海洋芽孢杆菌SP-5及其右旋糖酐酶制造技术

本发明专利技术是一种来自海洋的芽孢杆菌(Bacillus sp.)SP‑5，其保藏号为CGMCC.17010。属于海洋微生物技术领域。本发明专利技术还公开了芽孢杆菌(Bacillussp.)SP‑5产右旋糖酐酶的方法和右旋糖酐酶产品。本发明专利技术提供了一种新的从海洋环境筛选高产右旋糖酐酶的菌株SP‑5，该右旋糖酐酶具有较优的酶性质，本发明专利技术有效地拓宽了右旋糖酐酶的来源。

【技术实现步骤摘要】
海洋芽孢杆菌SP-5及其右旋糖酐酶
本专利技术涉及一种微生物，特别是一种分离自中国江苏连云港海州湾海虾中的芽孢杆菌SP-5(Bacillussp.)CGMCCNO.17010；本专利技术还涉及该菌株产的右旋糖酐酶的性质。
技术介绍
右旋糖酐酶(EC3.2.1.11)是一类能够专一性水解右旋糖酐内部α-1,6-糖苷键的糖苷水解酶，在制糖工业、血浆代替品的生产以及预防和治疗牙菌斑等方面都有着广泛的应用。右旋糖酐酶主要来源于微生物。目前研究报道的产右旋糖酐酶的微生物主要是真菌和细菌，真菌有青霉属、拟青霉属、曲霉属、镰孢属、轮枝孢属、长蠕孢属、毛壳属以及酵母，细菌有乳杆菌属、链球菌属、纤维弧菌属、噬细胞菌属、短杆菌属、假单胞菌属、棒杆菌属、节杆菌属以及黄杆菌属，这些产生菌主要来源于陆地。而海洋蕴藏着丰富的微生物资源，由于其环境的特殊性，海洋微生物所产生的酶，具有耐盐、耐碱、耐低温等特性，在工业生产中更有利用价值。因此从海洋环境筛选高产右旋糖酐酶的菌株，是今后研究和开发右旋糖酐酶的关键。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种新的能产右旋糖酐酶的来自海洋的芽孢杆菌SP-5。本专利要提供的另一个技术问题是提供上述来自海洋的芽孢杆菌SP-5产右旋糖酐酶的方法。本专利技术所要解决的问题是通过以下的技术方案来实现的。本专利技术是一种来自海洋的芽孢杆菌(Bacillussp.)SP-5，其保藏号为CGMCC.17010。本专利技术所涉及的菌株SP-5是来自中国江苏省连云港海虾中分离得到的芽孢杆菌(Bacillussp.)SP-5，该菌株已于2018年12月19日保藏在中国微生物菌株保藏中心CGMCC，保藏编号为CGMCCNO.17010。保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，联系电话：010-64807355。本专利技术所要解决的技术问题还可以通过以下的技术方案来进一步实现。本专利技术还公开了一种如以上技术方案所述的来自海洋的芽孢杆菌(Bacillussp.)SP-5产右旋糖酐酶的方法，其特点是，将芽孢杆菌SP-5从斜面种子接种到2216E培养基中，装液量为20％，在30℃、180r/min下培养8h得到种子液；将种子液接种至产酶培养基中，接种量为2％，装液量为20％，在30℃、180r/min下培养48h，然后10000rpm离心10min，所得上清液用10000的中空纤维滤膜在3000rpm离心浓缩10倍得到粗酶液，4℃保存备用。本专利技术所要解决的技术问题还可以通过以下的技术方案来进一步实现。本专利技术还公开了一种如以上技术方案所述方法所产的右旋糖酐酶，其特点是：该右旋糖酐酶是利用所述的芽孢杆菌SP-5采用以上所述的方法制得。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：本专利技术提供了一种新的从海洋环境筛选高产右旋糖酐酶的菌株SP-5，并公开了产酶方法。本专利技术有效地拓宽了右旋糖酐酶的来源。本专利技术所产右旋糖酐酶具有较优的酶性质，具有广泛的应用前景。附图说明：图1为菌株SP-5扫描电镜照片形态(10000×)图；图2为菌株SP-5在初筛平板上形成的透明圈图；图3为菌株SP-5系统进化树图；图4为温度对菌株SP-5生长的影响图；图5为NaCl浓度对菌株生长的影响图；图6为pH对菌株SP-5生长的影响图；图7为碳源对菌株SP-5生长的影响图；图8为氮源对菌株SP-5生长的影响图；图9为温度对菌株SP-5右旋糖酐酶的影响图；图10为菌株SP-5右旋糖酐酶的热稳定性图；图11为pH对菌株SP-5右旋糖酐酶的影响图，▲乙酸乙酸钠缓冲液，●磷酸钠缓冲液，■Tris-HCl缓冲液；图12为菌株SP-5右旋糖酐酶的pH稳定性图，▲乙酸钠缓冲液，●磷酸钠缓冲液，■Tris-HCl缓冲液；图13为NaCl浓度对菌株SP-5右旋糖酐酶的影响图；图14为SP-5菌株右旋糖酐酶的底物特异性图；图15为菌株SP-5右旋糖酐酶的水解产物图，G1-G6：葡萄糖，麦芽糖，麦芽三糖，麦芽四糖，麦芽五糖，麦芽七糖；S1-S5：右旋糖酐T20，右旋糖酐T40，右旋糖酐T70，右旋糖酐T500，右旋糖酐T2000。