一种绵羊卵巢血管发生相关因子蛋白的免疫印迹检测方法技术

本发明专利技术公开了一种绵羊卵巢血管发生相关因子蛋白的免疫印迹检测方法，包括如下步骤：(1)提取绵羊卵巢组织血管发生相关因子蛋白，采用BCA试剂盒测定蛋白浓度，再与缓冲液混合后高温变性，制备SDS‑PAGE凝胶，先分离胶灌胶密封凝聚，再加入浓缩胶，后加电泳缓冲液进行电泳；(2)电泳完成后找出目的蛋白凝胶，剪取PVDF膜，按照滤纸、PVDF膜、胶、滤纸由外向里的顺序置于转膜仪中，采用低温高压双层膜湿转膜进行对蛋白转印；(3)转膜结束后加入5％脱脂奶粉封闭液；(4)加入稀释后的一抗和二抗免疫反应；(5)显色。本发明专利技术采用低温高压双层膜湿转膜对绵羊卵巢组织血管发生相关蛋白进行转膜，提高了转膜效率，节省时间，洗膜后检测条带背景清晰且信号好。

An Immunoblotting Method for Detecting Vasculogenesis Related Factor Protein in Ovary of Sheep

【技术实现步骤摘要】
一种绵羊卵巢血管发生相关因子蛋白的免疫印迹检测方法
本专利技术属于生物医学基因检测
，尤其涉及一种绵羊卵巢血管发生相关因子蛋白的免疫印迹检测方法。
技术介绍
目前对于绵羊卵巢组织中的血管发生相关因子的结构生理功能在细胞、分子水平有较深入的研究，而对于这种研究，国内只是在核酸表达的量上进行一些机制的研究，很少去从蛋白的表达量上去进一步的验证。研究卵巢血管相关发生因子的作用机理，并进行分子层面准确性的相互验证，对于绵羊卵巢血管的发生、成熟和增生的生理作用有非常重要的意义。蛋白质作为大分子物质在绵羊机体中承担着组织的形成及修复更新，为机体提供营养物质和能量供机体新陈代谢来维持生命活动，更对血管的形成和增生发挥非常重要的作用。目前认为血管相关发生的因子主要有血管内皮生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)家族和络氨酸激酶受体2(Tyrosine-proteinkinasereceptor，Tie2)在血管的形成过程的重要参与因子，其也在血管发展和成熟中发挥着调节作用。WesternBlot检测技术是将蛋白质样品经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后，转本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种绵羊卵巢血管发生相关因子蛋白的免疫印迹检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)提取目的蛋白及进行电泳：提取绵羊卵巢组织血管发生相关因子蛋白，采用BCA试剂盒测定所述蛋白浓度后分装于离心管中‑80℃保存，制备SDS‑PAGE凝胶，6％或12％分离胶灌胶后用乙醇密封，待分离胶凝聚，加入5％浓缩胶，按所述蛋白与5×SDS上样缓冲液在离心管中混合后，置于95℃水浴锅中变性10min，再与预染指示剂一同上样，加入1×电泳缓冲液，进行电泳；(2)转膜：电泳完成后，找出目的蛋白凝胶块并从玻璃板中取下，剪取PVDF膜，按照滤纸、PVDF膜、胶、滤纸由外向里的顺序排列于转膜仪中并清除所产生的气泡，采用...

【技术特征摘要】
1.一种绵羊卵巢血管发生相关因子蛋白的免疫印迹检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)提取目的蛋白及进行电泳：提取绵羊卵巢组织血管发生相关因子蛋白，采用BCA试剂盒测定所述蛋白浓度后分装于离心管中-80℃保存，制备SDS-PAGE凝胶，6％或12％分离胶灌胶后用乙醇密封，待分离胶凝聚，加入5％浓缩胶，按所述蛋白与5×SDS上样缓冲液在离心管中混合后，置于95℃水浴锅中变性10min，再与预染指示剂一同上样，加入1×电泳缓冲液，进行电泳；(2)转膜：电泳完成后，找出目的蛋白凝胶块并从玻璃板中取下，剪取PVDF膜，按照滤纸、PVDF膜、胶、滤纸由外向里的顺序排列于转膜仪中并清除所产生的气泡，采用低温高压双层膜湿转膜80V转膜75min或120V转膜90min；(3)封闭：转膜结束后加入5％脱脂奶粉封闭液室温摇床轻摇40min；(4)免疫反应：加入稀释后的一抗4℃过夜10h，用PBST洗去未结合的抗体，10min/次，漂洗3次；加入稀释后的二抗37℃孵育2h，洗涤液洗去未结合的抗体，10min/次，漂洗5次；(5...

【专利技术属性】
技术研发人员：王欣荣，李明娜，郭亚军，
申请(专利权)人：甘肃农业大学，
类型：发明
国别省市：甘肃,62