橘皮素在制备激活细胞抵御氧化应激能力产品中的应用制造技术

本发明专利技术提供橘皮素在制备激活细胞抵御氧化应激能力产品中的应用，所述产品包括功能食品、保健品或药物。橘皮素能够在人肝L02细胞内显著增加抵御过氧化氢氧化应激损伤的能力，并通过调节氧化应激相关Nrf2‑Keap1‑Cul3通路增强抗氧化酶醌氧化还原酶NQO1和过氧化氢酶CAT的表达，并通过抑制Cul3的表达抑制Nrf2的泛素化降解，达到保持L02细胞抵抗氧化应激能力的作用。因此，可作为功能食品、保健品或防治药物用于肝脏氧化应激损伤相关疾病的防治。

【技术实现步骤摘要】
橘皮素在制备激活细胞抵御氧化应激能力产品中的应用
本专利技术属食品药品领域，涉及橘皮素在制备氧化应激功能产品中的应用，尤其涉及橘皮素在制备激活细胞抵御氧化应激能力的产品中的应用。是橘皮素在人肝L02细胞抵抗过氧化氢氧化应激时的应用。
技术介绍
氧化和还原是自然界中最常见的化学反应，表现为共价电子对的电子得失或偏移。当生物体内的氧化物积累速率超过生物体还原反应和对氧化物清除速率时，将发生氧化应激损伤。已有研究表明，氧化应激损伤与多种疾病的发生发展相关，包括癌症、糖尿病、肥胖、神经系统疾病和动脉粥样硬化等。天然产物可以帮助机体免受氧化应激损伤的危害，其中大部分为自身具有还原效应的，表现为与活性氧发生反应的“结合型”抗氧化天然活性物质，而可以增强细胞自身抗氧化能力，甚至使得细胞保持这种抵御氧化应激损伤的能力一段时间的天然活性产物，未见报道。多甲氧基黄酮(PolymethoxylatedFlavonoids,PMFs)是指具有4个及4个以上甲氧基取代基的黄酮类化合物，主要来源于芸香科柑橘属植物，尤其在柑橘果实的果皮中含量丰富。橘皮素(Tangeretin，TAN)是柑橘多甲氧基黄酮的代表性物质之一，在抗肿瘤、抗炎、抗诱变和保护心血管等方面具有很好的活性，关于多甲氧基黄酮的生物活性机制研究也逐渐深入。近年来研究发现，橘皮素具有抑制癌细胞增殖、抵抗肿瘤侵袭和转移作用、促进癌细胞凋亡和自噬等生物活性。但是关于橘皮素的提高和保持细胞抵抗氧化应激损伤能力的研究，尤其是通过激活氧化应激通路增加L02细胞的抵抗氧化应激能力的研究，尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种橘皮素(Tangeretin，TAN)在制备激活细胞抵御氧化应激能力产品中的应用，所述产品是指功能食品、保健品或药物。所述细胞是人肝L20细胞。所述激活细胞抵御氧化应激能力是指在人肝L02细胞中显著增加Nrf2的基因和蛋白表达，在人肝L02细胞中显著抑制Keap1的基因和蛋白表达，在人肝L02细胞中显著抑制Cul3的基因和蛋白表达，在人肝L02细胞中显著抑制Nrf2蛋白的泛素化降解，在人肝L02细胞中显著抑制过氧化氢诱导的活性氧积累，在人肝L02细胞中橘皮素可以显著增加醌氧化还原酶(NQO1)和过氧化氢酶(CAT)的酶活力。本专利技术研究证明在人肝L02细胞中橘皮素可以显著抑制过氧化氢诱导的活性氧积累。本专利技术研究证明在人肝L02细胞中橘皮素可以显著增加醌氧化还原酶(NQO1)和过氧化氢酶(CAT)的酶活力。本专利技术研究证明在人肝L02细胞中橘皮素可以显著增加Nrf2的基因和蛋白表达。本专利技术研究证明在人肝L02细胞中橘皮素可以显著抑制Keap1基因和蛋白表达。本专利技术邮件证明在人肝L02细胞中橘皮素可以显著抑制Cul3基因和蛋白表达。本专利技术研究证明在人肝L02细胞中橘皮素可以显著抑制Nrf2的泛素华降解。本专利技术提供的橘皮素能够在人肝L02细胞内显著增加抵御过氧化氢氧化应激损伤的能力，并通过调节氧化应激相关Nrf2-Keap1-Cul3通路增强抗氧化酶醌氧化还原酶NQO1和过氧化氢酶CAT的表达，并通过抑制Cul3的表达抑制Nrf2的泛素化降解，达到保持L02细胞抵抗氧化应激能力的作用。可制备功能食品、保健品或防治药物用于肝脏氧化应激损伤相关疾病的防治。附图说明附图1-1是以人肝L02细胞为模型，橘皮素(TAN)对其在过氧化氢氧化损伤时细胞内活性氧含量的相对影响。其中二甲基亚砜(DMSO)为阴性对照(control)，未进行过氧化氢处理的细胞为空白对照(blank)，保留或预处理后去除的橘皮素终浓度为2μmol/L。图片为使用荧光显微镜拍摄的细胞照片。附图1-2是以人肝L02细胞为模型，橘皮素(TAN)对其在过氧化氢氧化损伤时细胞内活性氧含量的相对影响。