一种化妆品中非法添加物的测定方法技术

本发明专利技术公开了一种基于原位电离‑超高分辨质谱检测和云端检索策略的化妆品中非法添加物快速识别检验技术。一旦筛查出非法添加物，找到相应标准品，可采用平行反应监测模式针对目标化合物进行快速定量分析。本发明专利技术主要包含数据采集和数据处理两大部分。本方法大幅提高了方法的通用性和有效性，使非法添加检测技术上升到了一个新水平，可显著提高检验工作效率，对突破检验周期过长的技术瓶颈、大幅度缩短工作流程时长，推动化妆品科学监管，促进化妆品行业健康发展，保障化妆品安全具有重要意义。

A Method for Determining Illegal Additives in Cosmetics

【技术实现步骤摘要】
一种化妆品中非法添加物的测定方法
本专利技术属于化妆品检测
，具体涉及一种无需非法添加物标准品，就能检测化妆品中的非法添加物的测定方法。
技术介绍
目前我国化妆品的检测主要依据《化妆品安全技术规范》(2015年版)和一些国家标准、行业标准。这些传统的标准方法都是针对某一种或一类化合物进行检测，而在实际工作中，通常遇到的问题是不知道待测样品可能包含的非法添加物，现阶段的解决方案是将能检的项目都检验一遍，这种方式无疑会造成人力和物力的大大浪费，并且也不一定能得到满意的结果。包括目前最高端的超高分辨质谱，也仍然只是关注目标化合物的筛查，仅仅是扩大了筛查范围，显然没有充分发挥超高分辨质谱的优势。另一常见问题是通常非法添加物的含量很高，采用液相色谱-质谱联用易造成色谱和质谱系统的污染，还可能因色谱系统不合适而造成待测物的漏检。化妆品中非法添加物的检测难点不在检测灵敏度，而在于其未知性，筛查没有边界，即使获得了超高分辨质谱数据，也不可能靠人工解析对未知化合物作出鉴定。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种的化妆品中非法添加物的测定方法，数据采集信息完整、数据检索快捷全面，能够在没有标准品的情况下，检测非目标化合物。解决了现阶段仅能检测目标化合物、检出率低、检测周期长的技术问题。为了实现上述目的，本专利技术采用了以下技术方案：一种化妆品中非法添加物的测定方法，步骤为：试样提取，筛查测定；所述筛查测定包括：数据采集和数据处理；所述试样提取步骤为：称取0.5g试样，于15mL离心管中，加入1.0mL乙醇溶液置超声波水浴中超声5min，涡旋振荡10min，10000r/min离心5min，取上清液0.5mL转移至1.5mL塑料离心管中，加入0.5mL水，涡旋混匀，10000r/min离心5min，所得试样溶液供测定；所述的筛查测定的质谱条件的正离子模式为：DART源参数：正离子模式，离子化气体为高纯氦气，氦气的流速为3L/min，气体离子化温度为500℃；采用12Dip-itSamplers模式进样，用移液枪吸取1μL溶液点于玻璃棒下端置于自动进样架上，进样速率为0.3mm/s，离子源出口距质谱进口约10mm；Q-Exative-orbitrapMS参数：正离子化FULLMS/DD-MS2扫描模式；FullMS扫描范围：m/z100-1000；一级全扫描分辨率：R＝70000；Sweepgasflowrate：7.00；AGCtarget：3e6；maximumIT:100ms；dd-MS2扫描分辨率：R＝17500,AGCtarget:2e5；maximumIT:60ms；NCE：20,40,60；所述的筛查测定的质谱条件的负离子模式为：DART源参数：负离子模式，离子化气体为高纯氦气，氦气的流速为3L/min，气体离子化温度为500℃；采用12Dip-itSamplers模式进样，用移液枪吸取1μL溶液点于玻璃棒下端置于自动进样架上，进样速率为0.3mm/s，离子源出口距质谱进口约10mm；Q-Exative-orbitrapMS参数：负离子化FULLMS/DD-MS2扫描模式；FullMS扫描范围：m/z100-1000；一级全扫描分辨率：R＝70000；Sweepgasflowrate：7.00；AGCtarget：1e6；maximumIT:100ms；dd-MS2扫描分辨率：R＝17500,AGCtarget:2e5；maximumIT:60ms；NCE：20,40,60；所述数据采集方法为：首先对仪器用正离子和负离子校正液分别进行校正，质量数校正通过后方可使用，再取试样溶液，在所述质谱条件下正负离子模式下各测定一次，每次进样做两个平行，仪器响应值在正常范围之内；所述的仪器为Q-Exactive静电轨道阱质谱仪，实时直接分析离子源DARTSVP；所述数据处理方法为：对采集的数据，采用CompoundDiscoverer软件处理，选择mzCloud、Chemspider云端数据库进行检索，并对检索结果进行人工研判。