一种人经血干细胞的制备方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种人经血干细胞的制备方法及应用。该技术方案首先利用体外共培养技术研究了人经血干细胞对HeLa细胞的干预作用，发现共培养条件下HeLa细胞的增殖作用得到明显抑制，同时，由人经血干细胞所得的条件培养基也对HeLa细胞具有确切的抑制作用；在此基础上，经transwell小室实验表明，人经血干细胞可通过诱导HeLa细胞G0/G1期细胞周期阻滞来抑制其增殖和侵袭，同时可以以旁分泌方式体外抑制HeLa细胞迁移。基于以上有益的发现，本发明专利技术确定了利用人经血干细胞对HeLa细胞进行非治疗目的的抑制的新用途，并可利用其制备宫颈癌治疗药物。体内实验验证表明，体内注射人经血干细胞可显著降低异种移植肿瘤的体积和重量，为所述药物的疗效提供了有力支撑。

Preparation and application of human trans-hematological stem cells

【技术实现步骤摘要】
一种人经血干细胞的制备方法及应用
本专利技术涉及生物学
，进一步设计干细胞技术，具体涉及一种人经血干细胞的制备方法及应用。
技术介绍
宫颈癌是一种常见的恶性肿瘤，已被列为导致女性因癌症死亡的第二大肿瘤，每年约有52,900例新发病例和275,000例死亡。尽管目前针对宫颈癌的预防、诊断和治疗策略有所改善，但晚期患者的5年生存率仍然低至40％，最后导致大量宫颈癌患者死亡。因此，寻找用于治疗宫颈癌的新方法迫在眉睫。目前，许多研究表明干细胞疗法可以作为一种癌症治疗的可选方法。间充质干细胞(MSCs)能自我更新，具有低免疫原性，无致瘤性能分化成脂肪细胞，成骨细胞和软骨细胞。有研究表明MSCs通过影响肿瘤细胞的侵袭，迁移或凋亡，在调节肿瘤的发生和发展中发挥关键作用，然而这些影响仍然存在争议。Li等人证明MSCs促进了肝细胞癌的生长。Ding等人发现卵巢间充质干细胞促进卵巢癌细胞的增殖，成球和集落形成以及肿瘤发生。其他几项研究表明，MSCs在体外对多种癌细胞具有致瘤作用，并被募集到肿瘤部位促进体内肿瘤的生长和发展，如乳腺癌、前列腺癌、肝细胞癌、头颈部肿瘤和胃癌等。相反，一些报道表明MSC抑本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.人经血干细胞用于抑制HeLa细胞增殖的应用。

【技术特征摘要】
1.人经血干细胞用于抑制HeLa细胞增殖的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，该应用是利用添加有5～20％hMBSC-CM的、含有10％FBS的DMEM培养基，对HeLa细胞进行体外培养；所述hMBSC-CM是培养hMBSCs细胞所得的条件培养基。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述hMBSC-CM是通过以下方法制备的：将第3～5代的hMBSCs细胞接种到培养皿中培养，当细胞生长至汇合度超过80％时，将培养基更换为含1％双抗的DMEM无血清培养基，继续培养48h后收集细胞培养上清，1000rpm离心5min，收集上清液用超滤浓缩管浓缩10倍，即得到hMBSC-CM。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，该应用是将HeLa细胞与hMBSCs细胞按1:1～1:2的细胞数量比混合后共培养。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述共培养是在含10％FBS的DMEM培养基中进行的，其中，HeLa细胞与所述含10％FBS的DMEM培养基的比例为：每1.5×105个HeLa细胞对应3mL所述含10％FBS的DMEM培养基。6.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于，用于共培养的HeLa细胞和hMBSCs细胞，是经以下步骤处理后的产物：将HeLa细胞、hMBSCs细胞分别用胰蛋白酶消化，而后以含体积浓度10％胎牛血清的DMEM培养基分别终止消化，分别离心，所得细胞沉淀分别用PBS清洗。7.根据权利要求2～5任一项所述的应用，其特征在于，所述hMBSCs细胞是通过以下方法制备的：1)收集健康的月经期妇女的月经血样，用抗生素处理1～2h；2)将8mL经血与4mLFicoll-Paque混合，1800rpm离心20min；3)离心结束后，样品分成三层，移除上层，收集中间层细胞用PBS洗涤，离心去上清，加入7～8mL经血干细胞培养基，接种于细胞培养皿中，置于5％CO2、95％湿度、37℃培养箱中培养；所述经血干细胞培养基的配置方法如下：在无菌容器中加入340mLα-MEM、50mL胎牛血清、5mL浓度为200mM的L-谷氨酰胺、5mL含10000U/mL苄青霉素纳和10000μg/mL链霉素的双抗、90mLChangMediumB、10mLChangMediumC...

【专利技术属性】
技术研发人员：李婧嫄，
申请(专利权)人：东华理工大学，
类型：发明
国别省市：江西,36