诱导Th1细胞的细菌制造技术

将来源于克罗恩病患者或溃疡性大肠炎患者的唾液经口施与无菌小鼠,结果发现，在大肠中Th1细胞陡增。进而，成功地从发现了该Th1细胞增加的小鼠的肠内菌群中，分离出了一定居于肠道就在大肠中引起强的Th1细胞诱导的细菌。

Bacteria inducing Th1 cells

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】诱导Th1细胞的细菌
本专利技术是作为基于平成27年度、国立研究开发法人日本医疗研究开发机构(AMED)、革新的先端研究开发支援事业、单位类型“生物体恒常性维持·变样·破绽机制的网络的理解的用于最适医疗实现的技术创造”研究区域(研究开发课题名：“基于肠内土著细菌特性理解的难治性疾病新型治疗法的开发”)委托事业的研究成果而获得的。本专利技术涉及在肠道内诱导Th1细胞的增殖或活化的细菌(以下也称为“Th1细胞诱导性细菌”)。另外，本专利技术涉及包含该Th1细胞诱导性细菌或来源于该细菌的生理活性物质作为有效成分的、用于激活免疫的组合物或用于Th1细胞的增殖或活化的组合物。进而，本专利技术涉及使用所述Th1细胞诱导性细菌或来源于该Th1细胞诱导性细菌的生理活性物质的、用于激活免疫的方法或用于诱导Th1细胞的增殖或活化的方法。进而，本专利技术涉及包含所述Th1细胞诱导性细菌或该细菌的特异抗原作为有效成分的疫苗组合物；或使对象摄取所述Th1细胞诱导性细菌或该Th1细胞诱导性细菌的特异抗原，诱导该对象中的针对所述Th1细胞诱导性细菌的免疫应答的方法。另外，本专利技术涉及包含对所述Th1细胞诱导性细菌具有抗菌活性的物质等作为有效成分的、用于抑制免疫的组合物或用于抑制Th1细胞的增殖或活化的组合物。进而，本专利技术涉及使用该物质等的、用于抑制免疫的方法或用于抑制Th1细胞的增殖或活化的方法。进而，本专利技术涉及筛选在肠道内抑制或诱导Th1细胞的增殖或活化的Th1细胞诱导性细菌等的方法、和用于该筛选方法的试剂盒或非人动物。进而另外，本专利技术涉及包含用于特异检测所述Th1细胞诱导性细菌的物质的、用于检查由Th1细胞引起的疾病的组合物。
技术介绍
消化道、口腔等的粘膜中存在多样的土著细菌，作为全体而形成区系(flora)。土著菌区系(flora)对宿主的生理、健康维持发挥非常大的作用。土著菌区系(flora)的构成异常被称为菌群失调(Dysbiosis)，逐渐清楚了其成为各种疾病的原因。如果粘膜土著菌区系(flora)的阐明进步，则很可能有助于针对各种疾病的新的疾病对策·治疗开发，但由于其复杂性，详细的机理尚不充分明确。人每天产生、喝掉1.5L的唾液。通常唾液所含的菌(口腔内细菌)仅仅通过肠道而不定居。但是，在某些状况下有时口腔内细菌定居在肠道中。特别有报告在克罗恩病、肝硬化、大肠癌中，从疾病发病的早期观察到口腔内细菌的肠道定居。并且，已知定居的口腔内细菌影响疾病的病态(非专利文献1～6)。现有技术文献非专利文献非专利文献1：Y.Chenetal.,Scientificreports6,34055(2016)非专利文献2：D.Geversetal.,Cellhost&microbe15,382-392(2014)非专利文献3：C.A.Lozuponeetal.Cellhost&microbe14,329-339(2013)非专利文献4：I.Vujkovic-Cvijinetal.,Sciencetranslationalmedicine5,193ra191(2013)非专利文献5：N.Qinetal.,Nature513,59-64(2014)非专利文献6：C.L.Sears,W.S.Garrett,Cellhost&microbe15,317-328(2014)
技术实现思路
