包含ｖＷＦＡ和／或ＡＮＴ＿ＩＧ结构域的蛋白质制造技术

本发明专利技术涉及一种新型蛋白质（本文称为ＩＮＳＰ１４１、ＩＮＳＰ１４２、ＩＮＳＰ１４３和ＩＮＳＰ１４４），经鉴定其为含有冯.维勒布兰德因子Ａ（ｖＷＦＡ）和炭疽受体细胞外（ＡＮＴ＿ＩＧ）结构域的炭疽受体样蛋白，本发明专利技术还涉及该蛋白质和其编码基因的核酸序列在疾病诊断、预防和治疗中的应用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含vWFA和/或ANT—IG结构域的蛋白质本专利技术涉及一种新型蛋白质(本文称为INSP141、 INSP142、 INSP143 和INSP144)，经鉴定其为含有冯 维勒布兰德因子A(vWFA)和炭疽受体细 胞外(ANT—IG)结构域的炭疽受体样蛋白，还涉及该蛋白质和其编码基因 的核酸序列在疾病诊断、预防和治疗中的应用。本文所引用的所有出版物、专利和专利申请均纳入本文参考文献。
技术介绍
随着功能性基因组学时代的来临，药物发现过程目前正经历着一场基础 性革命。术语"功能性基因组学"指利用生物信息学方法将感兴趣功能归因 于蛋白质序列的一种方法。由于序列数据产生的速度已快速超过研究实验室 将功能归因于这些蛋白序列的能力，因而越来越需要这种方法。随着生物信息学方法的潜能和准确性的提高，这些方法迅速取代了常规 的生物化学特性鉴定技术。实际上，用于鉴定本专利技术的高级生物信息学方法 目前已能输出具有高度可信性的结果。各研究所和商业机构正在检验他们可得到的序列数据，并在进行这种检 验的基础上取得了重大发现。然而，仍然需要对其它基因和它们编码的多 肽进行鉴定和特征分析，而将其作为研究和发现药物的耙标。专利技术介绍炭疽毒素受体炭疽主要为家养和野外动物疾病，具体是指草食动物，如牛、羊、马、 驴和山羊。人类在与染病动物接触时偶然感染，包括与它们的肉、骨、皮、 毛发和排泄物接触。炭疽毒素中的一种组分有目前不能理解的致命作用。死亡明显由氧损耗、 第二次休克、血管通透性增加、呼吸衰竭和心脏衰竭引起。炭疽使人和动物致死通常没有预料地突然发生。循环中的致死毒素水平在疾病晚期很快增 加，与血液中的微生物浓度一致。炭疽毒素的三种毒素由炭疽杆菌，即炭疽的致病病因产生。它帮助细菌 避开免疫系统，在系统感染中能杀死宿主。该毒素由三种蛋白质组成保护 抗原(PA)(单一受体结合组分)和分别称为水肿因子(EF)和致死因子(LF) 的两种酶组分。 一旦这些蛋白质从细菌中作为非毒性分子释放，它们向哺乳动物细胞表面移动，并装配成有毒的与细胞结合的复合物(Mourez M.等人， Ato. 5/o&c/zw/. 2001, 19, 958—961)。在哺乳动物细胞质中的毒素酶修饰底物的两种组分水肿因子(EF)是腺苷酸环化酶，通过各种机制削弱宿主防卫系统，包括抑制中型粒细胞功能和削弱宿主抵抗力。致死因子(LF)是一种依赖锌的蛋白酶，切割有丝分裂 原激活的蛋白激酶并引起巨噬细胞的水解。保护抗原(PA)为第三种组分， 与细胞受体结合，介导酶组分到细胞质的传送(Leppla SH. Anthrax toxin， In Aktories K, Just I, editors. Handbook of experimental pharmacology. Berlin: Springer; 2000, pp.447-72)。炭疽毒素受体(ATR)由肿瘤内皮细胞标记8 (TEM8)基因编码。炭疽 毒素使用TEM8基因的蛋白质产物，开始中毒的第一阶段。还不清楚ATR 的真正生理功能，然而，业已显示，TEM8基因在结肠直肠癌中上调(St Croix B.等人(2000) Science Aug 18;289(5482):1197-1202)。 TEM8转录也在血管发 生中上调。鼠肿瘤内皮细胞标记8 (mTEM8)基因的研究表明.，mTEM8可 能涉及心血管形成(Carson-Walter E.等人(2001) Cancer Res. Sep 15;61(18):6649-55)。人毛细管形态发生蛋白2 (CMG2)与ATR有相似结构域组织，两者的 全长序列有40%的序列相同。实验业已显示CMG2能与炭疽毒素的PA亚单 位结合，表明CMG2与ATR有相似作用(Scobie H.M.等人(2003) Proc Natl Acad Sci USA. Apr 29; 100(9):5170-4)。 CMG2真正的生理功能尚不清楚，然 而业已显示CMG2的重组型能与胶原蛋白型IV和层粘连蛋白结合(Bell S. 等人(2001) J Cell Sci.Aug;114(Pt 15):2755-73)。炭疽受体细胞外结构域(ANT—IG)被发现位于炭疽受体一半的指定细 胞外N末端。