(Co60)辐照射技术杀灭蛋黄中经卵直接传带的外源病原。对蛋黄中添加的指示微生物能完全彻底灭活，而且不影响抗体效价。无化学残留、无毒副作用。 研究表明，这种精制蛋黄冻干抗体具有效价稳定、保存时间长、应用方便 等优点。同时精制蛋黄抗体不会在注射部位残留。适合工厂化规范化生产需要 的蛋黄精制冻干抗体工艺流程必须保持抗体的活性及效价。硫酸铵沉淀法提取量明显优于另三种方法，并且在15-18%的浓度时沉淀效果最佳，抗体效价也最高。它具有纯度高、特异性强、易保存、无残留等优点。该产品对新出现的IBD 变异株更有针对性，防止免疫抑制病的发生，对传染性法氏囊病的紧急预防与 治疗具有极好的效果。具体实施方式一(500羽含量)生产用毒种的制备IBDVB87株毒种适当稀释，接种，收获；病毒繁殖IBDVB87株毒种，适当稀释，接种，收获胚液，胚体绒毛尿囊膜，磨细过滤 灭活抗原免疫产蛋鸡、收集高免蛋，取高免蛋黄15克，蒸馏水稀释；灭活 6(TC加热灭活8-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鸡传染性法氏囊精制蛋黄冻干抗体的制备方法，其特征在于：采用高纯度抗原素，将ＩＢＤＶ　　Ｂ８７株毒种接种到ＳＰＦ鸡胚，然后收获绒尿液、胚体、绒尿膜磨细过滤灭活为抗原，免疫产蛋鸡，收集高免鸡蛋，分离蛋黄，用蒸馏水稀释，灭活，萃提，离心，灭活，冻干，检验；将该鸡蛋经Ｃｏ６０辐照射，杀死病毒和细菌；应用新型免疫增强剂黄芪多糖冻干制成，在２－８℃下保存。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张许科，孙进忠，乔荣岑，丁梅，闵亚杰，孟照国，习向峰，
申请(专利权)人：洛阳普莱柯生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：41[中国|河南]