一种枝瑚菌多糖及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种枝瑚菌多糖，所述多糖是由葡萄糖和半乳糖组成的杂多糖，所述葡萄糖与半乳糖的残基摩尔比为2:1，优选的，所述葡萄糖选自α‑D‑葡萄糖或β‑D‑葡萄糖，所述半乳糖选自α‑D‑半乳糖，更优选的，所述α‑D‑葡萄糖为α‑D‑吡喃型葡萄糖。

A Polysaccharide from Cladosporium spp. and Its Preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种枝瑚菌多糖及其制备方法和应用
本专利技术属于真菌多糖应用
，具体地说，涉及一种天然产物枝瑚菌多糖RF-1及其制备方法和应用。
技术介绍
多糖(polysaccharides)是生物体普遍存在的一类生物大分子。多糖的发展较晚，结构又复杂多样，因此对研究其结构、活性等都较困难。多糖生物活性的研究报道主要集中在免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化和降血糖等方面。枝瑚菌，拉丁学名Ramariaflaccida(Fr.)Quél.，又被称为扫帚菌、鸡爪菌、刷把菌、则梭校等，子实体小，分枝多且稠密，柄短，通常从柄基部分枝。菌肉柔软，担子细长呈棍棒状。夏秋季群生在阔叶林或针叶林中地上的落叶层或枯枝，落果上，往往密集在一起。目前，对枝瑚菌多糖的精细结构及其抗肿瘤活性应用尚未见任何报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述技术存在的缺陷，提供一种枝瑚菌多糖及其制备方法和应用。本专利技术的目的是通过以下及技术方案实现的：本专利技术提供一种枝瑚菌多糖，所述多糖是由葡萄糖和半乳糖组成的杂多糖，所述葡萄糖与半乳糖的残基摩尔比为2:1。优选的，所述葡萄糖选自α-D-葡萄糖或β-D-葡萄糖，所述半乳糖选自α-D-半乳糖。更优选的，所述α-D-葡萄糖为α-D-吡喃型葡萄糖。在本专利技术的一个优选实施方式中，所述枝瑚菌多糖主链由(1→6,2)-α-D-半乳糖和(1→6,4)-α-D-吡喃型葡萄糖组成，支链通过(1→6)-α-D-吡喃型葡萄糖与主链葡萄糖的4-O相连，在支链的1-O上和主链半乳糖的2-O上连接4-β-D-葡萄糖作为端基糖。优选的，所述枝瑚菌多糖的重均分子量为12000-25000Da(如12000、15000、17000、20000、23000、25000Da)；在本专利技术的一个优选实施方式中，所述枝瑚菌多糖的重均分子量为17093Da。在本专利技术的优选实施方式中，所述枝瑚菌多糖的结构式如下：其中，n为10-200的整数(如10、40、50、100、120、180、190、200)。本专利技术提供一种枝瑚菌多糖的制备方法，包括如下步骤：(1)取枝瑚菌子实体粉末，热水浸提，将所得水提物经浓缩、醇沉、除蛋白得到粗多糖；(2)将步骤(1)所得粗多糖通过离子交换柱层析，洗脱，收集洗脱液；(3)将步骤(2)所得洗脱液进行透析、浓缩。(4)将步骤(3)透析袋内液体冷冻干燥，得到枝瑚菌多糖。优选的，所述热水浸提步骤中，浸提温度为80-100℃(如80、85、90、95、100℃)，在本专利技术的一个实施例中，该浸提温度为100℃。优选的，热水浸提步骤中，枝瑚菌子实体粉末与水的体积比为1:1-10(如1:1、1:2、1:3、1:5、1:8、1:10)；在本专利技术的一个实施例中，该体积比为1:3。优选的，浸提次数为1次或多次(如2、3、4、5次)；在本专利技术的一个实施例中，该浸提次数为3次。优选的，每次浸提时间为1-10小时(如1、3、5、8、10小时)；在本专利技术的一个实施例中，每次浸提时间为3小时。在本专利技术的一个实施例中，热水浸提步骤包括：取枝瑚菌子实体粉末，与水混合，并置于水浴中煮沸。优选的，醇沉步骤中，醇与水提物的浓缩液的体积比为1-10:1(如1:1、3:1、4:1、5:1、10:1)；在本专利技术的一个实施例中，该体积比为3:1。在本专利技术的一个实施例中，醇沉步骤中，醇为乙醇。在本专利技术的一个实施例中，除蛋白采用Sevage法。更优选的，步骤(1)包括：取枝瑚菌子实体粉末，热水浸提，收集上清液，浓缩，加入无水乙醇，收集沉淀，烘干，除去其中的蛋白质，得到粗多糖。离子交换柱为纤维素柱，该纤维素柱的填料为DEAE-纤维素。洗脱所用洗脱剂为蒸馏水或NaCl溶液。优选的，洗脱液为NaCl溶液，该洗脱为梯度洗脱，洗脱剂浓度为0.01-1.0mol/L(如0.01、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.8、1.0)mol/L。更优选的，步骤(2)包括：将步骤(1)所得粗多糖的水溶液通过纤维素柱，梯度洗脱，收集洗脱液，浓缩。