ABO/Rh（D/C/E）血型检测卡及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种ABO/Rh(D/C/E)血型检测卡及其制备方法，其特征在于，血型检测卡具有8个微柱凝胶管，其中，一个凝胶管中含有抗A特异性凝胶溶液和亮蓝色着色剂，一个凝胶管中含有抗B特异性凝胶溶液和柠檬黄着色剂，一个凝胶管中含有抗D特异性凝胶溶液和淡黑着色剂，一个凝胶管中含有抗C特异性凝胶溶液，一个凝胶管中含有抗E特异性凝胶溶液，其余3个凝胶管中含有中性凝胶溶液，用途分别为一个管用作阴性对照，两个管用于ABO反定型检测，本发明专利技术提供的血型检测卡具有高灵敏度、高特异性、标准化程度高、自动化程度高、判读准确便捷、质量稳定、试验重复性好，且能同时进行正反定型和Rh(D/C/E)血型定型检测的优点。

ABO/Rh(D/C/E) blood group detection card and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
ABO/Rh(D/C/E)血型检测卡及其制备方法
本专利技术涉及ABO/Rh(D/C/E)血型检测卡及其制备方法，具体是指采用微柱凝胶技术检测人血红细胞表面的血型抗原，涉及检测卡的组成、制备及其应用。
技术介绍
人红细胞膜上具有特异性抗原类型，而与临床关系最密切的是红细胞ABO血型系统及Rh血型系统。ABO血型不相容输血，几乎毫无例外的会发生溶血性输血反应症状，而Rh血型不相容也常常引起新生儿溶血性疾病。因此，正确鉴定ABO血型和Rh血型是有效输血的重要保障。目前，主要采用微柱凝胶试验进行血型检测，即红细胞抗原与相应的抗体在凝胶所形成的介质中反应，如红细胞抗原与相应的标准抗体结合，在经过离心后不能通过凝胶为主的分子筛的，则凝胶底部不能检测到红细胞，从而鉴定ABO和Rh血型。但是目前采用微柱凝胶法制备的血型检测卡普遍存在误判率高、试剂灵敏度差、试剂质量不稳定、抗原抗体亲和性差、实验结果判读误差大、缺少Rh(C/E)血型检测等问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种高灵敏度、高特异性、标准化程度高、自动化程度高、判读准确便捷、质量稳定、试验重复性好，能同时进行正反定型和Rh(D/C/E)血型定型检测，的一种ABO/Rh(D/C/E)血型检测卡及其制备方法。为实现上述目的，本专利技术以以下设计方案进行：ABO/Rh(D/C/E)血型检测卡上具有8个并排的微柱凝胶管，分别为：一个凝胶管中含有抗A特异性凝胶溶液和亮蓝着色剂溶液，一个凝胶管中含有抗B特异性凝胶溶液和柠檬黄着色剂溶液，一个凝胶管中含有抗D特异性凝胶溶液和淡黑着色剂溶液，一个凝胶管中含有抗C特异性凝胶溶液，一个凝胶管中含有抗E特异性凝胶溶液，其余3个凝胶管中含有中性凝胶溶液，用途分别为一个管作为质控孔用于阴性对照，两个管用于ABO反定型检测，其中，抗A特异性凝胶溶液由中性凝胶溶液和IgM性质的抗A单克隆抗体组成，抗B特异性凝胶溶液由中性凝胶溶液和IgM性质的抗B单克隆抗体组成，抗D特异性凝胶溶液由中性凝胶溶液和IgM性质的RhD血型的抗D单克隆抗体组成，抗C特异性凝胶溶液由中性凝胶溶液和IgM性质的RhC血型的抗C单克隆抗体组成，抗E特异性凝胶溶液由中性凝胶溶液和IgM性质的RhE血型的抗E单克隆抗体组成。制备方法及工艺过程：一、基础液的配制：基础液的配方如下：将上述溶液用800毫升纯化水溶解后，使用HCL调节pH至7.0～7.2后，定容至1L。(其中，Tris全称为三羟基氨基甲烷)二、凝胶的选择：本技术方案选用了可筛选出蛋白分子量为1500～30000的交联葡聚糖凝胶，该凝胶特异性较强，耐酸碱，可适pH范围为2～13，球形完整，均一性好，惰性材料，而且可以节省洗涤去碎片等洗涤过程。三、抗体的制备：选择IgM性质的抗A单克隆抗体，将选取的抗A单克隆抗体纯化后，使用在基础液中加0.5～1％的牛血清白蛋白及0.5％的海藻糖作为保护液进行稀释抗体，抗体效价不低于1:512。选择IgM性质的抗B单克隆抗体，将选取的抗B单克隆抗体纯化后，使用在基础液中加0.5～1％的牛血清白蛋白及0.5％的海藻糖作为保护液进行稀释抗体，抗体效价不低于1:512。选择IgM性质的抗D单克隆抗体，将选取的抗D单克隆抗体纯化后，使用在基础液中加0.5～1％的牛血清白蛋白及0.5％～2.5％的明胶作为保护液进行稀释抗体，抗体效价不低于1:512。选择IgM性质的抗C单克隆抗体，将选取的抗C单克隆抗体纯化后，使用在基础液中加0.5～1％的牛血清白蛋白及0.5％～2.5％的明胶作为保护液进行稀释抗体，抗体效价不低于1:512。选择IgM性质的抗E单克隆抗体，将选取的抗E单克隆抗体纯化后，使用在基础液中加0.5～1％的牛血清白蛋白及0.5％～2.5％的明胶作为保护液进行稀释抗体，抗体效价不低于1:512。