基因组编辑方法技术

经基因组编辑的细胞或非人生物的制造方法，包括将(a)基因组编辑对象区域的两端的人工核酸酶系统、和(b)单链DNA导入细胞或非人生物的工序，所述(b)单链DNA包含从5′侧开始以5′侧同源臂序列、供体DNA序列、3′侧同源臂序列的顺序配置的碱基序列，所述5′侧同源臂序列是所述基因组编辑对象区域外侧的一边的碱基序列的同源序列，且所述3′侧同源臂序列是所述基因组编辑对象区域外侧的另一边的碱基序列的同源序列。

Genome editing methods

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】基因组编辑方法
本专利技术涉及基因组编辑方法等。
技术介绍
基因改变小鼠被全世界的研究者用于在个体水平上分析基因功能。特别是条件性敲除小鼠能够细胞组织特异地和时期特异地控制基因表达，因此是最被广泛利用的基因改变小鼠之一。条件性敲除小鼠通过整合有Cre表达盒的“Cre小鼠”和以loxP序列夹着靶标基因或其一部分的“flox小鼠”交配而制作。该Cre小鼠、flox小鼠的制作中，将到目前为止主要利用小鼠ES细胞，或通过将其一部分、Cre表达盒对ES细胞同源重组而敲入后，将所得的细胞注入小鼠胚泡中，将该胚移植到假孕雌小鼠中，经由嵌合小鼠制作Cre小鼠、flox小鼠。但是，利用ES细胞的同源重组需要熟练的知识和技术，因此仅重组ES细胞的建立就需要数月。另外由于经由嵌合小鼠，所以最终制作条件性小鼠需要1～2年。近年来，随着新的基因组编辑技术CRISPR/Cas系统的出现，能够不利用ES细胞地用受精卵更简便地进行基因改变。通过受精卵中注入CasmRNA和指导RNA，指导RNA与靶标部位结合，在该结合部位被诱导的Cas蛋白质将DNA进行双链切断，结果能够在作为靶标的基因中导入突变。这时，通过将单链寡本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种经基因组编辑的细胞或非人生物的制造方法，包括将(a)切断基因组编辑对象区域的两端的人工核酸酶系统、和(b)单链DNA导入细胞或非人生物的工序，所述(b)单链DNA包含从5′侧开始以5′侧同源臂序列、供体DNA序列、3′侧同源臂序列的顺序配置的碱基序列，所述5′侧同源臂序列是所述基因组编辑对象区域外侧的一边的碱基序列的同源序列，且所述3′侧同源臂序列是所述基因组编辑对象区域外侧的另一边的碱基序列的同源序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.11.28 JP 2016-2299761.一种经基因组编辑的细胞或非人生物的制造方法，包括将(a)切断基因组编辑对象区域的两端的人工核酸酶系统、和(b)单链DNA导入细胞或非人生物的工序，所述(b)单链DNA包含从5′侧开始以5′侧同源臂序列、供体DNA序列、3′侧同源臂序列的顺序配置的碱基序列，所述5′侧同源臂序列是所述基因组编辑对象区域外侧的一边的碱基序列的同源序列，且所述3′侧同源臂序列是所述基因组编辑对象区域外侧的另一边的碱基序列的同源序列。2.根据权利要求1所述的方法，所述人工核酸酶系统是CRISPR/Cas系统。3.根据权利要求1或2所述的方法，将所述人工核酸酶系统和所述单链DNA通过电穿孔法导入所述细胞或非人生物。4.根据权利要求3所述的方法，所述供体DNA序列包含2处重组酶识别序列，所述人工核酸酶系统和所述单链DNA的导入对象是包含重组酶表达盒的受精卵。5.根据权利要求1～4的任一项所述的方法，所述5′侧同源臂序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：真下知士，宫坂佳树，
申请(专利权)人：国立大学法人大阪大学，
类型：发明
国别省市：日本,JP