【技术实现步骤摘要】
一种神经元冻存液的制备方法
本专利技术属于组织细胞培养
，具体涉及一种神经元冻存液的制备方法。
技术介绍
在围绕神经系统的研究中，神经元的原代分离培养是非常重要的体外研究，用于研究神经细胞的各种生理功能，由于神经组织获得的局限性，关于神经元原代分离主要是在啮齿类哺乳动物上进行。例如，常用于神经元原代分离的啮齿类动物有胎鼠、新生鼠。然而由于神经元细胞缺乏增殖能力，一次原代分离后，在体外不适宜长期存活、生长、分化，不利于研究的顺利进行；此外，对于原代神经元来说，其对外界环境尤为敏感，不良刺激后极易死亡，所以神经组织的原代细胞体外实验中，一般都是现用现分离新鲜组织培养，这就导致了在研究原代神经元时，由于研究目标取材的限制，例如胎鼠、新生鼠获取的不易、周期较长，综合导致研究周期成本的增高。细胞冷冻技术作为一种保存细胞的有效方法在生物学领域已深入广泛的应用。研究人员经常需要冷冻细胞并保存，以供后续实验或临床使用。传统的低温冷冻保存技术是将二甲亚砜和血清中加入细胞混悬液后放入冻存管中，于-80℃冰箱慢慢冷冻后，将冻存管置于液氮中保存，使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性...
【技术保护点】
1.一种神经元冻存液的制备方法，其特征在于，所述神经元冻存液的制备方法包括以下步骤：取样：取离体哺乳动物的神经组织，剪碎后置于第一离心管中以800～1200rpm离心4～6min，去除离心上清液；消化：向所述第一离心管中加胰酶，将所述第一离心管中的沉淀细胞吹开，抽出沉淀细胞置于消化培养皿中，向所述消化培养皿中追加胰酶，将所述消化培养皿放置于37℃培养箱中8～12min后，向所述消化培养皿中加入种植培养基终止消化；制备细胞悬液：将所述消化培养皿中的混合物经细胞筛过滤后，加入第二离心管中，以800～1200rpm离心4～6min，离心后去除上清液，制得原代神经元；冻存：将所述原...
【技术特征摘要】
1.一种神经元冻存液的制备方法，其特征在于，所述神经元冻存液的制备方法包括以下步骤：取样：取离体哺乳动物的神经组织，剪碎后置于第一离心管中以800～1200rpm离心4～6min，去除离心上清液；消化：向所述第一离心管中加胰酶，将所述第一离心管中的沉淀细胞吹开，抽出沉淀细胞置于消化培养皿中，向所述消化培养皿中追加胰酶，将所述消化培养皿放置于37℃培养箱中8～12min后，向所述消化培养皿中加入种植培养基终止消化；制备细胞悬液：将所述消化培养皿中的混合物经细胞筛过滤后，加入第二离心管中，以800～1200rpm离心4～6min，离心后去除上清液，制得原代神经元；冻存：将所述原代神经元与冻存液混合后制得冻存细胞液，将所述冻存细胞液置于冻存管中，于-20℃冰箱内冷冻1.0～2.0h后于-80℃冰箱内冷冻；复苏：将所述冻存管快速置于37℃水浴中速溶，将融解后的所述冻存细胞液以800～1200rpm离心4～6min，离心后去除上清液，制得冻存后神经元，将所述冻存后神经元转入种植培养基或复苏培养基培养；所述神经元冻存液、所述种植培养基以及所述复苏培养基中均不含有谷氨酰胺。2.根据权利要求1所述的神经元冻存液的制备方法，其特征在于，所述神经组织包括海马组织、大脑皮层、大脑组织中的任意一种。3.根据权利要求2所述的神经元冻存液的制备方法，其特征在于，在所述冻存步骤之前，还包括以下步骤：将所述原代神经元与所述种植培养基混合，以800～1200rpm离心4～6min，离心后去除上清液。4.根据权利要求2所述的神经元冻存液的制备方法，其特征在于，所述复苏步骤中，将冻存后神经元转入复苏培养基培养前，还包括以下步骤：将冻存后神经元与复苏培养基混合，以800～...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭安臣，王群，王拥军，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京天坛医院，
类型：发明
国别省市：北京,11
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