本部分根据明胶和海藻糖的保护作用的差异性，为不同的抗体选择明胶或海藻糖作为其最适合的保护剂。四、中性凝胶溶液的制备：将步骤二中所述的交联葡聚糖凝胶与含有1％～3％PEG的基础液以1g：(15～19)mL的比例浸泡至少2天后搅匀15～60分钟，让缓冲液与凝胶充分反应，然后再浸泡至少1天。五、着色剂溶液的制备：为了便于使用者更好的区分不同微柱，根据美国AABB输血技术相关要求，共选取了三种着色剂，分别为亮蓝着色剂、柠檬黄着色剂、淡黑着色剂。称取0.6g亮蓝着色剂用10mL纯化水溶解稀释，制备成浓度为0.06g/mL的亮蓝着色剂溶液。称取0.3g柠檬黄着色剂用10mL纯化水溶解稀释，制备成浓度为0.03g/mL的柠檬黄着色剂溶液。称取0.5g淡黑着色剂用10mL纯化水溶解稀释，制备成浓度为0.05g/mL的淡黑着色剂溶液。六、特异性凝胶溶液的制备：在步骤四所述的中性凝胶溶液中添加步骤三所述的各项抗体，添加浓度为1:5～1:80，分别配置成抗A特异性凝胶溶液、抗B特异性凝胶溶液、抗D特异性凝胶溶液、抗C特异性凝胶溶液、抗E特异性凝胶溶液。在抗A特异性凝胶溶液中添加亮蓝着色剂溶液，添加比例为1:2000。在抗B特异性凝胶溶液中添加柠檬黄着色剂溶液，添加比例为1:2000。在抗D特异性凝胶溶液中添加淡黑着色剂溶液，添加比例为1:2000。七、八孔卡的准备：将具有8个并排微柱的八孔卡，在121℃高温下灭菌20分钟，干燥后备用。八、分装：将特异性凝胶溶液和中性凝胶溶液进行分装，第1柱为抗A柱，含有抗A特异性凝胶溶液，第2柱为抗B柱，含有抗B特异性凝胶溶液，第3柱为抗D柱，含有抗D特异性凝胶溶液，第4柱为抗C柱，含有抗C特异性凝胶溶液，抗5柱为抗E柱，含有抗E特异性凝胶溶液，第6为中性凝胶溶液作为质控孔，第7及第8孔为中性凝胶溶液作为ABO反定型检测用。九、封口：本检测卡采用了热封封口，所用的铝箔复合封口膜中的复合材料与八孔卡所用材料一致，这样两者熔点一致，热封时，密封性更好，又较容易控制所用温度。使检测卡使用寿命更长，有效避免干胶及液体的挥发，其中，八孔所用材料为PP、PET、PE、PVC中的一种。十、产品技术参数：ABO/Rh(D/C/E)血型检测卡在2-25℃条件下保存，有效期为14个月，在有效期内，ABO/Rh(D/C/E)血型检测卡具有如下技术标准：1、特异性：含相应抗体的特异性凝胶管中，与具有相应抗原的红细胞产生凝集反应，及凝集的红细胞集中出现在凝胶上层表面，与不含有相应抗原的红细胞产生非凝集的阴性反应，红细胞可全部通过凝胶沉积在微柱底部，中性凝胶溶液中直接加入红细胞试剂，则红细胞可全部通过凝胶沉积在微柱底部，呈阴性反应。2、灵敏度：抗A柱与A1型试剂红细胞发生凝集反应时，反应强度不小于4+；与A2型、A2B型试剂红细胞发生凝集反应时，反应强度不小于3+；抗B柱与B型试剂红细胞发生凝集反应时，反应强度应不小于4+；与A2B型试剂红细胞发生凝集反应时，反应强度应不小于3+；抗D柱与正常RhD阳性试剂红细胞发生凝集反应时，反应强度不小于4+；抗C柱与正常RhC阳性试剂红细胞发生凝集反应时，反应强度不小于4+；抗E柱与正常RhE阳性试剂红细胞发生凝集反应时，反应强度不小于4+；Ac柱使用抗A抗体检测ABO血型反定型红细胞试剂A1红细胞，效价不低于同步检测的反定型试管法试验；本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.ABO/Rh(D/C/E)血型检测卡及其制备方法，其特征在于，所述检测卡上具有8个并排的微柱凝胶管，其中，一个微柱凝胶管中含有抗A特异性凝胶溶液和亮蓝着色剂溶液，一个微柱凝胶管中含有抗B特异性凝胶溶液和柠檬黄着色剂溶液，一个微柱凝胶管中含有抗D特异性凝胶溶液和淡黑着色剂溶液，一个微柱凝胶管中含有抗C特异性凝胶溶液，一个微柱凝胶管中含有抗E特异性凝胶溶液，其余3个微柱凝胶管中含有中性凝胶溶液，用途分别为一个管作为质控孔用于阴性对照，两个管用于ABO反定型检测，其中，所述抗A特异性凝胶溶液由中性凝胶溶液和IgM性质的抗A单克隆抗体组成，所述抗B特异性凝胶溶液由中性凝胶溶液和IgM性质的抗B单克隆抗体组成，所述抗D特异性凝胶溶液由中性凝胶溶液和IgM性质的RhD血型的抗D单克隆抗体组成，所述抗C特异性凝胶溶液由中性凝胶溶液和IgM性质的RhC血型的抗C单克隆抗体组成，所述抗E特异性凝胶溶液由中性凝胶溶液和IgM性质的RhE血型的抗E单克隆抗体组成；其中，所述中性凝胶溶液的制备方法为：将可筛选出蛋白分子量为1500～30000的交联葡聚糖凝胶与含有1％～3％PEG的基础液以1g：(15～19)mL的比例浸泡至少2天后搅匀15～60分钟，然后再浸泡至少1天；其中，所述基础液的组成如下：...