所述的非法添加物包括：2015版《化妆品安全技术规范》中规定的1388项禁用物质。所述的禁用物质包括：氢化可的松、氯倍他索丙酸酯，西咪替丁，林可霉素、苯海拉明，倍他米松、特比萘芬、益康唑中的一种或几种。所述的筛查测定以检出氯霉素为例的定量测定方法包括：DART源参数：负离子模式，离子化气体为高纯氦气，氦气的流速为3L/min，气体离子化温度为500℃；采用12Dip-itSamplers模式进样，用移液枪吸取1μL溶液点于玻璃棒下端置于自动进样架上，进样速率为0.3mm/s，离子源出口距质谱进口约10mm；Q-Exative-orbitrapMS参数：负离子化FULLMS+PRM扫描模式；扫描范围：m/z100-1000；一级全扫描分辨率：R＝70000；Sweepgasflowrate：7.00；AGCtarget：1e6；maximumIT:100ms；平行反应监测模式扫描分辨率：R＝17500,AGCtarget:2e5；maximumIT:100ms；离子、子离子和相对碰撞能量为：母离子321.0050，子离子152.0353、121.0294，NCE/％为35；标准曲线的制备：采用标准加入法，称取0.5g试样于15mL离心管中，加入适量标准储备溶液，配制成浓度为0、2.0、5.0、10、20、50和100mg/L的系列标准样品，放置30min后，按所述提取步骤操作，供质谱测定；以测得色谱峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，求回归方程和相关系数；定量测定法：取试样溶液和相应的标准溶液，作单点或标准曲线校准，按外标法，以峰面积计算。标准溶液及试样溶液中药物的响应值均应在仪器检测的线性范围之内；在上述色谱条件下，标准溶液、空白试样和添加试样的色谱图见附图1-3；空白试验：除不加试样外，采用完全相同的步骤进行平行操作；试样中药物含量按式1计算：式中：X——供试试样中待测物的含量，单位为mg/kg；A——试样溶液中待测物的峰面积；cs——标准溶液中待测物的浓度，单位为mg/L；V——试样溶液的定容体积，单位为mL；As——标准溶液中待测物的峰面积；m——试样溶液所代表的试样质量，单位为g；灵敏度：定量限的确定，是根据信噪比的值来确定的。在空白样品中添加氯霉素标准溶液，测定其信号与噪声的比值，当S/N≥10时且回收率和相对标准偏差均符合化妆品安全规范要求时的浓度为定量限，实验结果：本方法的定量限氯霉素为3mg/kg；准确度：称取0.5g试样于15mL离心管中，加入适量标准储备溶液，配制成含氯霉素浓度为3.0、6.0和30mg/kg的样品，每个浓度做6个平行，放置30min后，按样品提取方法处理后测定，计算加标回收率；实验结果：本方法在3.0mg/kg～30mg/kg添加浓度水平上的回收率为70％～120％；精密度：称取0.5g试样于15mL离心管中，加入适量标准储备溶液，配制成含氯霉素浓度为3.0、6.0和30mg/kg的样品，每个浓度做6个平行，放置30min后，按样品提取方法处理后测定，计算室内相对标准偏差；实验结果：本方法的实验室内相对标准偏差≤15％。有益效果：本本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种化妆品中非法添加物的测定方法，其特征在于步骤为：试样提取，筛查测定；所述筛查测定包括：数据采集和数据处理；所述试样提取步骤为：称取0.5g试样，于15mL离心管中，加入1.0mL乙醇溶液置超声波水浴中超声5min，涡旋振荡10min，10000r/min离心5min，取上清液0.5mL转移至1.5mL塑料离心管中，加入0.5mL水，涡旋混匀，10000r/min离心5min，所得试样溶液供测定；所述的筛查测定的质谱条件的正离子模式为：DART源参数：正离子模式，离子化气体为高纯氦气，氦气的流速为3L/min，气体离子化温度为500℃；采用12 Dip‑it Samplers模式进样，用移液枪吸取1μL溶液点于玻璃棒下端置于自动进样架上，进样速率为0.3mm/s，离子源出口距质谱进口约10mm；Q‑Exative‑orbitrap MS参数：正离子化FULL MS/DD‑MS