专利技术要解决的课题本专利技术所要解决的课题是提供在肠道内诱导Th1细胞的增殖或活化的细菌。另外，本专利技术中，以鉴定通过定居于肠道而诱发克罗恩病等的口腔内细菌为目的。进而，以提供以鉴定的口腔内细菌为靶标的，治疗、改善或预防克罗恩病等疾病的组合物等。用于解决课题的手段本专利技术者们为了实现上述目的反复进行了深入研究，结果发现，将某克罗恩病患者来源的唾液经口施与无菌小鼠之后，大肠中γ干扰素(IFN-γ)产生性CD4阳性T细胞Th1细胞陡增(参照图1和2等)。将观察到该Th1细胞增加的小鼠的肠内细菌进行培养，成功地分离出8种菌株(参照图3等)。接着，将这8种菌株的混合液施与无菌小鼠，结果表明能够通过它们充分地诱导Th1细胞(参照图4等)。进而表明，8种菌株中被认为属于肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae)的2H7株单独施与无菌小鼠也能够充分诱导Th1细胞(参照图4等)。另一方面，其余7种菌株混合液没有诱导Th1细胞((参照图4等)。由此表明，克罗恩病患者的唾液中存在的肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)2H7株一定居于肠道，就在大肠引起强的Th1细胞的诱导。进而得知，使8种菌株中的肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)2H7株或大肠杆菌(E.coli)2B1株定居于无菌IL-10缺损小鼠，则与大肠杆菌(E.coli)2B1株定居相比，通过肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)2H7株定居而更剧烈的肠炎发病(参照图17等)。由此强烈启示，克罗恩病患者的唾液来源的肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)2H7株可能与肠炎的发病相关。接着，为了分析肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)2H7株以怎样的机理诱导Th1细胞，施与无菌MyD88/Trif双重缺损小鼠，结果与野生型C57BL/6小鼠相比，没能观察到Th1细胞的显著增加(参照图24等)。由此启示，MyD88/Trif参与的Toll样受体、IL-1、IL-18的信号通路有可能参与Th1细胞诱导。进而，研究是否肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)的其他株也同样地诱导大肠Th1细胞，结果得知，从ATCC购买的BAA-2552株、700721株均与2H7株相比Th1细胞的增加显著地低(参照图21等)。由此考虑，肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)2H7株具有BAA-2552株、700721株所没有保持的参与Th1细胞诱导的基因、结构。另外，将某溃疡性大肠炎患者的唾液经口施与无菌小鼠，结果发现，与上述克罗恩病患者同样地，在大肠中Th1细胞被显著诱导。进而，鉴定了诱导Th1细胞的细菌，结果发现了虽然是与2H7株不同的株，但属于肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)的亲缘种Klebsiellaaeromobilis的11E12株。另外，进行了诱导大肠Th1细胞的细菌的鉴定，结果作为与所述2H7株和11E12株同程度强地诱导大肠Th1细胞的细菌，发现了34E1株、BAA-1705株、700603株、40B3株。进而，在上述属于克雷伯菌属(Klebsiella)的菌株间比较了大肠Th1细胞的诱导水平和基因组序列(参照图52和23)。