【技术特征摘要】
1.ABO/Rh(D/C/E)血型检测卡及其制备方法，其特征在于，所述检测卡上具有8个并排的微柱凝胶管，其中，一个微柱凝胶管中含有抗A特异性凝胶溶液和亮蓝着色剂溶液，一个微柱凝胶管中含有抗B特异性凝胶溶液和柠檬黄着色剂溶液，一个微柱凝胶管中含有抗D特异性凝胶溶液和淡黑着色剂溶液，一个微柱凝胶管中含有抗C特异性凝胶溶液，一个微柱凝胶管中含有抗E特异性凝胶溶液，其余3个微柱凝胶管中含有中性凝胶溶液，用途分别为一个管作为质控孔用于阴性对照，两个管用于ABO反定型检测，其中，所述抗A特异性凝胶溶液由中性凝胶溶液和IgM性质的抗A单克隆抗体组成，所述抗B特异性凝胶溶液由中性凝胶溶液和IgM性质的抗B单克隆抗体组成，所述抗D特异性凝胶溶液由中性凝胶溶液和IgM性质的RhD血型的抗D单克隆抗体组成，所述抗C特异性凝胶溶液由中性凝胶溶液和IgM性质的RhC血型的抗C单克隆抗体组成，所述抗E特异性凝胶溶液由中性凝胶溶液和IgM性质的RhE血型的抗E单克隆抗体组成；其中，所述中性凝胶溶液的制备方法为：将可筛选出蛋白分子量为1500～30000的交联葡聚糖凝胶与含有1％～3％PEG的基础液以1g：(15～19)mL的比例浸泡至少2天后搅匀15～60分钟，然后再浸泡至少1天；其中，所述基础液的组成如下：以上试剂用800毫升纯化水溶解后，使用HCL调节pH值为7.0～7.2，然后定容至1L。2.根据权利要求1所述的ABO/Rh(D/C/E)血型检测卡及其制备方法，其特征在于，所述抗A特异性凝胶溶液、抗B特异性凝胶溶液、抗D特异性凝胶溶液、抗C特异性凝胶溶液、抗E特异性凝胶溶液的制备方法为：在所述中性凝胶溶液中分别添加IgM性质的抗A单克隆抗体、抗B单克隆抗体、抗D单克隆抗体、抗C单克隆抗体、抗E单克隆抗体，添加浓度为1:5～1:80。3.根据权利要求2所述的ABO/Rh(D/C/E)血型检测卡及其制备方法，其特征在于，所述抗A特异性凝胶溶液、抗B特异性凝胶溶液、抗D特异性凝胶溶液、抗C特异性凝胶溶液、抗E特异性凝胶溶液的制备方法为：在所述中性凝胶溶液中分别添加IgM性质的抗A单克隆抗体、抗B单克隆抗体、抗D单克隆抗体、抗C单克隆抗体、抗E单克隆抗体，添加浓度为1:80。4.根据权利要求1所述的ABO/Rh(D/C/E)血型检测卡及其制备方法，其特征在于，所述中性凝胶溶液的制备方法为：将可筛选出蛋白分子量为1500～30000的交联葡聚糖凝胶与含有1％PEG、1.5％PEG、2％PEG或3％PEG的基础液以1g：(15～19)mL的比例浸泡至少2天后搅匀15～60分钟，然后再浸泡至少1天。5.根据权利要求1或权利要求2所述的ABO/Rh(D/C/E)血型检测卡及其制备方法，其特征在于，所述IgM性质的抗A单克隆抗体、抗B单克隆抗体、抗D单克隆抗体、抗C单克隆抗体、抗E单克隆抗体的处理方法为：IgM性质的抗A单克隆抗体的处理方法：选择IgM性质的抗A单克隆抗体，将选取...

【专利技术属性】
技术研发人员：张翠云，王芳，
申请(专利权)人：深圳市宇诺生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44