发现另一炭疽受体结构域位于细胞内部分，即ANT一C。它可能是Ig总科组分，与IPT/TIG结构域相关性最接近。IPT/TIG科由具有免疫 球蛋白类折叠的结构域组成。这些结构域在细胞表面受体发现，如Met和 Ron以及涉及DNA结合时在细胞内转录因子中发现。Ron酪氨酸激酶受体 与其亚族(Met和Sea)共有一独特功能特性控制细胞分离、移动和胞外 基质的侵入(分布)。值得注意的是，ATR的特征之一为胞外冯，维勒布兰德因子A(vWFA)结 构域，也称为整联蛋白(I)结构域。vWFA结构域在很多大的细胞外蛋白 中发现。这种蛋白的例子包括补体蛋白因子B (FB)、 C2、 CR3和CR4,整 联蛋白和胶原蛋白VI、 VII、 XII、 XIV型(Perkins SJ等人，(1994) J Mol Biol. Apr 22;238(l):104-19)以及炭疽毒素受体(Bradley K.等人(2003) Biochem Pharmacol. Feb 1;65(3):309-14)。与包含vWFA结构域的蛋白相关的功能包括 作为胞外基质组分、止血、细胞粘着和免疫防御机制(Colombatti A.等人 (1993) Matrix. Jul;13(4):297-306)。在蛋白质的整联蛋白族发现的vWFA结构域是指整联蛋白I结构域 (RolandA等人.(2003) J. Biol. Chem. Apr 25; 278 (17) 15035-15039)。业己显 示，炭疽毒素的PA亚单位以一种看来模仿整联蛋白与其天然底物结合的方 式，直接与ATR vWFA结构域结合。业已显示，这种结构域的可溶形式在 细胞培养中起有效胞外炭疽抗毒素的作用(Bradley K.等人(2003) Biochem Pharmacol. Feb 1;65(3):309-14)。大部分包含vWF结构域的蛋白质的一般基序依赖金属离子粘着位点 (MIDAS)。 MIDAS基序涉及阳离子(如，Mg2+、和Mn2+、 Zn2，P Ca2+) 配位和由五个残基组成，即Asp-x-Ser-x-Ser、 Thr和Asp (Scobie H.M.等人 (2003) Proc Natl Acad Sci USA. Apr 29; 100(9):5170-4)。 MIDAS基序位于与二 价阳离子螯合的ATR/TEM8的细胞外vWFA结构域，这对PA结合非常重要。业己显示，ATR (sATR)可溶vWFA结构域的功能是阻遏在培养中的中 国仓鼠卵巢(CHO)细胞炭疽中毒(Bradley等人Nature 2001;414:225-9; see also WO 04/052277 and WO 02/46228)。Bradley等人也综述了 ATR/TEM8/CMG2在癌症中起的作用，值得注意的 是在肿瘤内皮细胞、结肠直肠癌、胆囊癌、食道癌、肺癌和黑素瘤中的作用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多肽，其特征在于，该多肽：（ｉ）含有ＳＥＱＩＤＮＯ：２、ＳＥＱＩＤＮＯ：４、ＳＥＱＩＤＮＯ：６、ＳＥＱＩＤＮＯ：８、ＳＥＱＩＤＮＯ：１０、ＳＥＱＩＤＮＯ：１２、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４、ＳＥＱＩＤＮＯ：１６、ＳＥＱＩＤＮＯ：１８、ＳＥＱＩＤＮＯ：２０、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２、ＳＥＱＩＤＮＯ：２４、ＳＥＱＩＤＮＯ：１２８、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３０、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３２、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３４、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４６和／或ＳＥＱＩＤＮＯ：１４８所示的氨基酸序列；（ｉｉ）是其具有包含ｖＷＦＡ和／或ＡＮＴ＿ＩＧ结构域的蛋白质功能，更好具有ＡＴＲ样蛋白质功能，或者具有与（ｉ）所述多肽相同的抗原决定簇的片段；或（ｉｉｉ）是（ｉ）或（ｉｉ）所述多肽的功能性等价物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：MD戴维斯，D姆肯里克，M优克，C鲍尔，
申请(专利权)人：阿雷斯贸易股份有限公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]