一种制备动物成熟神经元单细胞的方法技术

技术编号:22069271 阅读:37 留言:0更新日期:2019-09-12 12:11
本发明专利技术公开了一种制备动物成熟神经元单细胞的方法,属于成熟神经元单细胞分离技术领域。本发明专利技术首先利用D‑PBS对小鼠进行灌流,将血细胞去掉,避免了血细胞对后续分离的影响;利用Hibernate‑A作为消化过程中的培养基,可以不考虑预先通氧或者消化过程中通氧的问题,可有效节约至少30min时间,减少对神经元的伤害;此方法不需要特别的仪器即可进行单细胞制备;本方法可同时分离出寡突胶质细胞、星形胶质细胞、神经元,可在同一批次样品中对不同类型的神经细胞进行测序或者功能分析,可减少实验误差,节约成本。

A Method for Preparing Monocytes of Mature Animal Neurons

【技术实现步骤摘要】
一种制备动物成熟神经元单细胞的方法
本专利技术涉及一种制备动物成熟神经元单细胞的方法,属于成熟神经元单细胞分离

技术介绍
在生物体内,每个细胞都是独一无二的,即使是同一器官或者组织中的同种类型的细胞也都具有异质性。大脑作为生物体最重要的器官,具有其独有的特征,如成熟神经元高度分化,不可进行细胞分裂,这可能会导致很多神经退行性疾病及精神类疾病的发生,如阿尔兹海默症、帕金森综合征等。通过单细胞测序可以了解细胞之间的异质性,找到特异性参与某种疾病的特定类群神经元,同时也能对某一个脑区的神经元重新分类,原来由于技术的限制,对神经元的分类相对来讲不是很完善,单细胞测序技术可以解决这一问题。由于成熟神经元具有复杂的轴突树突系统,导致其在进行单细胞分离时会产生大量的杂质,同时,由于神经元对氧气和营养的需求量较其他细胞高,分离过程中神经元容易死亡。目前市场上仅有一款成熟神经元的分离试剂盒,即美天旎公司生产的大小鼠成熟神经元分离试剂盒,该试剂盒十分昂贵且需要用到美天旎公司特有的仪器,该仪器造价在30-50万/台,同时,该试剂盒最后进行血细胞的分离,会降低神经细胞的得率,所以其使用率很低,目前本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备成熟神经元单细胞的方法,其特征在于,所述方法具体包括以下步骤:(1)获取目的动物组织,所述目的动物组织中含目的动物神经细胞;(2)将切碎后的目的动物组织与HABG消化缓冲液混合,每3‑8mg组织添加1mL HABG,进行组织消化,消化条件为33‑37℃恒温,100‑200rpm消化20‑50min;(3)将消化后的组织进行离心,留沉淀,加入HABG消化缓冲液吹打沉淀;(4)将(3)中获得的溶液中的未被消化的组织及大的碎片过滤掉;(5)将(4)中获得的含有细胞的HABG溶液加入到细胞梯度分离液中,含有目的动物神经细胞的HABG溶液和梯度分离液的体积比为(3:2)‑(2:1),混匀后离...

【技术特征摘要】
1.一种制备成熟神经元单细胞的方法,其特征在于,所述方法具体包括以下步骤:(1)获取目的动物组织,所述目的动物组织中含目的动物神经细胞;(2)将切碎后的目的动物组织与HABG消化缓冲液混合,每3-8mg组织添加1mLHABG,进行组织消化,消化条件为33-37℃恒温,100-200rpm消化20-50min;(3)将消化后的组织进行离心,留沉淀,加入HABG消化缓冲液吹打沉淀;(4)将(3)中获得的溶液中的未被消化的组织及大的碎片过滤掉;(5)将(4)中获得的含有细胞的HABG溶液加入到细胞梯度分离液中,含有目的动物神经细胞的HABG溶液和梯度分离液的体积比为(3:2)-(2:1),混匀后离心。2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中将消化好的组织于180-200g,3-5℃离心5-8min。3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(4)中将预先用D-PBS浸润过的10-100μm的筛网套至干净的离心管中,将上述含有目的...

【专利技术属性】
技术研发人员:肖振
申请(专利权)人:上海卡序生物医药科技有限公司
类型:发明
国别省市:上海,31

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