其中二甲基亚砜(DMSO)为阴性对照(control)，未进行过氧化氢处理的细胞为空白对照(blank)，保留或预处理后去除的橘皮素终浓度为2μmol/L，图为使用ImageJ对荧光照片光密度值的分析。附图2-1是以人肝L02细胞为模型，橘皮素(TAN)对其醌氧化还原酶(NQO1)和过氧化氢酶(CAT)酶活性的影响。其中二甲基亚砜(DMSO)为阴性对照(control)，保留或去除预处理的橘皮素设置三个浓度梯度，分别为0.5μmol/L、1μmol/L、2μmol/L。结果表示为处理组与control组的相对含量，用SPSS软件进行差异显著性分析，进行t检验，*p<0.05，与control组比较。附图2-2是以人肝L02细胞为模型，橘皮素(TAN)对其醌氧化还原酶(NQO1)和过氧化氢酶(CAT)蛋白表达的影响。其中二甲基亚砜(DMSO)为阴性对照(control)，保留或去除预处理的橘皮素终浓度为2μmol/L。附图3是以人肝L02细胞为模型，橘皮素(TAN)对其Nrf2、Keap1和Cul3基因的影响。其中二甲基亚砜(DMSO)为阴性对照(control)，保留或去除预处理的橘皮素设置三个浓度梯度，分别为0.5μmol/L、1μmol/L、2μmol/L。结果表示为处理组与control组的相对含量，用SPSS软件进行差异显著性分析，进行t检验，*p<0.05，与control组比较。附图4是以人肝L02细胞为模型，橘皮素(TAN)对其Nrf2、Keap1和Cul3蛋白表达的影响。其中二甲基亚砜(DMSO)为阴性对照(control)，保留或去除预处理的橘皮素终浓度为2μmol/L。附图5是以人肝L02细胞为模型，橘皮素(TAN)对其Nrf2蛋白泛素化降解的影响。其中IgG为空白对照，DMSO为溶剂对照(control)，MG-132为阳性对照，保留或去除预处理的橘皮素终浓度为2μmol/L。附图6是以人肝L02细胞为模型，橘皮素(TAN)对其Nrf2蛋白泛素化降解抑制作用的时间影响。其中IgG为空白对照，DMSO为溶剂对照(control)，MG-132为阳性对照，保留或去除预处理的橘皮素终浓度为2μmol/L。具体实施方式本专利技术结合附图和实施例作进一步的说明。实施例1橘皮素对人肝L02细胞受到过氧化氢氧化应激损伤时细胞内活性氧含量的影响人肝L02细胞用含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基于37℃、5％CO2细胞培养箱中孵育，隔天更换新鲜培养液，2-3天传代1次。实验时，L02细胞接种于6孔板。待细胞生长至70-80％融合，弃去原培养基，分组加药。设空白对照组(无过氧化氢处理)，DMSO溶剂对照组和橘皮素处理组(终浓度为2μmol/L)。作用6h后，保留(或移除)含橘皮素的培养基，加入含有浓度为0.78mmol/L过氧化氢的无血清培养基。孵育30min后，移除原培养基，使用PBS清洗两次，加入含有终浓度为10μmol/L的DCFH-DA探针的无血清培养基。孵育20min后，移除原培养基，使用无血清培养基洗3次，使用荧光显微镜观察6孔板中的细胞荧光情况。每组设定3个复孔，实验平行重复3次。数据用平均值±标准误表示，使用ImageJ软件进行荧光光密度值统计，SPSS软件进行数据分析，进行t检验。具体的橘皮素对人肝L02细胞受到过氧化氢氧化应激损伤时细胞内活性氧的影响见附图1。实施例2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种橘皮素在制备激活细胞抵御氧化应激能力产品中的应用，其特征在于，所述产品是指功能食品、保健品或药物，所述细胞是人肝L20细胞。

【技术特征摘要】
1.一种橘皮素在制备激活细胞抵御氧化应激能力产品中的应用，其特征在于，所述产品是指功能食品、保健品或药物，所述细胞是人肝L20细胞。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述激活细胞抵御氧化应激能力是在人肝L02细胞中显著增加Nrf2的基因和蛋白表达，在人肝L02细胞中显著抑制Keap1的基因和蛋白表达，在人肝L02细胞中显著抑制Cul3的基因和蛋白表...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙崇德，王岳，曹锦萍，李鲜，陈昆松，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33