其结果如表1～10所示，发现了与大肠Th1细胞的诱导相关的、功能已知的64个基因。此外，表1显示在所述与大肠Th1细胞的诱导相关的基因中与碳水化合物代谢相关的基因的注释和信息(KEGG或UniProt)，表2显示属于克雷伯菌属(Klebsiella)的菌株中的、大肠Th1细胞的诱导水平的程度、和与所述碳水化合物代谢相关的基因的保持的程度。表3显示在所述与大肠Th1细胞的诱导相关的基因中与膜转运相关的基因的注释和信息(KEGG或UniProt)，表4显示属于克雷伯菌属(Klebsiella)的菌株中的、大肠Th1细胞的诱导水平的程度、和与所述膜转运相关的基因的保持的程度。表本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种细菌，其在肠道内诱导Th1细胞的增殖或活化。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.11.01 US 62/415759;2017.07.18 US 62/5338441.一种细菌，其在肠道内诱导Th1细胞的增殖或活化。2.根据权利要求1所述的细菌，其进一步特征在于，属于肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae)或Klebsiellaaeromobilis。3.根据权利要求1或2所述的细菌，其进一步特征在于，保持有编码选自下述蛋白质群中的至少5种蛋白质的基因，蛋白质群：甘露糖-1-磷酸鸟苷酰转移酶1、多磷脂酰转移蛋白质、PTS系果糖特异的EIIABC构成蛋白质、磷酸甘露糖变位酶/磷酸葡萄糖变位酶、甘露糖基果糖-磷酸合成酶、3-氧代酰基[酰基载体蛋白质]还原酶FabG、鼠李糖基/甘露糖基转移酶、半乳糖醇-1-磷酸5-脱氢酶、半乳糖醇通透酶IIC构成蛋白质、半乳糖醇特异的磷酸转移酶IIB构成蛋白质、D-塔格糖-1,6-二磷酸醛缩酶亚基GatZ、塔格糖-6-磷酸激酶、D-塔格糖-1,6-二磷酸醛缩酶亚基GatY、半乳糖醇通透酶IIC构成蛋白质、GDP-甘露糖-依赖性α-(1-2)-磷脂酰肌醇甘露糖基转移酶、L-木酮糖/3-酮-L-古洛糖酸激酶、2-脱氢-3-脱氧葡糖酸激酶、荚膜葡聚糖合成酶、3-八异戊烯基-4-羟基苯甲酸脂羧基-裂合酶伙伴蛋白质、2-八异戊烯基苯酚羟化酶、酚酸脱羧酶亚基C、草酰乙酸脱羧酶β链、乌头酸水合酶2、推定醛缩酶LsrF、推定乙酰转移酶、丙二醇利用蛋白质PduA、推定糖基转移酶EpsF、亚铁血红素结合周质蛋白质HmuT前体、磷壁酸输出ATP结合蛋白质TagH、磷壁酸易位渗透蛋白质TagG、外膜蛋白质TolC前体、多种药物转运体EmrE、镁和钴外溢蛋白质CorC、内膜蛋白质YibH、天冬氨酸/丙氨酸反向转运体、铁肠杆菌素受体前体、信号转导组氨酸-蛋白激酶BarA、溶血素载体蛋白质ShlB前体、寡肽转运ATP结合蛋白质OppD、砷泵-驱动ATP酶、推定抗σ因子拮抗剂、推定膜蛋白质YdfK、推定血红蛋白和血红蛋白-触珠蛋白结合蛋白质2前体、(2R)-3-磺基乳酸脱氢酶(NADP(+))、肽酶E、寡肽酶A、膦丝菌素N-乙酰转移酶、推定2-羟基酸脱氢酶YoaD、mRNA干涉酶RelE、单链DNA特异的外切核酸酶RecJ、酪氨酸重组酶XerD_6、酪氨酸重组酶XerD、葡萄糖醇操纵子阻遏物、甲酸脱氢酶转录激活因子、HTH-型转录调控因子TdfR、HTH-型转录调控因子CatM、转录调控蛋白质tctD、HTH-型转录抑制因子AseR、环di-GMP磷酸二酯酶YahA、丝氨酸-蛋白激酶RsbW、丝状红细胞凝集素、二氢蝶酸合成酶、δ-氨基-γ-酮戊酸脱水酶、有氧呼吸控制蛋白质ArcA。4.