一种近玫色锁掷酵母菌株及其在生产乳糖酶中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种近玫色锁掷酵母菌株，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2019119。本发明专利技术所述的近玫色锁掷酵母菌株具有生长繁殖速度快和所产乳糖酶活力高的特点，具备高效分解乳糖的能力。本发明专利技术所述的近玫色锁掷酵母菌株尤其适用于生产乳糖酶。

A strain of Clostridium roseus and its application in lactase production

【技术实现步骤摘要】
一种近玫色锁掷酵母菌株及其在生产乳糖酶中的应用
本专利技术涉及微生物领域，尤其是涉及一种近玫色锁掷酵母菌株及其在生产乳糖酶中的应用。
技术介绍
乳糖酶又称β-半乳糖苷酶，或称β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶，是哺乳动物小肠黏膜微绒毛膜表面上存在的一种双糖酶。乳汁中的乳糖经乳糖酶水解，产物葡萄糖是人体各部分代谢的能量来源，半乳糖则是人大脑和黏膜组织代谢所必须的结构糖，是婴儿大脑发育的必要物质。当乳糖酶缺乏，乳糖不能被分解吸收，则会造成乳糖不耐受症及乳糖吸收不良。即乳糖酶缺乏症。因乳糖酶对生物体具有特殊重要性及催化活性，其具有广阔的应用前景。食品工业利用乳糖酶制成低糖乳制品，有效解决乳糖不耐受的问题；还可用于果蔬的催熟软化；乳糖酶还可用于医药领域作为消化类药物治疗婴儿消化不良症，调节肠道正常菌群等。来源于微生物的乳糖酶目前已被广泛研究及并应用到实践生产，美国等国家已把一些曲霉菌及酵母菌产生的乳糖酶正式用于食品添加剂。在国内也有诸多单一的乳糖酶制品，用于治疗乳糖不耐受等问题。利用微生物生产乳糖酶，合适的发酵培养条件是提高乳糖酶产量的关键。酶的产生和活性受到不同参数的影响，如菌株类型、培养条件(温度、pH、接种量、培养时间)、无机盐离子以及培养基中碳源和氮源的比例等。在本试验中，通过定性试验发现试验菌株具有乳糖酶酶活力，故通过优化培养条件，来提高乳糖酶产量，以便用于工业化生产。
技术实现思路
基于此，本专利技术的一个目的在于，提供一种新的近玫色锁掷酵母类真菌，其属于近玫色锁掷酵母属。本专利技术采用的技术方案如下：一种近玫色锁掷酵母菌株，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:M2019119。本专利技术所述的近玫色锁掷酵母菌株具有生长繁殖速度快和所产乳糖酶酶活力高的特点，具备高效分解乳糖的能力。本专利技术的另一个目的在于提供所述的近玫色锁掷酵母菌株在乳糖酶生产中的应用。进一步地，所述的近玫色锁掷酵母菌株的培养方法包括以下步骤：S1接种：所述近玫色锁掷酵母菌株以1.0×105～7.0×106个/ml接种浓度、0.5％～5％接种量接种于培养基中；S2培养：将接种有所述近玫色锁掷酵母菌株的培养基，于28℃，恒温培养12～72小时。进一步地，所述培养基包括以下重量份的原料：胰蛋白胨20份、酵母粉15份、葡萄糖20份、无菌水1000份。进一步地，步骤S1中的接种浓度为6.55×106。进一步地，步骤S1中的接种量为4％。进一步地，步骤S2中的培养时长为54小时。进一步地，步骤S2中，于28℃培养时，以180rpm速度摇动。进一步地，所述乳糖酶的生产包括以下步骤：S1接种：所述近玫色锁掷酵母菌株以～6.55×106接种浓度、0.5％～5％接种量接种于培养基中；S2培养：将接种有所述近玫色锁掷酵母菌株的培养基，于28℃，恒温培养12～72小时；S3离心：培养结束后，离心去除沉淀，留取上清液。所述上清液为含有本专利技术所述的近玫色锁掷酵母菌株所产乳糖酶的液体。相对于现有技术，本专利技术所述近玫色锁掷酵母菌株在生产乳糖酶的过程中，具有更加宽泛的pH适应范围和温度适应范围，有利于适应工业操作。为了更好地理解和实施，下面结合附图详细说明本专利技术。附图说明图1为本专利技术所述的近玫色锁掷酵母菌株ITS序列的PCR扩增核酸电泳图；图2为基于本专利技术所述的近玫色锁掷酵母菌株与相似菌种的ITS序列条形码构建的进化树；图3为本专利技术所述的近玫色锁掷酵母菌株与近玫色锁掷酵母属菌株SporidioboluspararoseusstrainAUMC7791(JQ425362.1)的ITS序列比对图；图4为不同时长培养本专利技术所述的近玫色锁掷酵母菌株与所得乳糖酶的酶活关系图；图5为不同接种量培养本专利技术所述的近玫色锁掷酵母菌株与所得乳糖酶的酶活关系图；图6为不同温度培养本专利技术所述的近玫色锁掷酵母菌株与所得乳糖酶的酶活关系图；图7为不同碳源培养本专利技术所述的近玫色锁掷酵母菌株与所得乳糖酶的酶活关系图；图8为不同氮源培养本专利技术所述的近玫色锁掷酵母菌株与所得乳糖酶的酶活关系图；图9为不同pH培养本专利技术所述的近玫色锁掷酵母菌株与所得乳糖酶的酶活关系图；图10为本专利技术所述的近玫色锁掷酵母菌株培养48h的形态图染色图谱；图11为本专利技术所述的近玫色锁掷酵母菌株染色图谱。