Hr基因经遗传修饰的非人动物或其子代的制备方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种Hr基因经遗传修饰的非人动物或其子代的制备方法，根据所述方法制备的非人动物或其子代体内不表达HR蛋白或表达的HR蛋白不具有功能，且能够表现出无毛的表型。

Preparation and application of genetically modified non-human animals or their offspring of Hr gene

【技术实现步骤摘要】
Hr基因经遗传修饰的非人动物或其子代的制备方法及应用
本申请涉及基因改造动物模型的建立方法及应用，具体而言，涉及基于一种Hr基因功能缺失动物模型的构建方法及其在生物医药研究中的应用。
技术介绍
小鼠生理过程与人类相似，基因组98％与人类同源，很多小鼠的疾病模型可以基本上真实的模拟人类疾病的发病过程和对药物的反应，因此各种人源化免疫缺陷型小鼠已经成为在医学领域尤其是肿瘤研究过程中常规的、重要的研究工具。目前公认的免疫缺陷程度最高的小鼠模型为NODSCIDIl2rg-/-小鼠，包括美国杰克逊实验室(JacksonLaboratory)的NSG，日本中央实验动物研究所(CentralInstituteforExperimentalAnimals)的NOG、深圳市体内生物医药科技有限公司的NSI以及北京百奥赛图生物技术有限公司的B-NDG，其中NSG和NOG经过遗传杂交和多代回交获得，背景不纯，实验结果可重复性差。此外，有关文献和资料也指出，NSG和NOG小鼠均存在一定程度的功能性T、B、NK细胞残留。NSI是使用NODSCID背景小鼠，利用TALEN技术上对Il2rg基因敲除6个碱基，并插本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种Hr基因经遗传修饰的非人动物或其子代的制备方法，其特征在于，所述动物体内的细胞、组织或器官中不表达HR蛋白或表达的HR蛋白不具有功能。

【技术特征摘要】
2018.02.26 CN 20181016313431.一种Hr基因经遗传修饰的非人动物或其子代的制备方法，其特征在于，所述动物体内的细胞、组织或器官中不表达HR蛋白或表达的HR蛋白不具有功能。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，删除所述动物Hr基因的全部或部分序列或向Hr基因座插入序列产生了移码突变。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，删除所述动物Hr基因的第2内含子至第7内含子的全部或部分序列，或者，向Hr基因座插入序列产生了移码突变。4.根据权利要求1-3任一所述的制备方法，其特征在于，所述非人动物或其子代遗传背景是免疫缺陷的；优选的，所述的非人动物或其子代为免疫缺陷的啮齿类动物；更优选的，所述的非人动物或其子代为免疫缺陷的小鼠。5.根据权利要求1-4任一所述的制备方法，其特征在于，使用基因编辑技术进行Hr基因改造动物的建立，所述基因编辑技术包括基于胚胎干细胞的DNA同源重组技术、CRISPR/Cas9技术、锌指核酸酶技术、转录激活子样效应因子核酸酶技术、归巢核酸内切酶或其他分子生物学技术。6.根据权利要求1-5任一所述的制备方法，其特征在于，使用靶向Hr基因的sgRNA序列删除动物Hr基因的全部或部分序列或向Hr基因座插入序列产生移码突变，使得非人动物或其子代体内HR蛋白不表达或表达的HR蛋白不具有功能；其中，所述sgRNA序列在待改变的Hr基因上的靶序列上是唯一的，且符合5’-NNN(20)-NGG-3’或5’-CCN-N(20)-3’的序列的排列规则；优选的，所述sgRNA靶向5’端靶位点序列如SEQIDNO：1-7任一项所示，3’端靶位点序列如SEQIDNO：8-14任一项所示。7.根据权利要求1-6任一所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)制备获得sgRNA载体；2)将sgRNA载体的体外转录产物和Cas9mRNA进行混合，获得混合液，将混合液注射至小鼠受精卵细胞质或细胞核中，将注射后的受精卵转移至培养液中进行培养，然后移植至受体母鼠的输卵管中发育，得到F0代小鼠；3)将F0代小鼠利用PCR技术进行检验，验证细胞中的Hr基因改造成功，获得Hr基因改造阳性非人动物；4)将步骤3)筛选出的阳性动物通过杂交和自交的方式，扩大种群数量，建立稳定的Hr基因改造动物；优选的，所述步骤3)中使用的PCR检测引物对序列如SEQIDNO：24和SEQIDNO：25所示。8.根据权利1-7任一所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包含在经遗传修饰的非人动物或其子代体内进行人免疫系统重建。9.根据权利要求1-8任一所述的制备方法，其特征在于，所述动物用作动物模型；优选的，所述动物模型为荷瘤非人类哺乳动物模型。10.一种根据权利要求1-9任一所述的制备方法产生的Hr基因经遗传修饰的非人动物或其子代。11.一种Hr基因经遗传修饰的细胞株，其特征在于，所述细胞株不表达HR蛋白或表达的HR蛋白不具有功能。12.根据权利要求11所述的细胞株，其特征在于，删除所述细胞株中Hr基因的全部或部分序列或向Hr基因座插入序列产生了移码突变。13.根据权利要求11或12所述的细胞株，其特征在于，删除所述细胞株Hr基因的第2内含子至第7内含子的全部或部分序列，或者，向Hr基因座插入序列产生了移码突变。14.根据权利要求11-13任一所述的细胞株，其特征在于，所述的细胞株遗传背景为免疫缺陷的非人动物或其子代的细胞株；优选的，所述细胞株遗传背景为免疫缺陷的啮齿类动物的细胞株；更优选的，所述的细胞株遗传背景为免疫缺陷的小鼠的细胞株。15.一种制备多基因改造非人动物或其子代的方法，其特征在于，包括如下步骤：a)利用权利要求1-9任一所述的制备方法获得的非人动物或其子代，或者，权利要求10所述的非人动物或其子代；b)将步骤a)获得的动物与其他基因改造动物交配或体外授精或直接进...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈月雷，白阳，黄蕤，尚诚彰，张美玲，姚佳维，郭朝设，郭雅南，
申请(专利权)人：百奥赛图江苏基因生物技术有限公司，北京百奥赛图基因生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32