一种重组产朊假丝酵母尿酸酶的纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种重组产朊假丝酵母尿酸酶的纯化方法，属于生物技术领域。具体涉及一种重组产朊假丝酵母尿酸酶的纯化方法，即将表达重组蛋白的细胞上清依次经过聚乙烯亚胺絮凝、硫酸铵盐析、阴离子交换层析、阳离子交换层析、层析脱盐、冷冻干燥得到高纯度重组产朊假丝酵母尿酸酶。本发明专利技术具有生产周期短、目的产物纯度高、部分产品质量指标得到了有效改进，整个工艺过程具有易于控制和规模化放大生产等特点。

Purification of a Recombinant Urease from Candida utilis

【技术实现步骤摘要】
一种重组产朊假丝酵母尿酸酶的纯化方法
本专利技术涉及利用重组DNA技术生产基因工程药物，具体涉及一种来源于产朊假丝酵母的尿酸酶重组蛋白的纯化方法，属于生物

技术介绍
随着社会经济的发展，人们的生活水平、生活方式、饮食结构都出现了变化，我国高尿酸血症发病率逐年上升。据估计，目前我们国家大概有高尿酸血症患者1.2亿，并逐渐呈年轻化趋势，仅次于糖尿病，成为第二大代谢性疾病，并且加入了“四高”的行列（高血糖、高血脂、高血压、高尿酸），已引起了人们广泛的重视。据研究资料报道，在哺乳类动物体内，尿酸会首先代谢转换为尿酸氧化中间产物，再经尿酸氧化酶进一步作用转化为尿囊素和CO2，然后排出体外，这样就不会造成尿酸蓄积。但是人和大多数的灵长类动物(如大猩猩、猿等)在进化过程中受到相关基因的自然突变，编码尿酸酶的基因发生了变化，不能合成有生物活性的尿酸酶，从而导致代谢能力减弱，只能将少量尿酸经肾脏排出体外，同时由于现代人的生活方式和饮食结构发生变化，尿酸代谢量又明显增加，从而产生了大量的高尿酸血症患者。近年来，国外已上市了基因工程尿酸酶(Rasburicase)，其cDNA来源于黄曲霉，在酿酒本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组产朊假丝酵母尿酸酶的纯化方法，其特征在于：其具体步骤为：（1）菌体破碎：按质量体积比1∶5‑50重悬于pH为7‑8， 1×PBS缓冲液中破碎，高速离心，得上清备用;所述步骤(1)，菌体破碎可采取超声、均质以及溶菌酶等破菌方式;（2）PEI絮凝去除核酸在破菌离心上清中，加入终浓度为 0.2‑0.5%(w/v)的聚乙烯亚胺（MW70000），搅拌絮凝后，离心收集上清备用; （3）硫酸铵盐析浓缩按照终浓度为60‑70% 饱和硫酸铵浓度，在（2）制备的上清中加入相应克重硫酸铵粉末，搅拌絮凝，待盐析结束后，离心得到沉淀采用25 mmol Tris‑HCl，pH为8.0缓冲液复溶备用;（4）阴...

【技术特征摘要】
1.一种重组产朊假丝酵母尿酸酶的纯化方法，其特征在于：其具体步骤为：（1）菌体破碎：按质量体积比1∶5-50重悬于pH为7-8，1×PBS缓冲液中破碎，高速离心，得上清备用;所述步骤(1)，菌体破碎可采取超声、均质以及溶菌酶等破菌方式;（2）PEI絮凝去除核酸在破菌离心上清中，加入终浓度为0.2-0.5%(w/v)的聚乙烯亚胺（MW70000），搅拌絮凝后，离心收集上清备用;（3）硫酸铵盐析浓缩按照终浓度为60-70%饱和硫酸铵浓度，在（2）制备的上清中加入相应克重硫酸铵粉末，搅拌絮凝，待盐析结束后，离心得到沉淀采用25mmolTris-HCl，pH为8.0缓冲液复溶备用;（4）阴离子交换层析；缓冲液A的制备：25mmolTris-HCl，pH为8.0缓冲液B的制备：25mmolTris-HCl、1mol/L氯化钠，pH为8.0采用缓冲液A进行填料平衡后，通过调整和控制平衡缓冲液及样品液的电导值，采取柱上直接流穿方式，收集相应目的峰;所述步骤（4）阴离子交换层析所用填料，可选择采用DEAEsephrose,Qsepharose，DEAE-Cellulose，DEAE-Sephacel，Q-Cellulose，Q-Sephacel填料;（5）阳离子交换层析；缓冲液A的制备：20mmol磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液，pH为6.0；缓冲液B的制备：20mmol磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液、1mol/L氯化钠，pH为6.0；先采用作为缓冲液B冲洗CMSepharoseFastFlow(GEHealthcare)柱10个柱体积，然后再采...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙昌荣，李利华，李慎涛，王志，
申请(专利权)人：北京泓恩生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11