一种基于流式细胞术检测NK细胞杀伤活性的方法技术

一种基于流式细胞术检测NK细胞杀伤活性的方法，包括以下步骤：步骤1，接种并培养细胞；步骤2，收集细胞并染色：采用CD2‑APC荧光染料对NK细胞和肿瘤细胞进行分群，随后采用Annexin V‑FITC/SYTOX Green对凋亡和坏死的靶细胞进行染色；步骤3，流式上机检测。本发明专利技术使用Annexin V‑FITC/SYTOX Green双染，采用相同检测通道将凋亡细胞和坏死细胞全部标记出来，显著降低了对NK杀伤后肿瘤细胞各种不同状态(早期凋亡、中晚期凋亡或坏死细胞)的漏检。

A Killing Activity Detection Method of NK Cells Based on Flow Cytometry

【技术实现步骤摘要】
一种基于流式细胞术检测NK细胞杀伤活性的方法
本专利技术属于细胞杀伤活性检测
，特别涉及一种基于流式细胞术检测NK细胞杀伤活性的方法。
技术介绍
自然杀伤细胞(Naturalkillercell，NKcell)是机体天然免疫系统的重要组成部分。在多种细胞因子(如IL-2、IL-15等)、饲养细胞(Feedercells)的作用下，NK细胞可发生增殖和活化，随后释放穿孔素及颗粒酶杀死肿瘤细胞、病毒和清除非己细胞。NK细胞与肿瘤免疫、抗病毒免疫、移植免疫及自身免疫疾病密切相关。例如在多数肿瘤(特别是中晚期及伴有转移的肿瘤)、免疫缺陷等患者中，NK细胞活性降低；而在某些病毒感染性疾病早期、长期使用干扰素及其诱导物、宿主抗移植物反应等患者中，NK细胞活性增高。因此，准确评价外周血或体外培养NK细胞的杀伤活性，是了解NK细胞功能及评估过继性免疫治疗效果的一种重要手段。目前检测NK细胞杀伤活性的方法较多，可分为同位素标记法、酶反应比色法和流式细胞术三大类。同位素标记51Cr释放法被认为是“金标准”，该方法准确性较高，但因设备昂贵且存在放射污染，现已不常使用。酶反应比色法有乳酸脱氢酶(LDH本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于流式细胞术检测NK细胞杀伤活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，接种并培养细胞；步骤2，收集细胞并染色：采用CD2‑APC荧光染料对NK细胞和肿瘤细胞进行分群，随后采用Annexin V‑FITC/SYTOX Green对凋亡和坏死的靶细胞进行染色；步骤3，流式上机检测。

【技术特征摘要】
1.一种基于流式细胞术检测NK细胞杀伤活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，接种并培养细胞；步骤2，收集细胞并染色：采用CD2-APC荧光染料对NK细胞和肿瘤细胞进行分群，随后采用AnnexinV-FITC/SYTOXGreen对凋亡和坏死的靶细胞进行染色；步骤3，流式上机检测。2.根据权利要求1所述的一种基于流式细胞术检测NK细胞杀伤活性的方法，其特征在于，步骤1具体包括：接种KHYG-1、K562细胞(或其他肿瘤细胞作为靶细胞)并培养，实验前1-2天给细胞换液，调整细胞至对数生长期的最佳状态；KHYG-1细胞培养于含IL-2的细胞培养基中。3.根据权利要求1所述的一种基于流式细胞术检测NK细胞杀伤活性的方法，其特征在于，步骤2包括以下步骤：1)NK细胞为效应细胞，肿瘤细胞为靶细胞，1500rpm离心NK细胞和肿瘤细胞5分钟，重悬并分别计数，调整细胞密度为0.5х106/ml；2)接种细胞至24孔板(或96孔V型板，细胞培养体积减少至1/10)；设置不同效应细胞与靶细胞比例，E:Tratio；取1mlK562细胞加入对照孔，取1mlKHYG-1细胞和1mlK562细胞混合后加入实验孔；3)继续培养4小时；4)收集2孔细胞至流式管，于1500rpm离心细胞5分钟，弃掉上清，用4℃的PBS缓冲液洗涤1-2...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡劲松，张丹，雷莉，王爱英，
申请(专利权)人：西安交通大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61