具体实施方式本专利技术所述的近玫色锁掷酵母菌株，命名为XWSP1，于2019年3月19日保藏于中国典型培养物保藏中心(地址：中国湖北省武汉市武汉大学校内中国典型培养物保藏中心)，保藏编号为CCTCCNO:M2019119。实施例一：分离纯化方法本专利技术所述的近玫色锁掷酵母菌株的分离纯化方法，步骤如下：S1：称取10g的土壤样品，所述土壤样品来自广州徐闻农垦丰收农场；然后，于超净工作台中，向土壤样品中添加90ml无菌水，置于振荡器上振荡60min，使土样均匀地分散在稀释液中成为土壤悬液；待土壤分散后，吸取100ul土壤悬液到900ul无菌水中得到10倍稀释液，然后依次稀释10倍，得到100倍和1000倍稀释液，整个过程在超净工作台中进行。S2：取100ul的10倍稀释液、100倍稀释液和1000倍稀释液分别涂布于三个PDA固体培养板，然后将培养板置于培养箱28℃恒温培养2～3天，培养板上长出菌斑。S3：培养结束后，根据菌落生长情况从适当稀释梯度平板一一挑取形状、颜色、大小等不同的单菌斑进行平板划线，分离出本专利技术所述的近玫色锁掷酵母菌株。本专利技术所述的近玫色锁掷酵母菌株于PDA固体培养基上培养48h的形态特征为：菌落表面油状、呈浅红色、且向上突起(如附图10所示)；本专利技术所述的近玫色锁掷酵母菌株经草酸铵结晶紫染色后单菌落呈紫色椭圆形(如附图11所示)。S4：从PDA平板上挑取已纯化培养的菌株，接种于内含200mlYPD液体培养基的500ml锥形瓶中，在28℃，180rpm恒温摇床培养条件下培养72h，制得种子液；所述PDA固体培养基配方为：马铃薯200份、葡萄糖20份、琼脂12份、MgSO43份、KH2PO41.5份、无菌水1000份；配制方法为：准确称取200份马铃薯，切成小块，放入自来水中煮沸20min，经冷却后用400目纱布过滤获得马铃薯汁，再准确添加各组分，最后用自来水定容，分装至锥形瓶，置于灭菌锅内121℃、101KPa高压蒸汽灭菌20min，待灭菌锅温度降至70℃以下，压力恢复至0KPa时取出，于超净台上倒入培养皿中，每个培养皿约倒入10ml培养基，冷却凝固后，将固体培养板于4℃保存。所述YPD液体培养基配方为：胰蛋白胨20份、酵母粉15份、葡萄糖20份、无菌水1000份。分装至锥形瓶，置于灭菌锅内121℃、101KPa高压蒸汽灭菌20min，待灭菌锅温度降至70℃以下，压力恢复至0KPa时取出，保存备用。实施例二：培养方法S1接种：将实施例一所得的种子液以106接种浓度、2％接种量接种于内含300mlPDA液体培养基的1000ml锥形瓶中；S2培养：将接种有所述近玫色锁掷酵母菌株的培养基，于28℃，180rpm恒温摇床条件下培养72h，制得本专利技术所述的近玫色锁掷酵母菌菌液。由于本专利技术所述的近玫色锁掷酵母菌在生长过程中，能够分泌乳糖酶到细胞外部，即分泌乳糖酶到培养液中。因此，S2中所得的近玫色锁掷酵母菌菌液离心沉淀掉菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种近玫色锁掷酵母菌株，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2019119。

【技术特征摘要】
1.一种近玫色锁掷酵母菌株，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:M2019119。2.权利要求1所述的近玫色锁掷酵母菌株在乳糖酶生产中的应用。3.如权利要求2所述的近玫色锁掷酵母菌株在乳糖酶生产中的应用，其特征在于，所述的近玫色锁掷酵母菌株的培养方法包括以下步骤：S1接种：所述近玫色锁掷酵母菌株以1.0×105～7.0×106个/ml接种浓度、0.5％～5％接种量接种于培养基中；S2培养：将接种有所述酵母菌菌株的培养基，于28℃，恒温培养12～72小时。4.如权利要求3所述的近玫色锁掷酵母菌株在乳糖酶生产中的应用，其特征在于，所述培养基包括以下重量份的原料：胰蛋白胨20份、酵母粉15份、葡萄糖20份、琼脂15份、无菌水1000份。5.如权利要求3所述的近玫色锁掷酵母菌株在乳糖酶生产中的应用，其特征在于：步骤S1中的接种浓度为1.0×105...

【专利技术属性】
技术研发人员：王磊，苑广伟，姜峰，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东,44