更优选的，步骤(3)包括：将步骤(2)所得洗脱液置于透析袋中进行透析，持续3天。透析袋的截留分子量为5000-10000Da(如5000、7000、8000、10000Da)；在本专利技术的一个实施例中，该截留分子量为7000Da。本专利技术提供一种枝瑚菌多糖在制备预防和/或治疗肿瘤药物、保健品或食品中的应用。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术一定剂量的枝瑚菌多糖RF-1具有显著的抗肿瘤活性，RF-1在浓度为20mg/kg时，可以显著抑制小鼠内S180肿瘤细胞的增殖，且效果优于甘露聚糖肽。附图说明图1枝瑚菌多糖RF-1HPGPC谱图；图2枝瑚菌多糖RF-1的红外谱图；图3枝瑚菌多糖RF-1的HPLC图谱；图4枝瑚菌多糖RF-1的1HNMR图谱；图5枝瑚菌多糖RF-1的13CNMR图谱；图6枝瑚菌多糖RF-1的HH-COSY图谱；图7枝瑚菌多糖RF-1的HMQC图谱；图8枝瑚菌多糖RF-1的HMBC图谱；图9枝瑚菌多糖RF-1的结构；图10枝瑚菌多糖RF-1体内抑制S180肿瘤白光图。具体实施方式除非另有定义，本专利技术中所使用的所有科学和技术术语具有与本专利技术涉及
的技术人员通常理解的相同的含义。下面结合附图和具体实施例对本专利技术的技术方案作进一步详细地说明。实施例1枝瑚菌多糖RF-1的分离提取枝瑚菌多糖RF-1的分离提取S1：通过热水提取法提取枝瑚菌粗多糖将粉碎后的枝瑚菌子实体粉末和蒸馏水以1：3的体积比在100℃的水中煮沸3小时，上清液加入三倍体积的无水乙醇形成絮状沉淀物，收集沉淀并干燥，除蛋白，获得枝瑚菌粗多糖；S2：DEAE-纤维素柱层析法分离纯化枝瑚菌粗多糖称取DEAE-纤维素50.00g，活化，将粗多糖稀释后的上清液(3ml)加入DEAE纤维素柱中，加入蒸馏水洗脱，用透析袋(Mw＝7kDa)透析，除去小分子化合物，冻干，得到枝瑚菌多糖，命名为RF-1。实施例2枝瑚菌多糖RF-1的结构鉴定运用水解、甲基化分析、气相色谱和质谱联用技术、红外谱技术、核磁共振技术、高效液相色谱，对枝瑚菌多糖RF-1进行结构解析。1，分子量的测定将实施例1制备的5mg枝瑚菌多糖RF-1样品用1mlddH2O溶解，超声5min，进行HPGPC分析，结果如图1所示，枝瑚菌纯多糖重均分子量为17093Da。2，枝瑚菌多糖RF-1的红外谱分析将实施例1制备的枝瑚菌多糖RF-1样品2mg与KBr混合压片，用红外分光光度计扫描4000cm-1-400cm-1范围，结果如图2所示，通过傅里叶变换红外光谱进行RF-1的红外分析如下，3427.93cm-1为糖类分子内或分子间氢键O-H的伸缩振动峰，2922.96cm-1是饱和C-H的伸缩振动峰，多糖的特征吸收峰中，1634.83cm-1为C＝O，C＝C振动峰，1402.49cm-1为C-H的弯曲振动峰，1076.87cm-1为C-O-H伸缩振动和吡喃环中醚键C-O-C伸缩振动，573.00cm-1为C-H的摇摆振动峰。3，枝瑚菌多糖RF-1的高效液相色谱分析单糖标准品和经TFA酸水解后的枝瑚菌多糖RF-1样品，以75％乙腈作为流动相进行高效液相色谱(HPLC)分析，通过HPLC分析RF-1的酸性水解产物，结果如图本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种枝瑚菌多糖，所述多糖是由葡萄糖和半乳糖组成的杂多糖，所述葡萄糖与半乳糖的残基摩尔比为2:1，所述葡萄糖选自α‑D‑葡萄糖或β‑D‑葡萄糖，所述半乳糖选自α‑D‑半乳糖。

【技术特征摘要】
1.一种枝瑚菌多糖，所述多糖是由葡萄糖和半乳糖组成的杂多糖，所述葡萄糖与半乳糖的残基摩尔比为2:1，所述葡萄糖选自α-D-葡萄糖或β-D-葡萄糖，所述半乳糖选自α-D-半乳糖。2.根据权利要求所述的枝瑚菌多糖，其特征在于，所述α-D-葡萄糖为α-D-吡喃型葡萄糖。3.根据权利要求2所述的枝瑚菌多糖，其特征在于，枝瑚菌多糖主链由(1→6,2)-α-D-半乳糖和(1→6,4)-α-D-吡喃型葡萄糖组成，支链通过(1→6)-α-D-吡喃型葡萄糖与主链葡萄糖的4-O相连，在支链的1-O上和主链半乳糖的2-O上连接4-β-D-葡萄糖作为端基糖。4.根据权利要求3所述的枝瑚菌多糖，其特征在于，所述枝瑚菌多糖的结构式如下：其中，n为10-200的整数(如10、40、50、100、120、180、190、200)。5.根据权利要求1-4任一所述的枝瑚菌多糖，其特征在于，所述枝瑚菌多糖的重均分子量为12000-25000Da，优选为17093Da。6.一种权利要求1-5任一所述的枝瑚菌多糖的制备方法，包括如下步骤：(1)取枝瑚菌子实体粉末，热水浸提，将...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁祥，侯怡铃，董明明，
申请(专利权)人：西华师范大学，
类型：发明
国别省市：四川,51