根据权利要求1～3中的任一项所述的细菌，其进一步特征在于，保持有参与甘露糖、果糖和半乳糖中的至少1种糖的代谢的基因。5.一种用于激活免疫的组合物，包含权利要求1～4中的任一项所述的细菌或来源于该细菌的生理活性物质作为有效成分。6.根据权利要求5所述的组合物，其进一步特征在于，是用于诱导Th1细胞的增殖或活化的组合物。7.一种诱导对象中的Th1细胞的增殖或活化的方法，使该对象摄取权利要求1～4中的任一项所述的细菌或来源于该细菌的生理活性物质。8.一种激活对象中的免疫的方法，使该对象摄取权利要求1～4中的任一项所述的细菌或来源于该细菌的生理活性物质。9.一种疫苗组合物，包含权利要求1～4中的任一项所述的细菌或该细菌的特异抗原作为有效成分。10.一种诱导对象中针对权利要求1～4中的任一项所述的细菌的免疫应答的方法，使该对象摄取该细菌或该细菌的特异抗原。11.一种用于抑制免疫的组合物，包含对权利要求1～4中的任一项所述的细菌有抗菌活性的物质或与来源于权利要求1～4中的任一项所述的细菌的生理活性物质结合的物质作为有效成分。12.根据权利要求11所述的组合物，其进一步特征在于，是用于抑制Th1细胞的增殖或活化的组合物。13.根据权利要求11或12所述的组合物，其进一步特征在于，是用于治疗、改善或预防由Th1细胞引起的疾病的组合物。14.一种抑制对象中的Th1细胞的增殖或活化的方法，使该对象摄取对权利要求1～4中的任一项所述的细菌有抗菌活性的物质或与来源于权利要求1～4中的任一项所述的细菌的生理活性物质结合的物质。15.一种抑制对象中的免疫的方法，使该对象摄取对权利要求1～4中的任一项所述的细菌有抗菌活性的物质或与来源于权利要求1～4中的任一项所述的细菌的生理活性物质结合的物质。16.一种治疗、改善或预防对象中由Th1细胞引起的疾病的方法，使该对象摄取对权利要求1～4中的任一项所述的细菌有抗菌活性的物质或与来源于权利要求1～4中的任一项所述的细菌的生理活性物质结合的物质。17.一种非人动物，肠道内定居有权利要求1～4中的任一项所述的细菌。18.根据权利要求17所述的非人动物，其进一步特征在于，是由Th1细胞引起的疾病的非人模型动物。19.一种权利要求17或18所述的非人动物的制造方法，该方法包括使非人动物摄取在肠道内诱导Th1细胞的增殖或活化的细菌，使该细菌在该动物的肠道内定居的工序。20.一种用于评价Th1细胞的增殖或活化的试剂盒，包含权利要求1～4中的任一项所述的细菌、肠道上皮细胞和外周血单个核细胞。21.一种用于评价Th1细胞的增殖或活化的试剂盒，包含肠道上皮细胞和外周血单个核细胞。22.一种在肠道内诱导Th1细胞的增殖或活化的细菌的筛选方法，该方法包括：使非人无菌动物摄取受检试样的工序，检测该非人无菌动物的肠道内的Th1细胞的数量或活性的工序，和从通过所述工序检测到Th1细胞的增殖或活化的非人无菌动物的肠道内试样中分离细菌的工序。23.一种在肠道内诱导Th1细胞的增殖或活化的生理活性物质的筛选方法，该方法包括：使非人无菌动物摄取来源于在肠道内诱导Th1细胞的增殖或活化的细菌的生理活性物质的工序，检测该非人无菌动物的肠道内的Th1细胞的数量或活性的工序，和在通过所述工序检测到Th1细胞的增殖或活化的情况下，将所述生理活性物质判定为在肠道内诱导Th1细胞的增殖或活化的生理活性物质的工序。24.一种在肠道内诱导Th1细胞的增殖或活化的细菌的筛选方法，该方法包括：在包含肠道上皮细胞和外周血单个核细胞的系统中，对该肠道上皮细胞添加受检细菌的工序，检测该系统中的Th1细胞的数量或活性的工序，和在通过所述工序检测到Th1细胞的增殖或活化的情况下，将所述受...

【专利技术属性】
技术研发人员：本田贤也，新幸二，成岛圣子，须田互，服部正平，
申请(专利权)人：学校法人庆应义塾，
类型：发明
国别省市：日本,JP