本专利技术芽孢杆菌(Bacillussp.)SP-5已于2018年12月19日保藏与中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏编号为CGMCCNO.17010。保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。具体实施方式以下参照附图，进一步描述本专利技术的具体技术方案，以便于本领域的技术人员进一步地理解本专利技术，而不构成对其权利的限制。实施例1，一种来自海洋麻虾虾酱中的芽孢杆菌(Bacillussp.)SP-5CGMCCNO.17010。该菌株具体有以下特征：菌株为革兰氏阳性长杆菌，砖红色不透明菌落，边缘呈锯齿状，表面干燥不光滑；该菌株鸟氨酸、精氨酸脱羧酶、甲基红实验呈阳性，赖氨酸、硫化氢反应呈阴性；能利用麦芽糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、赤藓醇、核糖、蕈糖。该菌株在低于4℃不能生长，生长温度范围为20-45℃，最适生长温度为35℃；pH生长范围为6-11，最适生长pH为8；NaCl浓度范围为0-12％，没有NaCl生长，最适生长NaCl浓度为2％；0.5％麸皮和0.5％酵母粉有利于菌株SP-5生长。1、菌株SP-5的筛选方法1.1所涉及的培养基2216E培养基：0.1％酵母粉，0.5％鱼粉蛋白胨，1.5％琼脂，陈海水配制，pH8.0.初筛培养基：0.5％鱼粉蛋白胨，0.1％酵母粉，0.2％蓝色葡聚糖2000，1％右旋糖酐T20，1.5％琼脂，陈海水配制，pH8.0。种子培养基：0.1％酵母粉，0.5％鱼粉蛋白胨，陈海水配制，pH8.0。产酶培养基：0.5％酵母粉，0.5％麸皮，1％右旋糖酐T20，2％NaCl，pH8.0。1.2菌株的筛选方法直接称取1g海虾研磨后放入50ml2216E培养基中，20℃、180r/min培养2-5d。选取合适的培养液的稀释液涂布初筛培养基，20℃培养3-4d，菌落长出后加入95％乙醇，-20℃冷冻3～4h，观察菌落周围是否出现透明圈。挑取有透明圈的单菌落菌株接入产酶培养基，20℃、180r/min培养2d，10000r/min离心15min取上清液测定酶活力大小。选出透明圈较大和酶活力较高的菌株。2、本专利技术菌株SP-5的形态特征与生理生化特征2.1形态特征菌株SP-5为革兰氏阳性杆菌，大小为2-3μm×0.5-0.8μm(见图1)，菌株SP-5有芽孢，无鞭毛，无荚膜，在2216E固体培养基中培养48h后，菌落呈砖红色，边缘呈锯齿状，表面干燥不光滑。在含有蓝色葡聚糖的初筛培养基上能够产生透明圈(见图2)。2.1生理生化特征该菌株鸟氨酸、精氨酸脱羧酶、甲基红实验呈阳性，赖氨酸、硫化氢反应呈阴性；能利用麦芽糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、赤藓醇、核糖、蕈糖，部分生理生化结果见表1。表1菌株SP-5的生理生化特征注：＋：阳性；－：阴性。2.3菌株SP-5的分子生物学鉴定用细菌基因组提取试剂盒提取SP-5的基因组，选用扩增原核微生物16SrDNA序列的通用引物(27F：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’和1492R：5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’)进行聚合本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种来自海洋的芽孢杆菌(Bacillus sp.)SP‑5，其特征在于：其保藏号为CGMCC.17010。

【技术特征摘要】
1.一种来自海洋的芽孢杆菌(Bacillussp.)SP-5，其特征在于：其保藏号为CGMCC.17010。2.一种如权利要求1所述的来自海洋的芽孢杆菌(Bacillussp.)SP-5产右旋糖酐酶的方法，其特征在于，将芽孢杆菌SP-5从斜面种子接种到2216E培养基中，装液量为20％，在30℃、180r/min下培养8h得到种子液；将种子液接种至...

【专利技术属性】
技术研发人员：王淑军，邓甜，吕明生，徐淋香，焦豫良，房耀维，刘姝，
申请(专利权)人：江苏海洋大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32