【技术特征摘要】
1.一种化妆品中非法添加物的测定方法，其特征在于步骤为：试样提取，筛查测定；所述筛查测定包括：数据采集和数据处理；所述试样提取步骤为：称取0.5g试样，于15mL离心管中，加入1.0mL乙醇溶液置超声波水浴中超声5min，涡旋振荡10min，10000r/min离心5min，取上清液0.5mL转移至1.5mL塑料离心管中，加入0.5mL水，涡旋混匀，10000r/min离心5min，所得试样溶液供测定；所述的筛查测定的质谱条件的正离子模式为：DART源参数：正离子模式，离子化气体为高纯氦气，氦气的流速为3L/min，气体离子化温度为500℃；采用12Dip-itSamplers模式进样，用移液枪吸取1μL溶液点于玻璃棒下端置于自动进样架上，进样速率为0.3mm/s，离子源出口距质谱进口约10mm；Q-Exative-orbitrapMS参数：正离子化FULLMS/DD-MS2扫描模式；FullMS扫描范围：m/z100-1000；一级全扫描分辨率：R＝70000；Sweepgasflowrate：7.00；AGCtarget：3e6；maximumIT:100ms；dd-MS2扫描分辨率：R＝17500,AGCtarget:2e5；maximumIT:60ms；NCE：20,40,60；所述的筛查测定的质谱条件的负离子模式为：DART源参数：负离子模式，离子化气体为高纯氦气，氦气的流速为3L/min，气体离子化温度为500℃；采用12Dip-itSamplers模式进样，用移液枪吸取1μL溶液点于玻璃棒下端置于自动进样架上，进样速率为0.3mm/s，离子源出口距质谱进口约10mm；Q-Exative-orbitrapMS参数：负离子化FULLMS/DD-MS2扫描模式；FullMS扫描范围：m/z100-1000；一级全扫描分辨率：R＝70000；Sweepgasflowrate：7.00；AGCtarget：1e6；maximumIT:100ms；dd-MS2扫描分辨率：R＝17500,AGCtarget:2e5；maximumIT:60ms；NCE：20,40,60；所述数据采集方法为：首先对仪器用正离子和负离子校正液分别进行校正，质量数校正通过后方可使用，再取试样溶液，在所述质谱条件下正负离子模式下各测定一次，每次进样做两个平行，仪器响应值在正常范围之内；所述的仪器为Q-Exactive静电轨道阱质谱仪，实时直接分析离子源DARTSVP；所述数据处理方法为：对采集的数据，采用CompoundDiscoverer软件处理，选择mzCloud、Chemspider云端数据库进行检索，并对检索结果进行人工研判。2.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于所述的非法添加物包括：2015版《化妆品安全技术规范》中规定的1388项禁用物质。3.如权利要求2所述的测定方法，其特征在于所述的禁用物质包括：氢化可的松、氯倍他索丙酸酯，西...

【专利技术属性】
技术研发人员：邵琳智，蓝草，董洁，李荀，徐惠金，邹游，陈思敏，
申请(专利权)人：广州海关技术中心，
类型：发明
国别省市：广东,44